29一1997前言本標準根據(jù)農(nóng)業(yè)部1993年下達的制定行業(yè)標準蘋果無病毒苗木繁育規(guī)程計劃編制本標準的附錄A、附錄B、附錄標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標準由中國農(nóng)業(yè)科學院果樹研究所、河北農(nóng)業(yè)大學、農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)司、山東省農(nóng)業(yè)廳果茶站、遼寧省農(nóng)業(yè)廳果蠶站負責起草本標準主要起草人:王國平、馬寶餛、史光瑚、孔慶信、孫守友、洪霓。中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準蘋果無病毒苗木29一1997of 用于全國各蘋果苗木產(chǎn)地及栽培區(qū)。2引用標準下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構(gòu)成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。370847果無病毒砧木指用無病毒無性系砧木母本樹材料繁育的無性系砧木或未經(jīng)嫁接的實生砧木。蘋果無病毒苗木指用無病毒接穗和無病毒砧木繁育的蘋果嫁接苗或用無病毒材料通過組織培養(yǎng)方法繁殖的蘋果自31324質(zhì)蘋果綠皺果病毒蘋果花葉病毒蘋果褪綠葉斑病毒蘋果莖痘病毒蘋果莖溝病毒37。中規(guī)定的檢疫對象。847標準的質(zhì)量要求。果類病毒和花葉病毒三種顯性病毒在蘋果樹上有明顯癥狀，可直接在田間進行觀察。漸發(fā)展為凹凸不平畸形果，病部果皮逐漸形成木拴化呈銹色蘋果銹果類病毒銹果型先從頂部出現(xiàn)淡綠色水漬狀斑塊，最后向果梗擴展成栓化銹斑與縱紋?；樞?果實著色后表現(xiàn)紅綠相間花臉狀銹果一花臉復合型呈現(xiàn)有銹斑又有花臉的復合癥狀蘋果花葉病毒斑駁型:從小葉脈開始發(fā)生鮮黃色病斑，形狀不規(guī)則，大小不一。環(huán)斑型病樹葉上產(chǎn)生圓形或橢圓形黃色環(huán)斑花葉f:病斑不規(guī)則，有較大的深綠、淺綠相間色。條斑型:病樹葉片沿葉脈失綠黃化。痘病毒、莖溝病毒三種潛隱病毒和花葉病毒、銹果類病毒可采用木本指示植物檢測法。a)蘇俄蘋果(R 12740檢測蘋果褪綠葉斑病毒;b)司派227(27)或光輝(檢測蘋果莖痘病毒;c)弗吉尼亞小蘋果(檢測蘋果莖溝病毒;d)蘭蓬王(檢測蘋果花葉病毒;e)國光(檢測蘋果銹果類病毒。株葉片較健株葉片小。有的向一側(cè)彎曲呈舟形葉，光輝指示植物上出現(xiàn)葉片反卷，植株矮化。在27指示植物上出現(xiàn)葉片反卷、皮層壞死等癥狀蘋果莖溝病毒只在弗吉尼亞小蘋果上表現(xiàn)癥狀，病株較健株矮小，葉片小而色淡，有的病株嫁接口周圍腫脹，接合部內(nèi)有深褐色壞死環(huán)紋。木質(zhì)部產(chǎn)生深褐色縱向陷條溝，嚴重時從外部即可辨認。片扭曲變形蘋果花葉病毒葉片上產(chǎn)生黃斑、沿葉脈條斑蘋果銹果類病毒彎葉和莖干銹斑、操作步驟分別見附錄，其操作步驟見附錄A,檢驗規(guī)則6門檢驗步驟進行病毒抽樣檢測之前，要檢查無病毒苗圃是否有無病毒苗木生產(chǎn)許可證和無病毒苗木準產(chǎn)數(shù)量證明，并要對其使用的接穗，砧木的來源、數(shù)量，以及苗木類型、數(shù)量進行查核。果無病毒苗木的病毒檢測在無病毒苗木生長期間抽樣進行。病毒檢測方法見本標準第5章。藝性狀的質(zhì)量檢驗按847規(guī)定執(zhí)行。發(fā)現(xiàn)370中規(guī)定的檢疫對象時，按該規(guī)程處理。6. 2抽樣6. 2. 1苗木規(guī)格和檢疫對象的檢驗，其抽樣量分別按847和37。規(guī)定執(zhí)行。殖材料來源于無病毒母本園的苗圃，每畝抽檢10株，每增加1畝增加2株;直接從國外引進的無病毒種苗或砧木原種，每株都需檢測，由此繁育的苗木，B 837。中的檢疫對象，苗木規(guī)格符合847指標要求的為合格，否則為不合格7標志、包裝、1門蘋果無病毒苗木合格證標簽由蘋果病毒檢測管理機構(gòu)監(jiān)制和簽發(fā)。2943,2. 1無病毒苗木需按品種和苗木種類(實生砧嫁接苗、矮砧嫁接苗、矮化中間砧苗、自根苗)分別包裝7. 2. 2包裝內(nèi)外都要掛牌標記，注明品種、苗木種類、數(shù)量及產(chǎn)地名稱。7. 3運輸運輸與普通苗木相同。無病毒苗木要有專人負責保管，以防丟失和調(diào)換，并要有詳細的進出記錄，以備查對。29一1997附錄A(標準的附錄)1包被05 碳酸鹽緩沖液稀釋測工作濃度為1-5 pg/孔1008 后甩干，用4次，每次靜止3-5 孔加100200 8保溫2h，沖洗(方法同上)。入5倍(原提取液，磨碎后4 000 r/上清液，每孔加100200 樣品2個微孔板需同時設陽性、陰性和空白對照4 0法同上)，第一次沖洗液不得溢出。孔100濕和沖洗方法同5加酶標孔100濕和沖洗方法同6，黑暗中室溫放置15止反應每孔加2550 硫酸。結(jié)果判斷以空白對照孔調(diào)“?！?，測定反應液在492 待檢樣品平均吸光值/陰性對照平均吸光值)2視為陽性。附錄B(標準的附錄)指示植物田間檢測法選前一年播種生長整齊一致的砧木實生苗，定植于苗圃中，每行50，株行距不小于15 60 測圃周圍100 02 8月中下旬從待檢樣本樹或待檢苗上剪取一年生枝條，作為待檢接穗，并按待檢樹的品種樹號編號寫好標簽，綁縛在待檢接穗上。每一待檢樣本需有1520個飽滿芽。29一1997為檢測接穗，其飽滿芽數(shù)量相當于待檢接穗的44上述材料準備就緒后，即可進行嫁接，嫁接采用二重芽接法，先把待檢接穗的芽片嫁接在砧木基部，每株嫁接1芽量不足用樹皮亦可)。一株待檢樹上接穗在同一行砧木上嫁接4按待檢樹的編號掛好標牌。芽相距1. 00 一行砧木嫁接同一種指示植物二年苗木發(fā)芽前，在指示植物接芽的上方約1. 05 強肥水管理，及時除萌鋤草和防治病蟲害，要特別注意食葉性害蟲的防治，以免影響檢測結(jié)果。周定期觀察指標植物的癥狀表現(xiàn)，作好觀察記錄，根據(jù)指標植物的癥狀反應，明確待檢樹是否還潛帶病毒。附錄C(標準的附錄)指示植物溫室檢測法植于直徑15 25 為鑒定用砧木。于8月中下旬，將待檢樹芽片芽接在砧苗基部。每一嫁接株按品種編號掛好標簽，花盆移入溫室內(nèi)，溫室溫度白天20間9150C，待砧苗開始萌發(fā)生長后，用芽接法在