016食品安全國家標準食品微生物學(xué)檢驗 016    前  010食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定。0161    食品安全國家標準食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定1 范圍本標準規(guī)定了食品中菌落總數(shù)(測定方法。本標準適用于食品中菌落總數(shù)的測定。2 術(shù)語和定義菌落總數(shù) 一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等)培養(yǎng)后,所得每g(樣中形成的微生物菌落總數(shù)。3 設(shè)備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:溫培養(yǎng)箱:361,301。箱:25。溫水浴箱:461。平:質(zhì)器。蕩器。菌吸管:110微量移液器及吸頭。菌錐形瓶:容量25000菌培養(yǎng)皿:直徑90大鏡或/和菌落計數(shù)器。4 板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基:酸鹽緩沖液:菌生理鹽水: 檢驗程序菌落總數(shù)的檢驗程序見圖1。0162    圖1 菌落總數(shù)的檢驗程序6 體和半固體樣品:稱取25000r/0000r/放入盛有225拍擊式均質(zhì)器拍打1成110的樣品勻液。體樣品:以無菌吸管吸取25內(nèi)預(yù)置適當數(shù)量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成110的樣品勻液。10樣品勻液1管壁緩慢注于盛有9意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),0163    混合均勻,制成1100的樣品勻液。備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用1次1 根據(jù)對樣品污染狀況的估計,選擇2個3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進行10倍遞增稀釋時,吸取1個稀釋度做兩個平皿。同時,分別吸取1 及時將150平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于461恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。瓊脂凝固后,將平板翻轉(zhuǎn),361培養(yǎng)48h2h。水產(chǎn)品301培養(yǎng)72h3h。果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時,可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基(約4凝固后翻轉(zhuǎn)平板,用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器,記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位(示。取菌落數(shù)在3000蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30于300個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數(shù)。平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。7 只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi),計算兩個平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),作為每g(品中菌落總數(shù)結(jié)果。有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時,按式(1)計算:N=C(d(1)式中:N樣品中菌落數(shù);C平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和;第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個數(shù);第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個數(shù);d稀釋因子(第一稀釋度)。示例:稀釋度1100(第一稀釋度)11000(第二稀釋度)菌落數(shù)(32,24433,0164    N=C(d=232+244+33+352+()1004。所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300對稀釋度最高的平板進行計數(shù),其他平板可記錄為多不可計,結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在3000中一部分小于30以最接近30落數(shù)小于100“四舍五入”原則修約,以整數(shù)報告。落數(shù)大于或等于1003位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后,取前2位數(shù)字,后面用0代替位數(shù);也可用10的指數(shù)形式來表示,按“四舍五入”原則修約后,采用兩位有效數(shù)字。所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù),則報告菌落蔓延?？瞻讓φ丈嫌芯渖L,則此次檢測結(jié)果無效。重取樣以積取樣以0165    附 錄 板計數(shù)瓊脂(分胰蛋白胨                                      法將上述成分加于蒸餾水中,煮沸溶解,裝試管或錐形瓶,121高壓滅菌15分磷酸二氫鉀(              法貯存液:大約175蒸餾水稀釋至1000釋液:蒸