1透明質酸鉍的抗幽門螺桿菌及促潰瘍愈合活性研究凌沛學,金艷（山東省生物藥物研究院,濟南250101）摘要目的研究透明質酸鉍（BI3HYALURONATECOMPLEX，BIHA）的抗幽門螺桿菌（HPYLORI）活性和對大鼠實驗性慢性胃潰瘍愈合的影響。方法采用瓊脂稀釋法檢測BIHA對HPYLORI的最低抑菌濃度（MIC）。觀察BIHA對醋酸致大鼠慢性胃潰瘍愈合的影響。采用ELISA檢測大鼠胃部黏膜中的NO含量和表皮生長因子（EGF）表達量，初步探討B(tài)IHA的作用機制。結果BIHA具有與枸櫞酸鉍鉀相近的體外抗菌活性。BIHA能夠促進慢性胃潰瘍的愈合，且能提高潰瘍愈合質量。BIHA促進慢性胃潰瘍愈合的作用機制可能與其增加胃黏膜中EGF的表達有關。結論BIHA具有良好的抗HPYLORI活性和抗?jié)冏饔?，有望開發(fā)為一種新型含鉍藥物，應用于消化性潰瘍疾病的治療。關鍵詞透明質酸鉍；HPYLORI；潰瘍；愈合ANTIHPYLORIANDULCERHEALINGACTIVITYOFABI3HYALURONATECOMPLEXLINGPEIXUE,JINYANINSTITUTEOFBIOPHARMACEUTICALSOFSHANDONGPROVINCE,JINAN250101,CHINAABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHEANTIHPYLORIACTIVITYANDEFFECTONTHEHEALINGOFEXPERIMENTALCHRONICULCERINRATSOFABI3HYALURONATECOMPLEXBIHAMETHODSTHEMICSOFBIHAAGAINSTHPYLORIWERETESTEDBYAGARDILUTIONMETHODEFFECTOFBIHAONHEALINGOFCHRONICGASTRICULCERINRATSINDUCEDWITHACETICACIDWASALSOEVALUATEDTHENOCONTENTSANDEXPRESSIONOFEGFINGASTRICMUCOSAOFRATSWERETESTEDBYELISATOEXPLORETHEACTIONMECHANISMOFBIHARESULTSBIHASHOWEDSIMILARANTIHPYLORIACTIVITYTOTHATOFBISMUTHPOTASSIUMCITRATEBIHACOULDACCELERATETHEHEALINGOFCHRONICULCERANDINCREASETHEQUALITYOFULCERHEALINGTHEINCREASEOFEGFEXPRESSIONINTHEGASTRICMUCOSAMAYBEONEOFTHEULCERHEALINGMECHANISMSOFBIHACONCLUSIONBIHAPOSSESSESFAVORABLEANTIHPYLORIANDANTIULCEROGENICACTIVITYANDMAYBEDEVELOPEDINTOADRUGEXPLOITEDINTHERAPYOFPEPTICULCERDISEASEKEYWORDSBI3HYALURONATECOMPLEXHPYLORIULCERHEALING消化性潰瘍疾病是一種慢性消化G13007G13491疾病，發(fā)病G10587G17751高。研究表明，消化性潰瘍的發(fā)病G1039G16213是胃G13940G17959黏膜的G1417G16001因G13044和G1457G6264因G13044G3845G15925G6164致。幽門螺桿菌（HPYLORI）G5875G7591是G1039G16213的G1417G16001因G13044。鉍G2070因G1872具抗HPYLORI活性和黏膜G1457G6264活性，2因G13792G3324消化性潰瘍的治療中G14731G5483G5203G8879應用。透明質酸（HA）是一種G11013NG1069G18244G8700G3534G14901G12970和G14901G12970G18287酸G2464G12970G18337G3809G2345G1313G5430G6116的G12970G14030G13870G12970，具有G3822種生物活性，G3926G7512G6116G3822種G3534質G451G1457G8712G2462G9082G9381G451G2031G1272愈合G125731。HAG2462其G15905生物G3324G2319藥G20058G3507G14731G5483G5203G8879應用。HA的金G4658G18209合物近G5192G7481G1075G2475G2052G1166G1216的G18337G16282。G7424G7003對HA與BI3G5430G6116的G18209合物透明質酸鉍的抗HPYLORI活性G2462促潰瘍愈合作用進G15904G1114研究。1材料和方法11G1214G3132與G7460G7021G17241G1940G5049作G2500（濟南G8917G5259G12366G8680G1940化G16786G3803G2390）；生化G3533G1871G12677（G2283G1152G5078G8716G1821明G2319療G1214G3132G2390）；T801NETZGERT型G11017G2172G2260G8986G3132（G5515G3281IKAWERKE）；MULTISKANMK3G18250G7643G1214（G14464G1860THERMOLABSYSTEMS）。透明質酸鉍（BIHA，G14270制，鉍含量為2560G705）；枸櫞酸鉍鉀（BPC，G1041G10676G2319藥G19610G3254G13941G1233有G19492G1856G2508）；G2745G1274G8616G1134瓊脂G3533G1871G3534（G14533G3281OXOIDG1856G2508）；G18250G13864G1825G11135G16809G2070G11430（G13666G3281RAPIDBIOG1856G2508）。HPYLORIG3281際G7643準株NCTC11637G45126695和J99（中G3281疾病預防控制中心提供）；WISTAR大鼠，體，G1872用（山東大學新藥評價中心）。12方法121BIHA的體外抗HPYLORI活性研究2按瓊脂稀釋法測定BIHA的MIC值。以BPC作為對照。將待測樣品溶于無菌蒸餾G8712中，按2倍連續(xù)稀釋。將樣品稀釋液加入含5G705羊血的G2745G1274G8616G1134G3533G1871G3534中，振搖均G2260，傾倒入無菌平皿中，制G3803鉍含量為2580GML1的G13007列血平板。將HPYLORI菌株NCTC11637G45126695和J99接種于血平板上，菌株接種液濃度為1107菌落G5430G6116G2345G1313（CFU）ML1。37CG451微需氧條件下G3533G187172H后觀察菌落的生長情況。以待檢樣品抑制HPYLORI可見生長的最低濃度作為MIC。122BIHA對大鼠慢性胃潰瘍愈合的影響3大鼠禁食36H，G14270G11013飲G8712。將40的醋酸溶液60L注入內(nèi)徑6MM的玻璃管，將其緊貼于胃前壁幽門上方1CM處的G8986膜表面90S。用棉簽蘸去醋酸液后撤去玻璃管。該法造G6116醋酸使用區(qū)G3507黏膜G2462黏膜下層的立即壞死。3D后G5430G6116潰瘍。將大鼠隨機分為3組，于潰瘍G5430G6116后第1日開始給藥，每日給藥1次，連續(xù)給藥10D（分組G2462給藥G2070量見表1）。各組分別于給藥5DG246210D后處死69只G2172物，測量潰瘍面積S，作為潰瘍指數(shù)。S的計算方法為測量通過潰瘍中心的最大縱徑（D1）和最大橫徑（D2），用下列G18563式進G15904計算SD1/2D2/2。將給藥10D的各組G2172物胃部潰瘍部分（或潰瘍愈合部分）送病理檢測。A11A0A2A3A4A5A6A7A8A9TAB1ANIMALGROUPSANDDOSEOFADMINISTRATIONA3A4A10A11A7A2A6A7A8A9A12A13A14A15A4BPC45MGKG1A16A17BIA9BIHAA4BIHA45MGKG1A16A17BIA9A18A19A14A15A4NS10MLKG1123大鼠胃黏膜中的NO和EGF含量測定按122項下方法制作慢性胃潰瘍模型。將36只大鼠隨機分為3組，分別為陽性對照組（口服BPC）G451BIHA組（口服BIHA）G2462陰性對照組（口服NS）。按表1G2070量于潰瘍G5430G6116后第1天開始給藥，每日給藥1次，連續(xù)給藥10D。于給藥5DG246210D后每組分別處死6只G2172物。摘取G2172物胃部的潰瘍G2462其周圍組織，70C冷凍G1457存。將胃組織表面的黏膜用手術G2004G10267G2050下，加入G33244C預冷的PBS（001MOG79L1，PH74）15ML，用G11017G2172G2260G8986G3132進G15904G2260G8986。將組織G2260G8986液于10000RG22109MIN1G12175心10MIN，G5335去G8797G9108物，G2572取上G9177。用G18250G13864G1825G11135G16809G2070G11430檢測組織G2260G8986液中NOG451EGF的含量。124G13491計分G7524實驗數(shù)G6466以SX表G12046，G3822組G19400G8616G17751采用方G5058分G7524，G1016組G19400G8616G17751采用T檢驗進G15904G13491計分G7524。2結果21MIC測定G13479G7536G13479G7536見表2。A202BIHAA21MICA22A23A24A25TAB2MICOFBIHAMICA26ML1,A27A28A29A30NCTC1163726695J99BIHA555BPC555G1186G13479G7536可G11487G1998，BIHA對G989種HPYLORIG3281際G7643準株的MIC值與BPC相G2528，4均為5GML1（按鉍量計算）。G322BIHA對潰瘍面積的影響B(tài)IHA和BPC對潰瘍面積的作用見表3。給藥5D后即觀察G2052BIHA組G2172物的潰瘍面積G4579于模型對照組（PG728005）。BPC組G2172物的潰瘍面積與模型對照組相G8616G8821有G7186G14891G5058別（PG730005）。給藥10D后，BIHA組的潰瘍面積明G7186低于模型對照組（PG728001），表明BIHA能促進慢性胃潰瘍的愈合。BPC組的潰瘍面積G1146G4579于模型對照組（PG728005），表明BPCG1146能促進潰瘍愈合。BIHA組的潰瘍面積G4579于BPC組（PG728005），表明BIHA的促潰瘍愈合作用G5390于BPC。A313BIHAA32BPCA33A34A35A36A37A38A39A40A41A42A37A38A43A44A45A46A47A48SXA49TAB3EFFECTSOFBIHAANDBPCONULCERAREAOFANIMALSWITHCHRONICULCERSXA50A51A52A53A54A55/MM2A56A575DA56A5710DBPC105295552081BIHA654328135209823A58A59A60A61A501695963986576A62A63A64A58A59A60A61A50A65A66A671PA68005A672PA68001A69A64BPCA50A65A66A673PA68005NOTE1PA68005,2PA68001,VSCONTROL3PA68005,VSBPCGROUP23病理學G16798G7041G13479G7536AB5CDA70A71A72A73A74A75A76A73A77A78A79A80A81A82100A83AA84A85A86A87A88BA89A90A91A92A93A94CBIHAA93A94DBPCA93FIG1PATHOLOGICALSECTIONOFSTOMACHOFDIFFERENTGROUPS100ASECTIONOFSTOMACHOBTAINEDFROMNORMALRATSBSECTIONOFULCERATEDSTOMACHOBTAINEDFROMCONTROLGROUPCSECTIONOFULCERATEDSTOMACHOBTAINEDFROMBIHATREATEDGROUPDSECTIONOFULCERATEDSTOMACHOBTAINEDFROMBPCTREATEDGROUPG32821為G8503G5132大鼠G2462慢性胃潰瘍模型大鼠的胃部組織病理G2011G10267G7186微照G10267。G8503G5132大鼠胃組織胃黏膜上皮G4448G6984，G3278有膜內(nèi)G14158體G6502列G6984G21796。模型對照組G2172物部分胃G4579G1997上皮大G10267G10378G13582G3845，潰瘍表面可見G2414層G9826性G9195G1998G2462壞死組織。部分G2172物G3278有膜內(nèi)G14158體G6205G5364或G5430G6116G3230G10378。G9826G13466G14002G9036G9082明G7186。BPC組G2172物病理學G10317G5461與模型對照組G2172物相近，組織學G6925G2476G17743于模型對照組。BIHA組G2172物部分胃G4579G1997上皮G4579G10267G10378G13582G3845，潰瘍表面可見G4579G9802G10378G9826G13466G14002，潰瘍G17805G13548處可見增生的黏膜上皮G2533潰瘍部分G5322G1292?？梢奊6967G3324G9826G13466G14002G9036G9082。組織學G6925G2476明G7186G17743于模型對照組。G1186病理G16798G7041G13479G7536可G11487G1998，BIHA能明G7186G1955G17743潰瘍造模手術對胃組織造G6116的G6451G1272，G5194能G7186G14891提高潰瘍愈合質量。24NO和EGF含量測定G13479G7536表4為各組G2172物胃黏膜中NO含量檢測G13479G7536。G1186G13479G7536可G11487G1998，給藥5D后，各組G2172物胃黏膜中的NO含量相近。給藥10D后，BPC組G2172物胃黏膜中NO含量明G7186高于模型對照組（PG728005），BIHA組與模型對照組G2172物胃黏膜中NO含量均G3250落G14279接近G8503G5132G8712平。6A954A96A97A98A99A100A101A102NOA103A104TAB4CONTENTSOFNOINGASTRICMUCOSAOFRATSINDIFFERENTGROUPSA97A105NOA103A104/MOLMGA106A107A1081A109A1105DA109A11010DBPC2519615287911071BIHA23224552036506A111A112A113A114A9725223781791256A115A1161814364A117A118A119A111A112A113A114A97A120A121A1221PA123005NOTEA1241PA123005,VSCONTROLA1255A126A127A128A129A130A131A132EGFA133A134A135TAB5EXPRESSIONOFEGFINGASTRICMUCOSAOFRATSINDIFFERENTGROUPSA127A136EGFA133A134A135/PGMGA137A138A1391A140A1415DA140A14110DBPC12707416611502262BIHA1363533221331424081A142A143A144A145A12712228344210916933A146A1479651212A148A149A150A142A143A144A145A127A151A152A1531PA154005NOTEA1551PA154005,VSCONTROL表5為各組G2172物胃黏膜中EGF表達量檢測G13479G7536。G1186G13479G7536可G11487G1998，給藥5D后，BIHA組G2172物胃黏膜中EGF的表達量G11065高于模型對照組，BPC組G2172物胃黏膜中EGF表達量與模型對照組相近。給藥10D后，BIHA組G2172物胃黏膜中EGF表達量明G7186高于模型對照組（PG728005），BPC組G2172物胃黏膜中EGF表達量與模型對照組相近。3討論潰瘍是G1313于食管G451胃G451G2325G1120指G13940或G13940壁的G13059G2462黏膜G451黏膜下層和G13920層的G9157度G13582G6451。潰瘍愈合的過G12255G2325分G3809G7446，G2265G6336壞死物的G9177G19512，G3534G5225部長G1998G13917G14481組織G451進G13792G5430G6116G13432G13512組織和G11254G11177組織，血管的生長，G2345層G7621G10378上皮的長入G12573過G12255。G8504過G12255中G1262有一G13007列G13466G14002和分子機制的G2454與4。TARNAWSKIG125735G20330G1820提G1998G1114潰瘍愈合質量（QUALITYOFULCERHEALINGA156QUHA157的G8022G5577。潰瘍愈合質量觀G9869G16760為潰瘍愈合G993G1177需G16213G13582G3845組織的G1889上皮化G1474G3809，G7368需G16213上皮下組織G13479G7512的G1474G3809G18337G5326。評價潰瘍愈合G9937G1177G16213G3324內(nèi)G19248或G11464G16282下觀察，G13792且G16213對上皮下組織G13479G7512的G18337G5326情況進G15904G1114G16311；G993G1177G16213評價G1889生組織的G13479G7512G6116G10099度，G1075應G18337G16282其G2163能G6116G10099度，G5194G6238潰瘍愈合質量的好壞與G7422G7481潰瘍G3809發(fā)G13864G13007G17227G7481。G7424G7003通過組織病理學分G7524對各組G2172物的潰瘍愈合質量進G15904G1114評價。G1186外觀G11487，給藥10D后，各組G2172物潰瘍G3822數(shù)G5062愈合，G1306G1186病理檢測G13479G7536可G11487G1998，各組G2172物胃組織G1185存G3324G993G2528G12255度的組織學G6925G2476。其中，以模型對照組G2172物胃部的組織學G6925G2476最為G1017G18337。BPC組G2172物胃部的組織學G6925G2476G12257G17743。G13792BIHA組G2172物胃部組織學G6925G2476明G7186G17743于模型對照組，且其潰瘍愈合質量G1260于BPC組G2172物。內(nèi)G9316性NO是G11013NO合G18250G1664化LG12946G8700酸G7423G12483胍G3534中的一個G8700原子氧化G13792生G6116。胃黏膜中NO的生物活性具有G2464G18337性，一方面，NO可以G6205G5364血管G451增加血流量G451G1955少G13466G14002G6451G1272，G17227G2052G1457G6264黏膜的作用，另一方面，過G3822的NO可G5430G6116G14270G11013G3534，G6451G1272黏膜G13466G14002，加G18337潰瘍6。實驗G13479G7536G7186G12046，給藥10D后，BPC組胃黏膜中NO含量明G7186高于模型對照組。異G5132增高的NO量，可能G1262加G18337潰瘍部分的G9826癥反應，加G18337組織G6451害。與BPC相G8616，BIHA對NO量幾無影響。EGF是目前G16760識最G3822的促進潰瘍愈合的生長因子。EGF與其G2475體（EGFR）G3324內(nèi)皮G13466G14002增殖G451遷移G451上皮G1889G5430G6116和胃部G14158體G18337G5326過G12255中G17227著G18337G16213作用7。實驗G13479G7536G7186G12046給藥10D后，BIHA組G2172物胃黏膜的EGF表達量明G7186高于模型對照組。提G12046BIHA的促潰瘍愈合作用可能與其增加EGF的表達量有關。B