1、全自動(dòng)生化分析儀的校準(zhǔn)一、校準(zhǔn)的重要性和必要性首先必須明確生化分析儀不論如何先進(jìn)，它還是一個(gè)比較器，它測試出來的標(biāo)本結(jié)果是 隨著標(biāo)準(zhǔn)限的設(shè)置不同而變化的。所以，在衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心擬定的“臨床實(shí)驗(yàn)室（定 量測定）室質(zhì)控工作指南”中明確指出“對測定標(biāo)本的儀器一定要求進(jìn)行校準(zhǔn)，校準(zhǔn)時(shí)要選 擇合適的（配套的）標(biāo)準(zhǔn)品/校準(zhǔn)品；如有可能，校準(zhǔn)品應(yīng)能溯源到參考方法或/和參考物 質(zhì)；對不同的分析項(xiàng)目要根據(jù)其待性確立各自的校準(zhǔn)頻率?！边@說明校準(zhǔn)儀器是室質(zhì)控的重 要部分，強(qiáng)調(diào)了校準(zhǔn)工作的必要性和重要性，同時(shí)指出了校準(zhǔn)的方法和要求。二、確立測定系統(tǒng)的概念對于一個(gè)臨床檢測項(xiàng)目，如果所用方法的測定原理、試劑、儀器、校

2、準(zhǔn)品中任何一個(gè)不 同，都可能得到不同的測定結(jié)果。因此，測定系統(tǒng)包括測定原理、試劑、儀器、校準(zhǔn)品四 要素。如果我們想要得到準(zhǔn)確可靠的測定結(jié)果，而該結(jié)果又具有與國際、國其他實(shí)驗(yàn)室的可 比性，應(yīng)該自己建立一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)測定系統(tǒng)。在全自動(dòng)生化分析儀上使用配套的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品， 即日立7170使用寶靈曼的試劑和校準(zhǔn)品（,在貝克曼CX-7生化分析儀上使用貝 克曼的試劑和校準(zhǔn)品等。各儀器廠家均有自己的標(biāo)準(zhǔn)測定系統(tǒng)。對于校準(zhǔn)品不能亂用，如 絕對不能用貝克曼的校準(zhǔn)品校準(zhǔn)日立生化儀，同樣也不能用寶靈曼的校準(zhǔn)品去校準(zhǔn)貝克曼生 化儀。三、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品校準(zhǔn)品（Calibration materials）含有已知量的欲測物，用

3、以校準(zhǔn)該測定方法的數(shù)值, 它與該方法及試劑、儀器是相關(guān)聯(lián)的。校準(zhǔn)品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成 的系統(tǒng)誤差。因此最好為人血清基質(zhì)，以減少基質(zhì)效應(yīng)造成的誤差。質(zhì)控品（Control materials）只用于和待測標(biāo)本同時(shí)測定的，為了控制標(biāo)本的測定誤差， 因此要求保存時(shí)間十分穩(wěn)定。前者是校準(zhǔn)其值而后者是控制誤差用的。四、校準(zhǔn)前準(zhǔn)備1 . 了解燈泡已使用多久？檢查飄移是否合乎要求；2. 檢查比色杯的清潔及磨損情況？必要時(shí)進(jìn)行更換；3. 用清潔劑泡洗管道4. 測定儀器的精密度及線性是否達(dá)到儀器性能要求？五、定值質(zhì)控血清是否可以校準(zhǔn)儀器？我們在相同條件下，同時(shí)用五個(gè)進(jìn)口產(chǎn)品，每家兩種不同濃度

4、的定值如TP、ALB、UREA、UA、ALP、GGT、CK、HBDH、LD、AMY等，在日立7170A上進(jìn)行測定（用常規(guī)試劑），詳見質(zhì)控血清對部份常規(guī)測定項(xiàng)目(如T、ALB、UREA. Cr. UA. K. Na. Cl. AST. ALT)結(jié)果與靶值比較：表不同廠家定值質(zhì)控對TP、ALB. . AST. ALP結(jié)果與靶值比較TPALBUREAASTALPT偏差T偏差T偏差§T偏差T偏差汽巴康寧1574.392905.04.543-10.5964.2汽巴廉寧2464.89242.019.3-5.76184-11.72650.2寶靈曼1502.0:18-5.n8.960.4558.3-

5、11.22422. 7寶靈曼24862.8337-5.0424-6.77140-12.33842. 7RANDOX15976.364083.87.674.362-17.7211-161RANDOX2398.332695.9B21.6-5.67144-12.7394-171Human1724. 1467_4183.785. 133.5-7.5163-2.2Human2298-2.68298-2.76251-5.08151-11.7287-9.1Bio-Redl630391.27.1024-14.62522Bio-Red2421.7927018.0-4.1 120I-14329s0.84*從總蛋白

6、結(jié)果來看RANBOX與Bio-Red相差為6. 45%,而寶靈曼與Bio-Red較為接 近；*從白蛋白結(jié)果分析，寶靈曼與Bio-Red相對相差5. 75%t與總蛋白結(jié)果明顯不同。Bio-Re d則與汽巴康寧比較接近。* UREA結(jié)果中凡是高值均上不去，分析其原因很可能與我們釆用試劑盒的質(zhì)量有關(guān)，所以 試劑盒的線性圍理應(yīng)成為選擇試劑盒的重要依據(jù)之一。但從低值結(jié)果分析，也有5%的偏差(Bio-Red 與 Human)* AST與ALT測定值均低于靶值，這就涉及我們選用什么K值問題。* ALP測定中RANDOX (-16.6%)與寶靈曼(2.7%)靶值之間竟相差19. 3%,這可能涉及試劑 盒選用緩

7、沖液種類，PH值以及所用£值等有關(guān)。通過上述結(jié)果比較，說明不同廠家生產(chǎn)的定值質(zhì)控血清靶值之間有的相差較大，提示 我們決不能用定值質(zhì)控血清代替校準(zhǔn)品作校準(zhǔn)用。六、校準(zhǔn)方法例如日立(Hitachi)系列您必須購買寶靈曼(Boehringer)的試劑及其校準(zhǔn)的說明書設(shè)置 參數(shù)，用校準(zhǔn)血清進(jìn)行校準(zhǔn)，即可荻得各項(xiàng)目的校準(zhǔn)K值，同時(shí)觀察一下各項(xiàng)目 測定時(shí)反應(yīng)進(jìn)程圖，檢查各項(xiàng)目參數(shù)設(shè)置是否在最佳位置，如不在最佳位置應(yīng)予以重新設(shè)置 并測定。此時(shí)得到的K值即為準(zhǔn)確的校準(zhǔn)K值，然后測定待測的10至20份新鮮血清三次 取其平均值，應(yīng)該說此結(jié)果是用Hitachi-Boehringer檢測系統(tǒng)所獲的測定值。然

8、后用此血 清值校準(zhǔn)其它測定系統(tǒng)。表日立7170、BM試劑連續(xù)四個(gè)月每天進(jìn)行校正(n=81)K值的變化TAAACrUUTCGCGCK P LB LT ST ea rea A G hoi lu aGTM36321 1211I15382ean017940232747566735432721197449264603S866414511115616D6939.7480.26. 15.97.48.46.8117.9C21219.1111191.6V%80178.914.2.069七、關(guān)于酶活性測定校準(zhǔn)問題有的主不進(jìn)行校準(zhǔn)而采用固定K值,有的作者以為應(yīng)該進(jìn)行校準(zhǔn)。酶活力計(jì)算公式如下:酶活力(u/1) =AA

9、/minXVX 106/( e XvXl)令 k=VX 106/ ( £ Xv；則酶活力(u/1) =AA/minXk常用K值有以下幾種：a) 理論K值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)(£)來計(jì)算，如NADH為6.22X103b) 實(shí)測K值：由于儀器波長的精密及半寬度不同，而應(yīng)根據(jù)實(shí)測e值來設(shè)定K值c) 廠家給的K值：廠家生產(chǎn)試劑盒說明書上提供的K值(有的廠家提供6.3X103)d) 校準(zhǔn)K值：通過校準(zhǔn)物直接校準(zhǔn)得到的K值在日立7170A全自動(dòng)生化分析儀上，可以得到幾種不同的酶K值，見下表表日立7170A全自動(dòng)生化分析儀上用不同方法得到幾種酶的K值指示物波長理論K值實(shí)測K值校準(zhǔn)K值A(chǔ)

10、LTNADH340nm24442642 (8. 1$)3026 (23.8%)ASTNADH340nm24442642 (8. 1%)2775 ( 13. 5%)CKNADPH340nm38783878 (8. 1%)3886 (8.3%)GGT4NA405mm14181539 (8.5%)1612 (13.7%)GGT4NB405mm14751739 (17.9%)ALP4NA (PII10)405mm757825 (8.9%)注：1校準(zhǔn)物為寶靈曼c(diǎn). f. a.s,試劑也用寶靈曼的配套試劑。2括號(hào)數(shù)字是該K值與理論K值相比的變化率以上摘自克堅(jiān)文章中*從上述K值中不難發(fā)現(xiàn)實(shí)測K值大于理論K值

11、，這說明生化分析儀的測光系統(tǒng)還存在 著一定誤差，如波長、半寬度及光徑等偏差，使儀器達(dá)不到理論上的最佳狀態(tài)；*校準(zhǔn)K值與實(shí)測K值之間也存在一定的差距，即使指示物和儀器相同，其差異可能由試劑 及校準(zhǔn)品造成的；*作者認(rèn)為最好使用校準(zhǔn)K值，但必須由兩個(gè)先決條件：1必須使用配套的試劑；2必須使 用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，但校準(zhǔn)K值應(yīng)有其溯源性。關(guān)于酶活標(biāo)準(zhǔn)品，歐洲標(biāo)準(zhǔn)局（BCR）和美國國家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院（NIST）均發(fā)表了人 血清基質(zhì)的酶活性標(biāo)準(zhǔn)物，相信不久將會(huì)有公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)（校準(zhǔn)）品問世。八、必須擬訂校準(zhǔn)計(jì)劃（文件）校準(zhǔn)工作不是僅進(jìn)行一次就可萬事無憂一勞永逸，而必須經(jīng)?；０凑?quot;臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì) 量控制（QC）的要求（草案）”必須要求擬定校準(zhǔn)計(jì)劃，其容包括：1.建立校準(zhǔn)方法選擇合適（配套）的校準(zhǔn)品，包括校準(zhǔn)品數(shù)目、類型和濃度；如有可能校準(zhǔn)品應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì)；確定校準(zhǔn)的頻度。至少每六個(gè)月進(jìn)行一次校準(zhǔn)；如有下列情況發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)*改變試劑的種類，或者批號(hào)更換了。