1、去勢對犬前列腺基質(zhì)平滑肌細(xì)胞的影響及其臨床意義目的 探討去勢治療對犬前列腺平滑肌細(xì)胞病變的影響。 列腺平 結(jié)果 RT- PCF結(jié)果顯示，去勢【摘要】方法 采用光鏡、電鏡，原位凋亡檢測和免疫組化技術(shù)，觀察去勢犬前 滑肌細(xì)胞的病理改變，用 RT- PCF方法檢測平滑肌肌球蛋白的轉(zhuǎn)錄水平。 去勢后犬前列腺平滑肌細(xì)胞發(fā)生了凋亡和萎縮病變。后前列腺組織內(nèi)平滑肌肌球蛋白表 達(dá)降低。肌球蛋白的免疫組化染色結(jié)果表 明：去勢早期單一切片上平滑肌細(xì)胞比例略升高，伴隨著前列腺上皮病變加重和腺小葉體積減小；去勢晚期，平滑肌細(xì)胞染色增強(qiáng)和分布紊亂與平滑肌細(xì)胞萎縮有關(guān)。 結(jié)論 去勢后前列腺基質(zhì)平滑肌細(xì)胞發(fā) 生退化病變。臨

2、床可采用 抗雄激素藥物治療前列腺增生的動(dòng)力性梗阻?！娟P(guān)鍵詞】 前列腺增生 動(dòng)物，實(shí)驗(yàn) 去勢The effect of castration on the canine p rostatic stromal smooth m usclecellsNIU Yuanjie,MA Ten gxia ng,BAI Ji ngwe n,et al.(Dep artme nt of Ur ology,the Sec ond Affiliated Hosp ital of Tianjin MedicalUn iversity,Tianjin 30021 1,Chi na)【AbstractObjective

3、To study the pathological cha nges of prostaticsmooth muscle cells(SMCs)in dogs induced by castration. Methods Light microsc opy, tran smissi on electro n microsc op y,i n s itu cell death detect ion, immun ohistochemistry and RT-PCR tech niq ues wer e used to study the effects of castration on the

4、prostatic stromal smooth muscle cells. Results SMCs underwent apop tosis and atropy foll owing castrati on. The RT -PCR results in dicated that the exp ressi on of SMC myos in decli ned after castrat ion.At the early p hase after castrati on,along with the in creas ing serious ness of p athological

5、cha nges in the ep ithelium and the decreas ing volume of the small l obes,the smooth muscle myos in was immuno stai ned slightly den ser tha n p recastrati on. Whereas at the later p hase,it was stai ned in a state of chaos more inten sive tha n early p hase and p recastrati on probably due to atro

6、phy of the SMCs. Conclusions SMCs decreased following castratio n. So,the dyn amic obstructi on of BPH might be treated by an droge n ablati on thera py acco mpani eda 1-adre no rece ptor an tag oni st.【Key wordsP rostatic hyp ertho phyAn imals,labora toryCastrati on研究表明：從胚胎期到青春期，前列腺平滑肌細(xì)胞密度與前列腺內(nèi)雄激素

7、的濃度密切相關(guān)，隨雄激素水平的波動(dòng)而發(fā)生改變'"，并且前列腺平滑肌細(xì)胞上存在著大量雄激素受體 2。本研究通過研究去勢后犬前列腺平滑肌細(xì)胞的病 理改變，探討雄激素對前列腺平滑肌細(xì)胞存活與增殖的調(diào)節(jié)作用。材料與方法一、動(dòng)物試驗(yàn)22只成年雄性家犬，于去勢前及去勢后 3， 7， 14， 30， 90天分別留取犬 前列腺組織標(biāo)本。、光鏡及電鏡觀察標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定，包埋切片，HE染色后，在Olympus顯微鏡下觀察。察。司，標(biāo)本經(jīng) 2.5%戌二醛二甲胂酸鈉溶液固定后，包埋切片，在透射電鏡下觀三、凋亡細(xì)胞的原位檢測 采用德國寶靈曼公司的原位細(xì)胞凋亡檢測試劑盒。四、平滑肌肌球蛋白的表

8、達(dá)采用SP方法。鼠抗人平滑肌肌球蛋白重鏈抗體（一抗）購自美國Sigma公 SP免疫組織化學(xué)試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。五、半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT- PCR）法檢測平滑肌肌球蛋白的表達(dá) 平滑肌肌球蛋白引物序列為 5' -CGCTGGAGGCCAAGATTGC和C5'-GTGTCCGTTTCCTCCTCAGAAC3'。內(nèi)參照標(biāo)準(zhǔn)物為微球蛋白，引物序列為 5'-CGGTGGTGGTGAAGCTGTAGC- -GGGCAtcctgaccctgaagta -待測模板肌球蛋白在前列腺組織內(nèi)的相對含量可用待 測模板的熒光強(qiáng)度值 / 微球蛋白的熒光強(qiáng)度值表示。

9、結(jié)果一、光鏡觀察結(jié)果 去勢后，犬前列腺基質(zhì)內(nèi)平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞體積萎縮，核固縮病變。在去勢早期 （去勢 14天以內(nèi) ），平滑肌病變較輕。去勢 14天以后，平滑肌細(xì)胞病 變逐漸加重，出現(xiàn)明顯的核固縮濃染，空泡變性。至去勢90天，平滑肌細(xì)胞呈現(xiàn)高度萎縮，大部分平滑肌細(xì)胞消失。二、電鏡觀察結(jié)果1. 去勢前：前列腺基質(zhì)平滑肌細(xì)胞呈不規(guī)則的梭形。核橢圓，兩端略鈍。 核異染色質(zhì)成簇，間斷性環(huán)繞核被膜及核中央。常染色質(zhì)、染色質(zhì)周圍顆粒及 間質(zhì)顆粒均較豐富。核的兩極可見成小片的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體。線粒體較 暗，偶而可見于臨近細(xì)胞膜的胞漿內(nèi)。胞漿外緣處可見較多的小泡，胞漿內(nèi)可 見豐富的粗細(xì)肌絲，其間夾雜散在的糖

10、元顆粒，肌細(xì)胞外緣電子密度有增高， 肌絲間可見多數(shù)的致密斑。2. 去勢早期（去勢 14天以內(nèi)），前列腺基質(zhì)平滑肌細(xì)胞主要表現(xiàn)為細(xì)胞凋亡 改變。細(xì)胞高度皺縮、扭曲。胞漿幅明顯減小，電子密度致密而暗。細(xì)胞核嚴(yán) 重固縮，染色質(zhì)高度凝聚，偶而可見環(huán)形、半月形典型凋亡改變。核周間隙高 度擴(kuò)張，胞漿線粒體小并出現(xiàn)溶解。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)池?cái)U(kuò)張，致密斑結(jié)構(gòu)不清。3. 去勢晚期 （去勢 21 天以后） ，基質(zhì)內(nèi)不能觀察到新鮮的凋亡病變，而表現(xiàn)為陳舊性凋亡與萎縮改變，并以后者為主。萎縮細(xì)胞的特點(diǎn)是細(xì)胞漿內(nèi)充滿多 個(gè)巨大的脂褐素 （ 終末溶酶體 ） ，呈多泡形，內(nèi)常含有大空泡。萎縮細(xì)胞扭曲， 皺縮，胞漿幅減小，電子密度致

11、密而暗。細(xì)胞核變小，染色質(zhì)呈塊狀，異染色 質(zhì)貼近核被膜及核中央 （1） 。1 去勢 30 天犬前列腺基質(zhì)平滑肌細(xì)胞的萎縮病變電鏡X 7500三、前列腺基質(zhì)細(xì)胞凋亡的原位檢測去勢后 7 天可見少量前列腺基質(zhì)細(xì)胞陽性染色。去勢 1 4天時(shí)前列腺基質(zhì)細(xì) 胞陽性染色比例升高，染色強(qiáng)度最強(qiáng)，并可見血管平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)陽性染色。 去勢晚期，基質(zhì)細(xì)胞陽性染色較去勢 1 4天逐漸減少，染色強(qiáng)度逐漸減弱。四、免疫組化染色結(jié)果在內(nèi)折的1. 去勢前平滑肌肌球蛋白著色較淺。小腺葉間基質(zhì)內(nèi)平滑肌細(xì)胞多，呈肌 束狀；而腺泡間平滑肌細(xì)胞分布少。一般腺泡間分布著單層并網(wǎng)狀相連的平滑 肌細(xì)胞，與小腺葉間的粗肌束相延續(xù)。在切片上，

12、平滑肌的分布呈樹枝狀，自 小腺葉間的粗肌束向腺泡間分支，離小腺葉間質(zhì)越遠(yuǎn)的腺泡間肌束越細(xì)小，甚 至缺如。缺如多見于增生犬，由于大量腺泡上皮呈乳頭狀反復(fù)內(nèi)折， 乳頭間缺乏平滑肌細(xì)胞。（37天）：基1 : 23。此比2. 去勢后平滑肌肌球蛋白的染色及分布的變化：去勢早期 質(zhì)/上皮比例變化明顯，由去勢前的1 ： 1020變?yōu)槿菰缙诘?例改變的主要原因是上皮萎縮，內(nèi)折乳頭消失，腺腔明顯縮小。腺小葉平均體 積由去勢前的392.5mm降至去勢7天的lOEmm,體積減少至去勢前的1/36。 在單一切片上平滑肌細(xì)胞的比例略有升高，細(xì)胞染色強(qiáng)度稍增強(qiáng) （+） 。去勢后 1430 天，基質(zhì) /上皮比例約為 1：

13、 1。腺泡已萎縮，腺小葉平均體積下降至去勢30天的3.1mm。小腺葉間基質(zhì)內(nèi)的平滑肌肌球蛋白染色強(qiáng)度增強(qiáng)，肌束變厚 而雜亂。但小腺葉內(nèi)并無平滑肌染色增強(qiáng)或增多。去勢后90天：基質(zhì)/上皮比例為 1： 1。平滑肌細(xì)胞染色仍集中于小腺葉間的基質(zhì)內(nèi)，而殘留的腺泡內(nèi)和 腺泡間并無平滑肌細(xì)胞增多，平滑肌細(xì)胞染色仍較強(qiáng)。五、去勢前后犬前列腺組織內(nèi)平滑肌肌球蛋白mRNA勺轉(zhuǎn)錄水平去勢后犬前列腺組織中肌球蛋白 mRNA勺轉(zhuǎn)錄水平降低。去勢后3天，肌球 蛋白mRNA勺轉(zhuǎn)錄水平較去勢前降低了一半；去勢后 7天降低至去勢前的1/3 ; 去勢 14 天以后維持在低水平。討論3。本研一、去勢后前列腺基質(zhì)平滑肌細(xì)胞減少 研

14、究認(rèn)為，去勢活化了前列腺的基質(zhì)，引起基質(zhì)平滑肌細(xì)胞增多 究結(jié)果與此相反，即去勢后前列腺基質(zhì)平滑肌細(xì)胞減少。首先去勢后前列腺平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生了退化的病理改變。光鏡下，去勢后平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)了凋亡和萎縮的病理改變，至晚期 （去勢3個(gè)月后）平滑肌細(xì)胞大量死亡。細(xì)胞凋亡的原位檢測證實(shí)去勢后前列腺基質(zhì)細(xì)胞有凋亡病變，并檢出 了血管平滑肌細(xì)胞的凋亡。其次，去勢后犬前列腺組織內(nèi)平滑肌肌球蛋白的轉(zhuǎn)錄水平降低。由于平滑 肌肌球蛋白是平滑肌細(xì)胞的特異性標(biāo)記蛋白 4，因而平滑肌肌球蛋白轉(zhuǎn)錄水平 的降低反映了去勢后前列腺平滑肌細(xì)胞的退化狀態(tài)。對平滑肌肌球蛋白的免疫染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)：去勢早期前列腺組織切片中平滑 肌細(xì)胞的比例升

15、高，但伴隨著上皮分泌細(xì)胞的大量減少和腺小葉體積的急劇縮 小。病理學(xué)研究表明，去勢早期前列腺的主要病理改變是上皮細(xì)胞的凋亡改 變，而基質(zhì)細(xì)胞 （包括平滑肌細(xì)胞 ） 改變較輕，因而單一切片上平滑肌細(xì)胞比例 的增多是由于上皮與基質(zhì)改變程度不同引起的。去勢晚期，平滑肌細(xì)胞比例無 進(jìn)一步增加，而表現(xiàn)為平滑肌肌球蛋白染色強(qiáng)度的增強(qiáng)和分布紊亂。去勢晚期 的主要病理改變是基質(zhì)細(xì)胞 （包括平滑肌細(xì)胞 ） 的萎縮改變。由于萎縮后的平滑 肌細(xì)胞皺縮扭曲，體積縮小，因而可能表現(xiàn)為平滑肌細(xì)胞染色增強(qiáng)和分布紊 亂。而且，無論早期還是晚期前列腺小腺葉內(nèi)未發(fā)現(xiàn)平滑肌染色增強(qiáng)或增多。綜上所述，去勢后前列腺上皮的病變和腺小葉體積

16、縮小可引起前列腺組織 切片上平滑肌細(xì)胞的假陽性增多，所以只有將前列腺體積縮小和上皮改變一并 考慮的數(shù)據(jù)，才是真實(shí)可信的。對前列腺的立體定量研究發(fā)現(xiàn)，藥物去勢引起 前列腺上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞絕對數(shù)目減少而相對密度保持不變6，本研究結(jié)果與此相似。二、雄激素對前列腺基質(zhì)平滑肌細(xì)胞調(diào)節(jié)作用的臨床意義。良性前列腺增生癥（BPH）引起的流出道梗阻有機(jī)械性和動(dòng)力性因素。前列腺 基質(zhì)中平滑肌張力增高是重要的動(dòng)力性因素。BPH是以基質(zhì)增生為主的疾病 17二國內(nèi)外報(bào)告BPH時(shí)基質(zhì)平滑肌成分增加'8，9S去勢治療可通過明顯減少前 列腺組織內(nèi)平滑肌成分而達(dá)到治療 BPH動(dòng)力性梗阻的功效。a 1-腎上腺素能受 體

17、（a 1-AR）阻斷劑可緩解前列腺平滑肌細(xì)胞的收縮，用藥后短期內(nèi)可改善BPH1-梗阻癥狀。但是，臨床單純應(yīng)用 a 1-AR阻斷劑，停藥后梗阻癥狀易復(fù)發(fā)。如果 將 a 1- 腎上腺素能受體阻滯劑與雄激素抑制藥物聯(lián)合應(yīng)用，既可防治停用 AR阻滯劑后梗阻癥狀的復(fù)發(fā)，又可彌補(bǔ)抗雄激素藥物作用緩慢的不足。本課題受天津市衛(wèi)生局重點(diǎn)學(xué)科基金資助作者單位：牛遠(yuǎn)杰（ 300211 天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科，天津市泌尿外科 研究所）馬騰驤（ 300211 天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科，天津市泌尿外科研究所） 孫光（ 300211 天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科，天津市泌尿外科研究所） 姚慶祥（ 300211 天

18、津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科，天津市泌尿外科研究所） 董克權(quán)（ 300211 天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科，天津市泌尿外科研究所） 白景文（天津醫(yī)科大學(xué)電鏡中心）參考文獻(xiàn)1，Shapino E,Steiner MS.Embryology and development of prostate.In:Kirb y R,McConnell JD,Fitzpatrick JM,et al.(eds)Texbook of Benign Prostatic Hyperplas ia.Oxford,UK.1996,11-22.2，Prins GS,Birch L.The developmental patt

19、ern of androgen receptor expression in rat prostate lobes is altered after neonatal exposure to estrogen.Endocrinolo gy,1995,136:1303-1314.3，Zhao GQ,Barcher M,Friedrichs B,et al.Functional properties of isolated stom a and epithilium from rat ventral prostate during androgen deprivation and estro gen treatment.Exp Clin Endocrinol,1993,101:69-77.4，Van der Loop FTL,Schaart G,Timmer EDJ,et al.Smoothelin,a novel cytoskeletal protein specific for smooth muscle cells.J Cell Biol,1996,134:401-411.5，牛遠(yuǎn)杰，董克權(quán)，白景文 , 等. 去勢前后犬前列腺的動(dòng)態(tài)病理學(xué)改變 . 中華泌 尿外科雜志 ，1998， 19:429-