1、大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的誘導及觀察指標比較許赤多戴冽湯美安鄭軍華竇巖(中山醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院風濕科,廣州510630中國圖書分類號R392131R593122文獻標識碼A文章編號10002484X(2002022*大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA是最常用于類風濕關(guān)節(jié)炎(RA研究的動物模型之一,目前國內(nèi)一般都是通過從其后足墊皮內(nèi)注射福氏完全佐劑(FC A進行誘導,采用經(jīng)尾巴途徑進行誘導較少見,且多以關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI作為觀察指標,采用放射學指數(shù)(RI作為觀察指標來評價AA的病變程度國內(nèi)尚未見有報道。本研究擬通過從大鼠尾巴皮內(nèi)注射FC A誘導AA后,通過觀察不同時點AI及RI,比較二者在AA 病情演變過程中的異同

2、。1材料與方法111動物雌性Wistar大鼠48只,體重125155 g,67周齡。購自中山醫(yī)科大學實驗動物中心。隨機分成8組,每組6只,共8組按第18編號,第17號為第17w欲觀察的大鼠,第8號為對照組大鼠。給水和食物,控制室溫(24±2,濕度55%及日照周期820h1。112儀器口腔專業(yè)用X光牙片機(德國西門子公司產(chǎn)品。113試劑福氏不完全佐劑(Sigma公司產(chǎn)品。114方法11411FC A的濃度制備將同一批號的BCG于80滅活1h。用高壓滅菌的液體石蠟配成所需濃度(FC A10mgml2,振蕩,混勻,置4冰箱保存?zhèn)溆谩?1412大鼠AA的誘導臨用前從冰箱取出FC A,充分振蕩

3、、混勻,實驗組共42只大鼠用75%酒精消毒尾巴后,于尾巴中、內(nèi)13交界處皮內(nèi)注射FC A01 ml,對照組6只大鼠則注射生理鹽水011ml。11413觀察指標自注射FC A后第7、14、21、28、35、42、49天,記錄AI。并從第14天起,每隔7d引頸處死一組大鼠,到第49天時同時處死對照組大鼠,取后肢關(guān)節(jié)立即作X線照片(電壓60K V,電流7本課題受廣東省醫(yī)學科技進步基金資助(項目號992009深圳市第二人民醫(yī)院風濕科,深圳518026作者簡介:許赤多,主治醫(yī)師,風濕病學碩士;指導教師:戴冽,副教授,碩士生導師。mA,曝光時間0104ms并與放射科醫(yī)生一起閱片并記錄RI3。另外觀察注射局

4、部有無感染及炎癥反應(yīng)。2結(jié)果211大鼠AA模型的建立及不同時點AI觀察FC A注射第7天內(nèi)大鼠未顯示任何關(guān)節(jié)紅腫表現(xiàn)(AI=0,第10天起部分大鼠關(guān)節(jié)出現(xiàn)紅腫,第14 18天86%(3642的大鼠出現(xiàn)關(guān)節(jié)紅腫(AI>2,第28天達最高峰(AI=916,以后關(guān)節(jié)紅腫逐漸減輕,第49天基本恢復(fù)正常(AI=212,即AI隨病程進展先升高后下降。對照組6只大鼠則在整個實驗過程中均未出現(xiàn)關(guān)節(jié)紅腫(AI=0。212AA大鼠不同時點關(guān)節(jié)X線改變及RI觀察FC A注射后第14天大鼠后肢足墊X線改變以軟組織腫脹及骨質(zhì)疏松為主(RI=110,第21天時除骨質(zhì)疏松外,尚出現(xiàn)骨侵蝕(RI=310,第28至第49

5、天后肢足墊X線片上可見有不同程度的骨質(zhì)疏松、骨侵蝕、關(guān)節(jié)腔狹窄及遠端趾骨形成(RI=815,RI 隨FC A注射后時間延長逐漸增高,并且不隨AA的病程而下降。對照組大鼠的后肢足墊X線片未見上述改變。213大鼠尾巴注射局部的觀察所有大鼠尾巴注射局部均未出現(xiàn)感染及炎癥反應(yīng)。3討論1954年Stoerk第一次成功在大鼠誘導AA 后4,作為一種較為成熟的模型仍廣泛用于RA的致病機理以及抗炎藥物療效的研究。盡管近年來國內(nèi)外逐漸采用型膠原誘導大鼠關(guān)節(jié)炎(CI A,并且從許多方面如AI、周圍血某些細胞因子的測定以及病變關(guān)節(jié)的組織學改變等與AA比較,認為用型膠原誘導的關(guān)節(jié)炎較用FC A誘導的關(guān)節(jié)炎更嚴重,但從

6、放射學角度即RI來觀察卻發(fā)現(xiàn)AA的RI較CI A的RI高3,鑒于國內(nèi)尚無這方面的研究,我們?nèi)圆捎肁A作為研究對象。國內(nèi)一般是按傳統(tǒng)方法從大鼠右后足墊皮內(nèi)注射FC A致炎,早期致炎局部的炎癥反應(yīng)主要表現(xiàn)為原發(fā)病變,即致炎后18h左41中國免疫學雜志2002年第18卷右時右腳的紅腫達峰值,持續(xù)3d后逐漸減輕,8d 后出現(xiàn)左后肢和前肢腳紅腫脹,再根據(jù)AI來評價AA的病變程度5。由于直接從足墊皮內(nèi)注射可造成關(guān)節(jié)局部外傷,有微生物感染受注關(guān)節(jié)的可能;且受注關(guān)節(jié)原發(fā)病變滑膜炎癥反應(yīng)的持續(xù)有可能影響右后肢AI的判定。因此近年國外已改為經(jīng)大鼠尾巴皮內(nèi)注射FC A誘導關(guān)節(jié)炎,我們采用這種方法誘導AA的成功率也較

7、高(86%。實驗結(jié)果顯示FC A 注射后第2周左右大鼠四肢關(guān)節(jié)出現(xiàn)紅腫,第4周時最嚴重,此時AI達最高值,隨后紅腫逐漸減輕,到實驗結(jié)束時基本消失,AI相應(yīng)也下降至接近正常,這與文獻報道的結(jié)果一致。然而RA是以關(guān)節(jié)破壞為特征的慢性進展性疾病,它并不是一種自限性疾病,其關(guān)節(jié)破壞與病變關(guān)節(jié)紅腫等炎癥表現(xiàn)也不完全一致,因此以AI作為觀察指標并不能全面地反映RA的病變過程,尤其是不能體現(xiàn)RA關(guān)節(jié)破壞情況。RA的放射學變化包括骨質(zhì)疏松、骨侵蝕、關(guān)節(jié)腔狹窄及關(guān)節(jié)脫位等,活動期RA在放射學上顯示關(guān)節(jié)有漸進性破壞6。國外利用放射學技術(shù)分析RA的模型如AA、CI A及鏈球菌細胞壁誘導的關(guān)節(jié)炎的大鼠,發(fā)現(xiàn)其受累的關(guān)

8、節(jié)有類似RA的放射學變化3,7,8。因此,放射學技術(shù)在實驗性關(guān)節(jié)炎研究中的應(yīng)用更有利于我們進一步探索RA的發(fā)病機理及尋找治療藥物。從我們的實驗結(jié)果中顯示FC A 注射后隨時間延長,RI逐漸增高,并且RI并不隨AA的病程而下降,提示AA大鼠關(guān)節(jié)破壞情況隨病程進展而逐漸發(fā)展,這與臨床RA實際病程過程相符,因此RI不僅可反映AA關(guān)節(jié)破壞情況,而且比AI更能客觀地反映RA的自然病程,操作方法上也簡單易行,采用RI顯然比單純采用AI作為觀察指標更客觀及科學。從以上討論可看出RI與AI各自反映的內(nèi)容不同,二者從不同側(cè)面反映AARA的病變過程,AI為反映關(guān)節(jié)急性炎癥的指標,RI為反映關(guān)節(jié)破壞的指標,兩者不能

9、互相取代,只不過絕大多數(shù)文獻未注意RI,而單純采用AI?？傊?AA從某些方面特別是放射學角度反映了RA的某些特征,采用經(jīng)尾巴皮內(nèi)注射誘導較從右后足墊皮內(nèi)注射誘導更科學,采用RI代替單純采用AI作為評定指標能更全面、客觀地反映AARA的病變過程。4參考文獻1Carme P,Angels F,Cristina C et al.Immunohistochemical changes in synovial tissue during the course of adjuvant arthritis J.J Rheumatol, 1995;22:1242馬東來,李俊,陳敏珠.大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的誘導及其

10、免疫學異常研究J.中國實驗臨床免疫學雜志,1995;7(3:133S loboda A E,Oronsky A L,K erwar S S.Radiographic analysis of experi2 mental rat arthritis M.In:G reenwald R A,Diam ondeas H S eds.Hand2 book of animal m odel for the rheumatic diseases.V ol.Boca Raton F L: CRC Press,1988:15921644S toerk H D,Bielinski T C,Budzelovich

11、 T.Chronic polyarthritis in rats injected with spleen in adjuvantsJ.Am J Pathol,1954;30:6165徐叔云,陳敏珠.藥理實驗方法學M.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,1991:7236Scott D L,G rindulus K A,S truthers G R et al.Progression of radiologi2 cal changes in rheumatoid arthritisJ.Ann Rheum Dis,1984;43:87Blackham A,Burns J W,Farmer J B et

12、 al.An x2ray analysis of adjuvant arthritis in the rat:the effect of prednis olone and indomethacin J.Agents Actions,1977;12:1458Clark R L,Cutrino J R,Andele S K et al.Radiologic analysis of arthritis in rats after systemic injection of streptococcal cell walls J.Arthritis Rheum,1979;22(1:25收稿200120

13、4230修回2001207210(編輯徐杰(上接第137頁C D3抗體均不能刺激C D4+T細胞增殖,而PM A和ionomycin卻能刺激C D4+T細胞增殖(見表1。說明C D4+T細胞活化的遠端信號正常,而近端信號缺乏。Z ap270是Syk家族成員,是成熟T細胞活化、傳導TCR近端信號不可缺少的細胞內(nèi)酪氨酸蛋白激酶。由于該患者外周血C D4+T細胞缺乏了Z ap270,導致其活化及增殖的能力受到障礙。我們的結(jié)果表明,Z ap270是C D8+T細胞發(fā)育成熟及成熟C D4+T 細胞發(fā)揮正常功能的必不可少的信號分子,而在C D4+T細胞發(fā)育中,可能存在另一條繞過Z AP270的替代途徑,而

14、在Z AP270缺欠的情況下是如何分化成熟的,目前尚不十分清楚。最近有報道Z ap270缺陷的病人存在特異的IgE反應(yīng),Syk酪氨酸激酶蛋白表達異常增高。因此Z ap270缺陷的情況下,C D4+T細胞激活可能通過Syk調(diào)節(jié)的TCR信號3。3參考文獻1E lder M E,H ope T J,Parslow T G et al.Severe combined immunodefi2 ciency with absence of peripheral blood CD8+T cells due to Z AP270defi2 ciencyJ.Cell Immunol,1995;165(1:1102T ai G,Jung E Y,H origuchi Y et al.Different effects of cyclic AMP and butyrate on eosinophilic differentiation,apoptosis and bcl22expression of a human eosinophilic leukemia cell line,E oL21J.Hematol Oncol,1996;14:1813T oya