1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上一代測(cè)序與二代測(cè)序的區(qū)別與聯(lián)系Sanger 法測(cè)序（一代測(cè)序）Sanger 法測(cè)序利用一種 DNA 聚合酶來(lái)延伸結(jié)合在待定序列模板上的引物。直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測(cè)定由一套四個(gè)單獨(dú)的反應(yīng)構(gòu)成，每個(gè)反應(yīng)含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)， 并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于 ddNTP 缺乏延伸所需要的 3-OH 基團(tuán)，使延長(zhǎng)的寡聚核苷酸選擇性地在 G、A、T 或 C 處終止。終止點(diǎn)由反應(yīng)中相應(yīng)的雙脫氧而定。每一種dNTPs 和 ddNTPs 的相對(duì)濃度可以調(diào)整，使反應(yīng)得到一組長(zhǎng)幾百至幾千堿基的鏈終止產(chǎn)物。它們具有共同的起

2、始點(diǎn)，但終止在不同的的核苷酸上，可通過(guò)高分辨率變性凝膠電泳分離大小不同的片段，凝膠處理后可用 X-光膠片放射自顯影或非同位素標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)。高通量測(cè)序（二代測(cè)序） 高通量測(cè)序技術(shù)（High-throughput sequencing，HTS）是對(duì)傳統(tǒng) Sanger 測(cè)序（稱為一代測(cè)序技術(shù)）革命性的改變, 一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條核酸分子進(jìn)行序列測(cè)定, 因此在有些文獻(xiàn)中稱其為下一代測(cè)序技術(shù)(next generation sequencing，NGS )足見(jiàn)其劃時(shí)代的改變, 同時(shí)高通量測(cè)序使得對(duì)一個(gè)物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進(jìn)行細(xì)致全貌的分析成為可能, 所以又被稱為深度測(cè)序(Deep sequencing

3、)。第一代和第二代測(cè)序技術(shù)第X代公司平臺(tái)名稱測(cè)序方法檢測(cè)方法大約讀長(zhǎng)(堿基數(shù))優(yōu)點(diǎn)相對(duì)局限性第一代ABI/生命技術(shù)公司3130xL-3730xL桑格-毛細(xì)管電泳測(cè)序法熒光/光學(xué)600-1000高讀長(zhǎng)，準(zhǔn)確度一次性達(dá)標(biāo)率高，能很好處理重復(fù)序列和多聚序列通量低；樣品制備成本高，使之難以做大量的平行測(cè)序第一代貝克曼GeXP遺傳分析系統(tǒng)桑格-毛細(xì)管電泳測(cè)序法熒光/光學(xué)600-1000高讀長(zhǎng)，準(zhǔn)確度一次性達(dá)標(biāo)率高，能很好處理重復(fù)序列和多聚序列；易小型化通量低；單個(gè)樣品的制備成本相對(duì)較高第二代羅氏/454基因組測(cè)序儀FLX系統(tǒng)焦磷酸測(cè)序法光學(xué)230-400在第二代中最高讀長(zhǎng)；比第一代的測(cè)序通量大樣品制備較難；難于處理重復(fù)和同種堿基多聚區(qū)域；試劑沖洗帶來(lái)錯(cuò)誤累積；儀器昂貴第二代以魯米那HiSeq2000/miSeq可逆鏈終止物和合成測(cè)序法熒光/光學(xué)2x150很高測(cè)序通量?jī)x器昂貴；用于數(shù)據(jù)刪節(jié)和分析的費(fèi)用很高第二代ABI/SOLiD5500xlSOLiD系統(tǒng)連接測(cè)序法熒光/光學(xué)25-35很高測(cè)序通量；在廣為接受的幾種第二代平臺(tái)中，所要拼接出人類基因組的試劑成本最低測(cè)序運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng)；讀長(zhǎng)短，造成成本高，數(shù)據(jù)分析困難和基因組拼接困難；儀器昂貴第二代赫利克斯Heliscope單分子合成測(cè)序法熒光/光學(xué)25-30高通量；在第二代中屬于單分子性質(zhì)的測(cè)序技術(shù)讀長(zhǎng)短，推高了測(cè)序