1、2021/3/91蛋白灰度分析2021/3/92蛋白灰度分析軟件蛋白灰度分析軟件有：Image-Pro Plus，Quantity One，Image J 等（1）Image-Pro Plus 綜合性能最好，操作簡便結(jié)果可靠！因?yàn)樗袕?qiáng)大的IOD 算法，能準(zhǔn)確反應(yīng)蛋白灰度但需要靠魔棒或軌跡法選取目的蛋白區(qū)域，有一定的主觀性主觀性，不過蛋白灰度測定本身就是半定量分析-測量值本身就沒有一定標(biāo)準(zhǔn)，不同軟件測量值不同，即使相同軟件重復(fù)測量數(shù)值也不一定相同，因此只要測定數(shù)值能反應(yīng)目的蛋白變化趨勢，測量值相對偏差不大即可2021/3/93（2 2） Quantity One Quantity One ：有

2、泳道-軌跡測定法，等高線/手繪選取目的區(qū)域測定法等方法 .泳道-軌跡測定法：先剔除一系列背景，再選擇泳道（lane），然后分析條帶（band）,最后使用高斯建模得出灰度分析值（Gauss Model trace）特點(diǎn)：感覺比較科學(xué)，重復(fù)性好，但十分繁瑣，而且有時(shí)不能正確反應(yīng)灰度。 .等高線-手繪選取目的區(qū)域測定法：通過等高線或手繪選取目的蛋白區(qū)域，最簡便，但重復(fù)性不太好。2021/3/94（3）Image J 最坑爹，它用魔棒選取區(qū)域測定灰度，可是有時(shí)很難選中所需區(qū)域，而且方法繁瑣，不推薦！2021/3/95Image-Pro Plus Image-Pro Plus 分析蛋白灰度教程 說明：目

3、的蛋白的灰度=目的蛋白IOD 值/ 相應(yīng)內(nèi)參IOD 值 1. 使用Photoshop 剪切出目的區(qū)域（只含western bolt 條帶，如圖），保存為TIFF 格式文件。2021/3/962. Image-Pro Plus 2. Image-Pro Plus 打開文件，剔除背景：（1） 放大鏡放大目的區(qū)域2021/3/97（2 2） Measure-calibration-intensity-options-Measure-calibration-intensity-options-image,image,選擇背景最大value value 值-ok-ok-system-ok-ok-syst

4、em-close-close2021/3/982021/3/99（3 3）Measure-count/size-measure-select measurementsMeasure-count/size-measure-select measurements，選擇IOD IOD 為測量值，調(diào)整結(jié)果顯示方式：Options-label style Options-label style 改為mesurementmesurement，選擇IOD IOD 為顯示值。2021/3/910（4）接下來有2 種方法選擇目的蛋白區(qū)域（即找出AOI，area of interest, IPP 核心元件）：魔棒和手繪軌跡法。2021/3/911（5）count/size-edit-convert AOI to object-得出IOD 值2021/3/912（6）若測下一條帶，則點(diǎn)NEW AOI 按鈕，再按以上方法選擇AOI（7）可以count/size-view-measurement dat