1、檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)CD4TCD4T淋巴細(xì)胞檢測(cè)淋巴細(xì)胞檢測(cè)(jin c)(jin c)標(biāo)準(zhǔn)及要標(biāo)準(zhǔn)及要求求毛愛玲毛愛玲山西省性病山西省性病(xngbng)(xngbng)艾滋病監(jiān)測(cè)艾滋病監(jiān)測(cè)中心中心第一頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)第二頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)HIVHIV在人體內(nèi)在人體內(nèi)(t ni)(t ni)的復(fù)制的復(fù)制1.1.吸附及穿入：吸附及穿入：gp120+CCR5 GP41gp120+CCR5 GP41和膜融合和膜融合核衣殼穿入核衣殼穿入宿主細(xì)胞宿主細(xì)胞 2.2.脫衣殼和逆轉(zhuǎn)錄：脫衣殼和逆轉(zhuǎn)錄：P24+P24+親環(huán)素親環(huán)素

2、出殼出殼RNARNA依賴的依賴的DNADNA聚合酶聚合酶逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄cDNAcDNA3.3.環(huán)化：環(huán)化：cDNA 雙鏈環(huán)狀雙鏈環(huán)狀DNADNA 4.4.整合：雙股整合：雙股DNADNA整合入宿主細(xì)胞染色體整合入宿主細(xì)胞染色體DNADNA中中前病毒前病毒5.5.轉(zhuǎn)錄：前病毒轉(zhuǎn)錄：前病毒DNA RNA mRNA DNA RNA mRNA 6.6.翻譯與裝配：翻譯與裝配：GagGag蛋白與病毒的蛋白與病毒的RNARNA結(jié)合裝配成核殼體。結(jié)合裝配成核殼體。7.7.病毒成熟、出芽：芽生方式病毒成熟、出芽：芽生方式(fngsh)(fngsh)釋放釋放第三頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)第

3、四頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)AIDS發(fā)病(f bng)機(jī)理 HIV侵入人體后主要攻擊(gngj)的是一種帶CD4抗原的淋巴細(xì)胞（T4淋巴細(xì)胞）。這種細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的基本組成部分，HIV通過(guò)大量、不斷地復(fù)制與釋放，導(dǎo)致T4淋巴細(xì)胞進(jìn)行性下降，感染者免疫功能遭到嚴(yán)重破壞，造成免疫缺陷。臨床表現(xiàn)為各種各樣機(jī)會(huì)性感染與腫瘤。第五頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)AIDSAIDS發(fā)病發(fā)病(f bng)(f bng)機(jī)理機(jī)理 HIVHIV進(jìn)入人體后能選擇性地侵犯有進(jìn)入人體后能選擇性地侵犯有CD4CD4受體的受體的淋巴細(xì)胞，當(dāng)病毒顆粒淋巴細(xì)胞，當(dāng)病毒顆粒(kl)(kl

4、)釋放出來(lái)后，繼釋放出來(lái)后，繼續(xù)攻擊其他續(xù)攻擊其他CD4TCD4T淋巴細(xì)胞。大量的淋巴細(xì)胞。大量的CD4+TCD4+T淋淋巴細(xì)胞被巴細(xì)胞被HIVHIV攻擊后，首先引起細(xì)胞功能的攻擊后，首先引起細(xì)胞功能的障礙。障礙。 HIVHIV病毒在細(xì)胞內(nèi)大量繁殖，導(dǎo)致細(xì)胞的溶病毒在細(xì)胞內(nèi)大量繁殖，導(dǎo)致細(xì)胞的溶解和破裂。解和破裂。第六頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)AIDSAIDS發(fā)病發(fā)病(f bng)(f bng)機(jī)理機(jī)理3. HIV3. HIV在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制后，以芽生方式釋出時(shí)可在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制后，以芽生方式釋出時(shí)可引起細(xì)胞膜的損傷。由于引起細(xì)胞膜的損傷。由于HIVHIV可抑制細(xì)胞膜磷可抑制細(xì)

5、胞膜磷脂的合成從而影響細(xì)胞膜的功能，導(dǎo)致細(xì)胞脂的合成從而影響細(xì)胞膜的功能，導(dǎo)致細(xì)胞病變病變(bngbin)(bngbin)。4. HIV4. HIV還可以感染骨髓干細(xì)胞導(dǎo)致還可以感染骨髓干細(xì)胞導(dǎo)致CD4+TCD4+T淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞減少。胞減少。第七頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)AIDSAIDS發(fā)病發(fā)病(f bng)(f bng)機(jī)理機(jī)理5. 5. 當(dāng)受當(dāng)受HIVHIV感染的感染的CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞表面存在的淋巴細(xì)胞表面存在的gp120gp120發(fā)生表發(fā)生表達(dá)后，它可以與未感染的達(dá)后，它可以與未感染的CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞CD4CD4分子結(jié)合，分子結(jié)合

6、，形成融合細(xì)胞，從而改變細(xì)胞膜的通透性，引起細(xì)胞的溶形成融合細(xì)胞，從而改變細(xì)胞膜的通透性，引起細(xì)胞的溶解和破壞。解和破壞。6. 6. 游離游離(yul)(yul)的的gp120gp120也可以與未感染的也可以與未感染的CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞結(jié)合，淋巴細(xì)胞結(jié)合，作為抗體介導(dǎo)依賴性細(xì)胞毒作用的抗原，使作為抗體介導(dǎo)依賴性細(xì)胞毒作用的抗原，使CD4+TCD4+T淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞成為靶細(xì)胞，受胞成為靶細(xì)胞，受K K細(xì)胞攻擊而損傷。細(xì)胞攻擊而損傷。 第八頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)AIDSAIDS發(fā)病發(fā)病(f bng)(f bng)機(jī)理機(jī)理 HIV HIV感染后一般首先出現(xiàn)感染后

7、一般首先出現(xiàn)CD4TCD4T淋巴細(xì)胞輕度至中度降淋巴細(xì)胞輕度至中度降低，該細(xì)胞總數(shù)低，該細(xì)胞總數(shù)(zngsh)(zngsh)可持續(xù)數(shù)年不變，反應(yīng)病毒可持續(xù)數(shù)年不變，反應(yīng)病毒為免疫應(yīng)答所抑制。歷經(jīng)一段時(shí)間后，為免疫應(yīng)答所抑制。歷經(jīng)一段時(shí)間后， CD4+TCD4+T細(xì)細(xì)胞逐漸進(jìn)行性下降，表明病毒逐漸逃脫了免疫應(yīng)答胞逐漸進(jìn)行性下降，表明病毒逐漸逃脫了免疫應(yīng)答的控制。當(dāng)?shù)目刂啤．?dāng)CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞一旦下降至淋巴細(xì)胞一旦下降至200200細(xì)胞細(xì)胞/l/l或更低時(shí)，則就可出現(xiàn)機(jī)會(huì)性感染?；蚋蜁r(shí)，則就可出現(xiàn)機(jī)會(huì)性感染。第九頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)HIVHIV感染的三種感

8、染的三種(sn zhn)(sn zhn)結(jié)局結(jié)局 典型典型(dinxng)進(jìn)展者：進(jìn)展者：8-10年內(nèi)免疫功能逐漸下降，最后發(fā)展成為艾滋病。 快速進(jìn)展者：快速進(jìn)展者：CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)在2-5年內(nèi)迅速下降，抗HIV抗體水平很低，HIV感染后有較高的病毒載量。 長(zhǎng)期存活者（長(zhǎng)期不進(jìn)展者）長(zhǎng)期存活者（長(zhǎng)期不進(jìn)展者）：感染后維持健康狀態(tài)12年以上，且CD4+計(jì)數(shù)維持正常。第十頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù) HIVinfectionJ. Coffin, XI International Conf. on AIDS, Vancouver, 1996第十一頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8

9、T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)HIV感染者（更危險(xiǎn)）AIDS病人傳染源第十二頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)從 HIV感染(gnrn)發(fā)展到艾滋病 HIV一旦進(jìn)入人體，這個(gè)人就成為HIV感染者。經(jīng)過(guò)急性感染期潛伏期，以后(yhu)逐漸發(fā)展成艾滋病病人。處于潛伏期的感染者免疫功能沒有受到嚴(yán)重破壞，因而沒有明顯的臨床癥狀。從感染者到艾滋病病人這段潛伏期時(shí)間的長(zhǎng)短與感染途徑感染病毒的數(shù)量感染者的年齡、生活條件、心理、生理狀況等多種因素有關(guān)，短則幾年，長(zhǎng)則20年。發(fā)達(dá)國(guó)家較長(zhǎng)，發(fā)展中國(guó)家短些。資料表明，經(jīng)輸血傳播的潛伏期較短，經(jīng)性接觸傳播的潛伏期較長(zhǎng)。第十三頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴

10、細(xì)胞的意義續(xù)檢測(cè)檢測(cè)(jin c)(jin c)CD4CD4、CD8TCD8T淋巴細(xì)胞的意義淋巴細(xì)胞的意義 淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)內(nèi)功能最重要的一群細(xì)胞，在正常機(jī)體內(nèi)各淋巴細(xì)胞亞群相互作用，維持機(jī)體正常免疫功能。當(dāng)不同淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能發(fā)生異常時(shí)，可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂并發(fā)生一系列病理變化。因此，T淋巴細(xì)胞亞群的免疫分型能夠提供有關(guān)患者免疫狀態(tài)的重要信息。AIDS是由HIV引起的一組綜合癥，HIV主要侵犯人CD4T淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致其數(shù)量上的減少和功能缺陷，使機(jī)體免疫平衡被打破造成(zo chn)免疫功能低下，最終導(dǎo)致各種機(jī)會(huì)感染和腫瘤第十四頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)

11、檢測(cè)檢測(cè)(jin c)(jin c)CD4CD4、CD8TCD8T淋巴細(xì)胞的意義淋巴細(xì)胞的意義( (續(xù)續(xù)) ) CD4T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值的檢測(cè)在HIV感染和艾滋病病人治療(zhlio)以及病毒治療(zhlio)療效方面發(fā)揮了重要的作用 1.了解機(jī)體的免役狀態(tài)以確定疾病分期 2.監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)程 3.評(píng)估疾病預(yù)后 4.制定抗病毒治療及機(jī)會(huì)性感染預(yù)防性治療方案 評(píng)估抗病毒藥物療效第十五頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)檢測(cè)檢測(cè)(jin c)(jin c)CD4CD4、CD8TCD8T淋巴細(xì)胞的意義淋巴細(xì)胞的意義( (續(xù)續(xù)) ) 因而，對(duì)HIV感染者和AIDS病人定期進(jìn)行CD4、CD8T淋

12、巴細(xì)胞檢測(cè)具有十分(shfn)重要的意義。 美國(guó)疾病預(yù)防控制中心就是以此為基礎(chǔ)制訂了HIV感染者/AIDS病人的診斷和分類標(biāo)準(zhǔn)，目前國(guó)內(nèi)外仍被采納應(yīng)用。第十六頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)規(guī)范(gufn)的AIDS治療 目前我國(guó)目前我國(guó)HIVHIV治療范圍逐漸擴(kuò)大，國(guó)家示范區(qū)大批的治治療范圍逐漸擴(kuò)大，國(guó)家示范區(qū)大批的治療已經(jīng)開始。我省也于療已經(jīng)開始。我省也于20042004年啟動(dòng)了對(duì)年啟動(dòng)了對(duì)AIDSAIDS的治療。的治療。但是但是(dnsh)(dnsh)由于檢測(cè)費(fèi)用昂貴，大批治療中由于檢測(cè)費(fèi)用昂貴，大批治療中50%50%以上以上病人不進(jìn)行規(guī)范檢測(cè)病人不進(jìn)行規(guī)范檢測(cè). .一

13、旦出現(xiàn)耐藥病人，后果將不一旦出現(xiàn)耐藥病人，后果將不堪設(shè)想。所以規(guī)范的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是非常重要的一個(gè)環(huán)堪設(shè)想。所以規(guī)范的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。節(jié)。第十七頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 室室 條條 件件 1.人員 進(jìn)行HIV感染者和病人CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)的人員須具有艾滋病實(shí)驗(yàn)室的上崗資格，并接受過(guò)省級(jí)以上艾滋病實(shí)驗(yàn)室安全(nqun)及實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)培訓(xùn)。第十八頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)實(shí) 驗(yàn) 室 條 件(續(xù)) 設(shè)施和設(shè)備(shbi)樣品處理區(qū)：生物安全柜、離心機(jī)、冰箱、水浴箱、旋轉(zhuǎn)震蕩器、精確移液器（5ul50u1、20u12

14、00u1、 200u11000u1)。 流式細(xì)胞儀檢測(cè)區(qū)：流式細(xì)胞儀第十九頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)實(shí) 驗(yàn) 室 條 件(續(xù)) 功能分區(qū) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)分為樣品處理區(qū)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)區(qū)，各區(qū)的功能是： 樣品處理區(qū)應(yīng)達(dá)到生物安全(nqun)級(jí)實(shí)驗(yàn)室要求，用于樣品處理、流式檢測(cè)樣品制備。流式細(xì)胞儀檢測(cè)區(qū)用于制備好的樣品上機(jī)檢測(cè)。第二十頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)方方 法法 目前用于CD4和CD8T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測(cè)方法分為自動(dòng)檢測(cè)方法和手工操作法。自動(dòng)檢測(cè)方法包括流式細(xì)胞儀（主要有多平臺(tái)(pngti)三級(jí)程序法和單平臺(tái)(pngti)一步法）和專門的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。

15、手工操作法包括幾種手工操縱試驗(yàn)，需要顯微鏡或酶聯(lián)免疫試驗(yàn)設(shè)備。第二十一頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)方方 法法 檢測(cè)CD4T淋巴細(xì)胞數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法為流式細(xì)胞儀，可得出CD4,CD8等淋巴細(xì)胞及比值(bzh)。為確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性，應(yīng)建立內(nèi)部質(zhì)量控制及參加國(guó)家室間評(píng)價(jià)。第二十二頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀 (FACS Calibur, BD)第二十三頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)簡(jiǎn)易簡(jiǎn)易(ji(jiny)ny)流式細(xì)胞儀器（流式細(xì)胞儀器（FACSCount, BD)FACSCount, BD)第二十四頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢

16、測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)免疫免疫(mi(miny)ny)指標(biāo)的檢測(cè)指標(biāo)的檢測(cè) CD4/CD3 CD8/CD3 CD3 CD4/CD8第二十五頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)全省CD4流氏細(xì)胞(xbo)儀分布 山西省艾滋病確證(qu zhn)中心實(shí)驗(yàn)室 運(yùn)城市艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室 臨汾市艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室 太原市艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室 大同市艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室 長(zhǎng)治市艾滋病初篩中心實(shí)驗(yàn)室第二十六頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)CD4CD4細(xì)胞樣本采集細(xì)胞樣本采集(cij)(cij)運(yùn)送運(yùn)送檢測(cè)要求檢測(cè)要求第二十七頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)1.

17、成功的臨床治療效果評(píng)定依賴于有保障的標(biāo)本成功的臨床治療效果評(píng)定依賴于有保障的標(biāo)本采集、保存、檢測(cè)，以及數(shù)據(jù)處理等等。在研究采集、保存、檢測(cè)，以及數(shù)據(jù)處理等等。在研究前期就要有計(jì)劃的設(shè)計(jì)研究項(xiàng)目，確定所需要前期就要有計(jì)劃的設(shè)計(jì)研究項(xiàng)目，確定所需要(xyo)(xyo)的標(biāo)本類型。比如：所有的血液標(biāo)本是否需的標(biāo)本類型。比如：所有的血液標(biāo)本是否需要要(xyo)(xyo)抗凝處理、是否需要抗凝處理、是否需要(xyo)(xyo)無(wú)菌等無(wú)菌等 標(biāo)標(biāo) 本本 采采 集集 的的 要要 求求第二十八頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)標(biāo)本標(biāo)本(biobn)(biobn)采集的要求采集的要求( (續(xù)續(xù))

18、 )2.2.采集的標(biāo)本應(yīng)該長(zhǎng)期保存，至少要求保存至此項(xiàng)采集的標(biāo)本應(yīng)該長(zhǎng)期保存，至少要求保存至此項(xiàng)目完成。血液標(biāo)本可用于目完成。血液標(biāo)本可用于CD4TCD4T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 、抗原、抗原、抗體檢測(cè)，病毒分離抗體檢測(cè)，病毒分離(fnl)(fnl)，PCRPCR檢測(cè)檢測(cè). .3.3.血液標(biāo)本應(yīng)盡量在血液標(biāo)本應(yīng)盡量在2424小時(shí)內(nèi)處理，尤其是小時(shí)內(nèi)處理，尤其是CD4TCD4T淋巴細(xì)胞檢測(cè)、病毒分離，淋巴細(xì)胞檢測(cè)、病毒分離，PCRPCR檢測(cè)檢測(cè). .第二十九頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)標(biāo) 本 的 采 集(續(xù)) 選擇合適的抗凝劑，分別用于血液學(xué)檢測(cè)和流式細(xì)胞儀的免疫表型檢測(cè)。 用于

19、血液學(xué)檢測(cè)的抗凝劑 K3EDTA （1.50.15mg/ml血液)。 枸櫞酸鈉 (3)肝素 在血球分析儀生產(chǎn)商允許的時(shí)間(shjin)范圍內(nèi)檢測(cè)，不超過(guò)30h，不檢測(cè)超出抗凝時(shí)間范圍的樣品。 用于流式細(xì)胞儀的抗凝劑主要是K3EDTA 第三十頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)標(biāo)本標(biāo)本(biobn)的采集的采集第三十一頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù) 標(biāo)標(biāo) 本本 的的 采采 集集采集用品采集用品(yngpn)(yngpn)采血管采血管 真空、負(fù)壓真空、負(fù)壓 抗凝（抗凝（EDTAEDTA或枸櫞酸鈉）或枸櫞酸鈉） 無(wú)菌無(wú)菌針頭針頭 蝶形針頭蝶形針頭第三十二頁(yè)，共五十六

20、頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)注意：切勿將采血針頭的套管注意：切勿將采血針頭的套管(to un)(to un)回套！回套！注意采血后器具的放置、消毒、處理注意采血后器具的放置、消毒、處理 標(biāo)標(biāo) 本本 的的 采采 集集(續(xù)續(xù))第三十三頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)標(biāo)本標(biāo)本(biobn)(biobn)的采集的采集( (續(xù)續(xù)) ) 采血后應(yīng)立即握住試管兩端，顛倒混勻多次，將血液與抗凝劑混勻，以防止凝固。 準(zhǔn)備適當(dāng)數(shù)量(shling)的樣品管 當(dāng)同一樣品的血球檢測(cè)和流式細(xì)胞儀免疫表型檢測(cè)在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行時(shí)，用一個(gè)裝有K3EDTA的試管即可。 對(duì)所有樣品編號(hào)，并寫明日期和時(shí)

21、間。第三十四頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù) 標(biāo)標(biāo) 本本 的的 運(yùn)運(yùn) 輸輸在標(biāo)本運(yùn)輸過(guò)程中，應(yīng)確保標(biāo)本能夠及時(shí)、準(zhǔn)在標(biāo)本運(yùn)輸過(guò)程中，應(yīng)確保標(biāo)本能夠及時(shí)、準(zhǔn)確運(yùn)輸?shù)街付ǖ攸c(diǎn)。要求提前與對(duì)方確運(yùn)輸?shù)街付ǖ攸c(diǎn)。要求提前與對(duì)方(dufng)(dufng)聯(lián)系聯(lián)系，確定時(shí)間，對(duì)方，確定時(shí)間，對(duì)方(dufng)(dufng)應(yīng)提前做好相關(guān)實(shí)驗(yàn)的應(yīng)提前做好相關(guān)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備工作，盡快進(jìn)行標(biāo)本處理準(zhǔn)備工作，盡快進(jìn)行標(biāo)本處理運(yùn)輸?shù)乃袠?biāo)本都應(yīng)有送檢單給接受樣品的實(shí)運(yùn)輸?shù)乃袠?biāo)本都應(yīng)有送檢單給接受樣品的實(shí)驗(yàn)室。每張送檢單都應(yīng)詳細(xì)填寫所要求的內(nèi)容驗(yàn)室。每張送檢單都應(yīng)詳細(xì)填寫所要求的內(nèi)容. .第三十五頁(yè)

22、，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)樣 品 的 運(yùn) 輸 運(yùn) 送(續(xù))盡可能快地將樣品送至免疫表型檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。如需運(yùn)送樣品到其它地點(diǎn)時(shí)，應(yīng)將裝樣品的試管放于一個(gè)(y )防漏的容器中，并將此容器放于一個(gè)(y )裝有吸水性物質(zhì)的指罐中，以防止震動(dòng)并可吸收所有試管破裂漏出的血液。蓋緊指罐，用橡皮帶系緊。 應(yīng)選擇特定的方案，并且安排合適的時(shí)間和運(yùn)輸樣品。第三十六頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)樣樣 品品 的的 接接 收收 樣品到達(dá)以后立即檢查試管及其所裝的血樣。 不可檢測(cè)溶血或結(jié)冰樣品。 不可檢測(cè)凝血和乳糜的樣品。 如果樣品的采集時(shí)間已超過(guò)(chogu)48H，不于接收.第

23、三十七頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù) 標(biāo)標(biāo) 本本 的的 處處 理理一般一般(ybn)(ybn)采集采集HIV-1HIV-1感染者全血感染者全血10 - 20ml10 - 20ml 血漿血漿(xujing)（含有血小板）（含有血小板）淋巴細(xì)胞層淋巴細(xì)胞層紅細(xì)胞層紅細(xì)胞層1 抗抗 凝凝 2 無(wú)無(wú) 菌菌3 室室 溫溫4 24h 內(nèi)處理內(nèi)處理第三十八頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)實(shí)現(xiàn)實(shí)現(xiàn) CD4, CD8 , CD3 絕對(duì)絕對(duì)(judu)計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)FACSCount結(jié)果可信度：結(jié)果可信度：絕對(duì)計(jì)數(shù)絕對(duì)計(jì)數(shù)質(zhì)控質(zhì)控內(nèi)置錯(cuò)誤自動(dòng)內(nèi)置錯(cuò)誤自動(dòng)(zdng)報(bào)警報(bào)警第三十九

24、頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)FACSCountFACSCount內(nèi)置微處理器實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)(shj)自動(dòng)分析自動(dòng)打印質(zhì)控與病人(bngrn)的檢測(cè)結(jié)果簡(jiǎn)單(jindn)易用的系統(tǒng)控制面板配套的樣本制備工作臺(tái)樣本制備方法簡(jiǎn)捷，避免細(xì)胞損失第四十頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)FACSCount 試劑試劑(shj)與對(duì)照與對(duì)照FACSCount 工作臺(tái)工作臺(tái)FACSCount 完善完善(wnshn)的系統(tǒng)的系統(tǒng)第四十一頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)每管加入 50ml 全血加入，混勻，室溫避光孵育1h無(wú)需溶血1每管加入 50ml 固定液，混 勻

25、， 室 溫 避 光 孵 育30min無(wú)需離心洗滌2FACSCount上機(jī)檢測(cè).無(wú)需血球計(jì)數(shù)儀，直接得到絕對(duì)值結(jié)果33步測(cè)定步測(cè)定CD4, CD8 ，CD3 絕對(duì)絕對(duì)(judu)計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)第四十二頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)預(yù)配試劑預(yù)配試劑(shj)FACSCount 完善完善(wnshn)的系統(tǒng)的系統(tǒng)第四十三頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)FACSCount 完善完善(wnshn)的系統(tǒng)的系統(tǒng)檢測(cè)試劑盒組成（50人份/盒） 熒光試劑(shj) 2個(gè)組合/人份 CD4PE/CD3PE-CY5 CD8PE/CD3PE-CY5 固定液 效期 28 0C儲(chǔ)存6個(gè)月

26、第四十四頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)FACSCount 完善完善(wnshn)的系統(tǒng)的系統(tǒng) 質(zhì)控試劑盒（50人份/盒） 零，低，中，高 4種靶值微球 效期 28 0C儲(chǔ)存(chcn)1個(gè)月第四十五頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)FACSCount3步測(cè)定步測(cè)定CD4, CD8 ，CD3 絕對(duì)絕對(duì)(judu)計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)第四十六頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)每管加入 50ml 全血加入，混勻，室溫(sh wn)避光孵育1h無(wú)需溶血1FACSCount第四十七頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)FACSCount每管加入 50ml 固定液，混勻，室溫避光孵育30min無(wú)需離心(lxn)洗滌2第四十八頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)FACSCount上機(jī)檢測(cè).無(wú)需血球計(jì)數(shù)儀，直接(zhji)得到絕對(duì)值結(jié)果3FACSCount第四十九頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)打印結(jié)果打印結(jié)果 對(duì)照對(duì)照 病人病人(bngrn)標(biāo)本標(biāo)本FACSCount 分析分析(fnx)第五十頁(yè)，共五十六頁(yè)。檢測(cè)CD4CD8T淋巴細(xì)胞的意義續(xù)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)