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1、實(shí)驗(yàn)九實(shí)驗(yàn)九 紫外分光光度法測(cè)定紫外分光光度法測(cè)定 核酸的含量核酸的含量一一 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵系統(tǒng)，能吸收雙鍵系統(tǒng)，能吸收紫外光紫外光。RNA和和DNA的的紫外吸收高峰在紫外吸收高峰在A260nm波長(zhǎng)處。一般在波長(zhǎng)處。一般在A260nm波長(zhǎng)下，每波長(zhǎng)下，每ml含含1gRNA溶液的光吸溶液的光吸收值為收值為0.022。所以測(cè)定未知濃度。所以測(cè)定未知濃度RNA溶液溶液A260nm波長(zhǎng)的光吸收值即可計(jì)算出其中核酸波長(zhǎng)的光吸收值即可計(jì)算出其中核酸的含量。的含量。二二 實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作 1. 稱取核酸樣品稱取核酸樣品0.05g加入加入

2、2ml左右的左右的DW溶解（可在水浴鍋上加熱促其溶解）溶解（可在水浴鍋上加熱促其溶解）然后用玻璃棒然后用玻璃棒蘸取蘸取稀氨水調(diào)節(jié)稀氨水調(diào)節(jié)pH到到7使用使用pH試紙調(diào)節(jié)試紙調(diào)節(jié)調(diào)好后將樣品液定容調(diào)好后將樣品液定容到到5ml（使用（使用10ml量筒定容）量筒定容） 2. 取取2支離心管，按下表加樣支離心管，按下表加樣振蕩振蕩均勻均勻在冰箱中冷卻在冰箱中冷卻30min然后然后離心離心15min,V=8000離心管號(hào)離心管號(hào)12樣品液樣品液2ml2mlDW2ml-沉淀劑沉淀劑-2ml 3. 上清液稀釋上清液稀釋100倍：倍： 用移液管從離心管中移取用移液管從離心管中移取0.5ml上清液置上清液置于量筒中于量筒中用用DW定容到定容到50ml倒入小倒入小燒杯攪拌均勻燒杯攪拌均勻然后用紫外分光光度計(jì)測(cè)然后用紫外分光光度計(jì)測(cè)OD260nm值值A(chǔ)1,A24.

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