1、相差顯微鏡 相差顯微鏡是用于觀察組織培養(yǎng)中活細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的?；罴?xì)胞無(wú)色透明，一般顯微鏡下不易分辨細(xì)胞輪廓及其結(jié)構(gòu)。 相差顯微鏡的特點(diǎn)是將活細(xì)胞不同厚度及細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)對(duì)光產(chǎn)生的不同折射作用，轉(zhuǎn)換為光密度差異（明暗差），使鏡下結(jié)構(gòu)反差明顯，影像清楚。相差顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)相差顯微鏡相差顯微鏡成像光路相差顯微鏡的部件 相差顯微鏡的關(guān)鍵性部件為位相板(phase plate)、環(huán)狀光闌(anular diaphragm)和中心調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)目鏡(centring telescope)。 環(huán)狀光闌 環(huán)狀光闌是在玻璃片上噴涂金屬薄膜借以擋光，只留下環(huán)形透光窄縫的光闌。它能使來(lái)自反光鏡的直射光只能從環(huán)狀部分通過(guò)，形成

2、一個(gè)空心圓筒狀的光柱，經(jīng)聚光器并照射到標(biāo)本以后，就產(chǎn)生兩部分光，一部分是直射光，另一部分是經(jīng)過(guò)標(biāo)本后產(chǎn)生的衍射光，這兩部分光經(jīng)物鏡內(nèi)相板的作用而改變了光的相位和振幅。 在相差聚光器下面裝有一個(gè)轉(zhuǎn)盤，盤上鑲有寬狹不同的環(huán)狀光闌，在不同光闌邊上刻有10、 20，40等字樣，這表示當(dāng)用不同放大倍數(shù)的物鏡時(shí)，必須配合相應(yīng)的環(huán)狀光闌。環(huán)狀光欄相板 相板安裝在物鏡的后焦平面上，帶有相板的物鏡稱為相差物鏡（蔡司廠用紅色“PH”表示）。 相板上有一灰色的環(huán)狀圈，稱為共軛面。面上涂有吸光物質(zhì)，直射光從這部分通過(guò)，并吸收了約80%的直射光，以降低它的透光度。在共軛面的內(nèi)，外側(cè)部分稱為補(bǔ)償面，面上涂有減速速物質(zhì)，使

3、衍射光的相們發(fā)生改變，因此這兩者相結(jié)合就能分別改變直射光和衍射光的振幅和相位。相板分類 A型位相板 凡是共軛面即環(huán)形相板上涂有吸收層的相板均為A型。A型相板又分為二型： (1)A十型位相板：這是在共扼面上既涂吸收層又涂有電解質(zhì)的相板。這種相板能吸收其共軛面的60一90直射光，而透過(guò)其20一40。市場(chǎng)出售的位相板型號(hào)分類時(shí)，都以數(shù)字表示其透射率和推遲位相的數(shù)據(jù)(圖10-12，表101)。 （2）A一型位相板是共扼面上涂有吸收層。同時(shí)在補(bǔ)償面上涂有電解質(zhì)。相板分類 B型位相板 凡是在補(bǔ)償面上涂有吸收層而在共軛面上有電解質(zhì)的位相板，均屬此類。 (1)B十型位相板是在補(bǔ)償面上涂有吸收層共軛面上有電解質(zhì)

4、的相板。 (2)B一型位相板是在補(bǔ)償面上涂有吸收層加電解質(zhì)的相板。位相板的型號(hào)對(duì)焦望遠(yuǎn)目鏡 對(duì)焦望遠(yuǎn)目鏡(centring telescope)又叫合軸望遠(yuǎn)鏡或校正望遠(yuǎn)目鏡。這是一種場(chǎng)透鏡和接目透鏡之間的距離可變的目鏡。相差顯微鏡的成像原理 從波動(dòng)光學(xué)的角度可把物體細(xì)節(jié)即生物標(biāo)本的細(xì)節(jié)，看成是成像光束的障礙物。它可以改變相干光束的振幅、位相和光強(qiáng)分布。 從變換光學(xué)的頻譜轉(zhuǎn)換角度，可把物體細(xì)節(jié)看成是不同空間信息的集合物。它可改變光信息的空間頻譜。相差顯微鏡的成像原理 在顯微鏡下標(biāo)本細(xì)節(jié)的光密物質(zhì)、光疏物質(zhì)和無(wú)結(jié)構(gòu)的介質(zhì)的折射率不同，因此相干光束通過(guò)光密物質(zhì)(t)時(shí)，必然產(chǎn)生衍射，使光程延長(zhǎng)，推遲

5、位相(圖1021P)。這時(shí)衍射光(P)和直射光(S)之間的位相出現(xiàn)d/差異。但是標(biāo)本的吸收程度近似，所以振幅未變即光強(qiáng)末變。這種直射光和衍射光到達(dá)像平面重疊成像時(shí)，其合成波的振幅與通過(guò)無(wú)結(jié)構(gòu)介質(zhì)的直射光的振幅幾乎近似，即其光強(qiáng)相似。這就是未染標(biāo)本在普通顯微鏡下反差很小的基本原因(圖1022)。暗相差 在被檢物的折射率大于介質(zhì)的情況下，透過(guò)共軛面的直射光被吸收80%后亮度變暗，衍射光在通過(guò)被檢物后其相位己推遲1/4波長(zhǎng)，再在位相板的補(bǔ)償面的電解質(zhì)又推遲了1/4波長(zhǎng)。由于這兩束光的相位不同（差1/2波長(zhǎng)），其合成波的振幅為兩者之差，所以光線就更加暗。 與此同時(shí)，通過(guò)無(wú)結(jié)構(gòu)介質(zhì)的衍射光的光程只被補(bǔ)償

6、面的電介質(zhì)推遲l4波長(zhǎng)。這就造成通過(guò)光密物質(zhì)的光強(qiáng)遠(yuǎn)比通過(guò)無(wú)結(jié)構(gòu)介質(zhì)(背景)的光強(qiáng)減衰得多。相差顯微鏡下標(biāo)本細(xì)節(jié)的反差加大丁。光密結(jié)構(gòu)比背景暗得多了。這種反差叫暗反差也叫正反差。明相差 如果相板的共軛面上涂的是減速物質(zhì)，推遲直射光1/4波長(zhǎng)，而補(bǔ)償面涂的是吸光物質(zhì)，結(jié)果就是直射光與衍射光的相位相同（衍射光通過(guò)物體時(shí)相位推遲了1/4波長(zhǎng)），其合成波的振幅為兩者之和，結(jié)果物體是明亮的而背景是暗的，這稱為明相差或負(fù)相差。暗相差和明相差暗相差和明相差相差顯微鏡實(shí)驗(yàn)方法和步驟 安放相差裝置 取下原有聚光器和物鏡，分別安上相差聚光器和相差物鏡，并將轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)到“0”標(biāo)記的位置。用10相差物鏡調(diào)光。 調(diào)節(jié)光源。 合軸調(diào)節(jié) 取