1、 枯草芽孢桿菌生長習(xí)性 及其培養(yǎng)主要內(nèi)容1.枯草芽孢桿菌的特性2適應(yīng)生殖條件3.作用機理4.應(yīng)用范圍5. 斜面培養(yǎng)6.無菌操作枯草芽孢桿菌特性芽孢桿菌（Bacillaceae），細(xì)菌的一科，能形成芽孢（內(nèi)生孢子）的桿菌或球菌。包括芽孢桿菌屬、芽孢乳桿菌屬、梭菌屬、脫硫腸狀菌屬和芽孢八疊球菌屬等。它們對外界有害因子抵抗力強，分布廣，存在于土壤、水、空氣以及動物腸道等處。芽孢桿菌bacillus 桿菌科的一屬細(xì)菌。為好氧或兼性厭氧的桿菌，一般為革蘭氏染色陽性。在某種環(huán)境下，菌體內(nèi)的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，經(jīng)過前孢子階段，形成一個完整的芽孢。芽孢對熱、放射線和化學(xué)物質(zhì)等有很強的抵抗力?？莶菅挎邨U菌：枯草芽孢桿

2、菌，是芽孢桿菌屬的一種。單個細(xì)胞 0.70.823微米，著色均勻。無莢膜，周生鞭毛，能運動。革蘭氏陽性菌，芽孢0.60.91.01.5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。 菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體培養(yǎng)基中生長時，常形成皺醭。需氧菌。可利用蛋白質(zhì)、多種糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遺傳學(xué)研究中應(yīng)用廣泛，對此菌的嘌呤核苷酸的合成途徑與其調(diào)節(jié)機制研究較清楚。廣泛分布在土壤及腐敗的有機物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。 菌落菌落成份含量：成份含量：枯草芽孢桿菌及生物酶、維生素、微量元素等輔助劑，活菌數(shù)250億/克。形狀：淺黃色粉末適應(yīng)生長條件相關(guān)試驗結(jié)果表明：

3、該株枯草芽孢桿菌具有良好 的耐高溫、耐酸性和耐膽鹽能力，在90 水浴中處理10 min后其存活率接近80 %在pH等于2的人工胃液中處理6 h后存活率仍超過76 %在質(zhì)量濃度為0.3 %的豬膽鹽溶液中處理4 h后存活率超過90 %在含豬膽鹽的培養(yǎng)基中，仍可以生長增殖。為微生物添加劑產(chǎn)品的開發(fā)提供了優(yōu)良的菌種。 將枯草芽孢桿菌在90 水浴中處理10 min后其存活率接近80 %，說明枯草芽孢桿菌具有較好的耐高溫性能。 當(dāng)培養(yǎng)基初始pH為2和3時，枯草芽孢桿菌培養(yǎng)液OD600值始終約為0.3，當(dāng)初始pH為4、5、6和7時，在培養(yǎng)12 h后OD600值接近。這說明，枯草芽孢桿菌在強酸性條件下生長性能

4、較差，在弱酸性和中性環(huán)境中生長旺盛。OD600 測量細(xì)菌培養(yǎng)液在600nm處的吸光值，得到的OD600的數(shù)值如果在0.6-0.8之間，表明細(xì)菌處于旺盛生長的對數(shù)生長期，OD6003表明細(xì)菌已經(jīng)飽和等。細(xì)菌的生長情況,可以通過測OD600來監(jiān)測。細(xì)菌的生長比較好的時期是在OD600為1時 枯草芽孢桿菌在0.03 %0.3 %豬膽鹽溶液中存活率均超過90 %，這說明，枯草芽孢桿菌對膽鹽具有良好的耐受性。在不同質(zhì)量濃度豬膽鹽液體培養(yǎng)基中，枯草芽孢桿菌均得到了增殖，但增殖幅度不大，說明豬膽鹽對枯草芽孢桿菌的增殖具有抑制作用，當(dāng)豬膽鹽質(zhì)量濃度為0.3 %時，其抑制作用明顯增加。作用機理：作用機理：1枯草

5、芽孢桿菌菌體生長過程中產(chǎn)生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)對致病菌或內(nèi)源性感染的條件致病菌有明顯的抑制作用2枯草芽孢桿菌迅速消耗環(huán)境中的游離氧，造成腸道低氧，促進有益厭氧菌生長，并產(chǎn)生乳酸等有機酸類，降低腸道PH值，間接抑制其它致病菌生長3刺激動物免疫器官的生長發(fā)育，激活T、B淋巴細(xì)胞，提高免疫球蛋白和抗體水平，增強細(xì)胞免疫和體液免疫功能，提高群體免疫力4枯草芽孢桿菌菌體自身合成-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶等酶類，在消化道中與動物體內(nèi)的消化酶類一同發(fā)揮作用5能合成維生素B1、B2、B6、煙酸等多種B族維生素，提高動物體內(nèi)干擾素和巨噬細(xì)胞的活性。6.枯草芽孢

6、桿菌菌體生長過程中產(chǎn)生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)對致病菌或內(nèi)源性感染的條件致病菌有明顯的抑制作用。7.枯草芽孢桿菌迅速消耗環(huán)境中的游離氧，造成腸道低氧，促進有益厭氧菌生長，并產(chǎn)生乳酸等有機酸類，降低腸道PH值，間接抑制其它致病菌生長。8.刺激動物免疫器官的生長發(fā)育，激活T、B淋巴細(xì)胞，提高免疫球蛋白和抗體水平，增強細(xì)胞免疫和體液免疫功能，提高群體免疫力?？莶菅挎邨U菌不僅在飼料中應(yīng)該比較廣泛，在污水處理及生物肥發(fā)酵或發(fā)酵床制作中應(yīng)用也相當(dāng)廣泛，是一種多功能的微生物。應(yīng)用范圍：應(yīng)用范圍：枯草芽孢桿菌不僅在飼料中應(yīng)用比較廣泛，在污水處理及生物肥發(fā)酵或發(fā)酵床制作中

7、應(yīng)用也相當(dāng)廣泛,是一種多功能的微生物.1 市政和工業(yè)污水處理，工業(yè)循環(huán)水處理，腐化槽、化糞池等處理，畜牧養(yǎng)殖動物廢料、臭味處理，糞便處理系統(tǒng)，垃圾、糞坑、糞池等處理；2畜牧、家禽、特種動物及寵物養(yǎng)殖，水產(chǎn)養(yǎng)殖；3可以與多種菌種混配，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有重要作用。注意事項：注意事項：1可與低濃度抗生素同時使用，不得與殺菌劑、消毒劑、化學(xué)藥品、農(nóng)藥等同時存放使用。2若使用過量不會對動物造成任何傷害。初次使用時，環(huán)境突變時，動物患病時加倍使用。3包裝開啟后最好一次性用完，未用完密封保存。菌種培養(yǎng)斜面培養(yǎng)法菌種菌種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂 33g/L，自然pH值儀器設(shè)備儀器設(shè)備控溫?fù)u床、高壓蒸氣滅

8、菌鍋、電子天平、pH測定儀、無菌操作臺和紫外分光光度計。制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基稱取33g營養(yǎng)瓊脂，蒸餾水1000ml，121滅菌30min。分裝分裝 按照實驗要求，可將配置的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角瓶中。液體分裝：分裝的高度以試管高度的1/4左右為宜；分裝三角瓶的量則根據(jù)需要而定，一般以不超過三角瓶的一半為宜。固體分裝：分裝于試管中的應(yīng)不超過試管的1/5，滅菌后制成斜面；分裝三角瓶的量以不超過一半為宜。加塞加塞培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能。包扎包扎加塞后，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉

9、塞，外邊再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱，組別，配制日期。三角瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)扎好，使用時容易解開，同樣注明。滅菌滅菌將配置好且包扎完畢的固體、液體培養(yǎng)基及本實驗涉及的試管、三角瓶等及400ml純水于高壓滅菌器中以0.14Mpa，121條件下高壓蒸汽滅菌20分鐘。斜面擱置斜面擱置將培養(yǎng)基冷卻至50左右時放置斜面，斜面在試管的1/2處為宜，待斜面凝固后，放置于冰箱中待用。接種接種接種到斜面培養(yǎng)基中，標(biāo)注上日期等信息。放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)作為一級種子。保藏保藏斜面置于37的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)23天，觀察菌種長勢好壞，若菌種長勢好則將其放入冰箱中保藏，若長勢不好則需多次斜面轉(zhuǎn)接

10、。無菌操作無菌操作培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的工具（如接種環(huán)和吸管等）在無菌條件下接種含菌材料（如樣品，菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上，這個過程叫做無菌接種操作。在實驗室檢驗中的接種必須是無菌操作。實驗臺面不論是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒劑擦洗；水平是倒瓊脂培養(yǎng)基時利于培養(yǎng)皿內(nèi)平板的厚度保持一致。在實驗臺上方，空氣流動應(yīng)緩慢，雜菌應(yīng)盡量減少，其周圍雜菌也應(yīng)越少越好。為此，必須清掃室內(nèi)，關(guān)閉實驗室的門窗，并用消毒劑進行空氣消毒處理，盡可能地減少雜菌的數(shù)量。 空氣中的雜菌在氣流小的情況下，隨著灰塵落下，所以接種時，打開培養(yǎng)器皿的時間應(yīng)盡量短。 用于接種的器具必須經(jīng)干熱或火焰等滅菌。接種環(huán)的火焰滅菌方法：通常接種環(huán)在火焰上充分燒紅（接種柄，一邊轉(zhuǎn)動一邊慢慢地來回通過火焰三次），冷卻，先接觸一下培養(yǎng)基，待接種環(huán)冷卻到室溫后，方可