1、豬藍耳病發(fā)病機理及提高非特異性免疫重要性圖一藍耳病病毒（PRRSV）1豬藍耳?。≒RRS）的發(fā)病機理藍耳病病毒（PRRSV）進入豬機體后，侵入肺泡巨噬細胞，造成嚴重的間質性肺炎，入侵的第二天即可造成肺的損害，7天后損傷整個肺尖葉,呈多中心病狀，病毒侵入細胞后在細胞內增殖，使巨噬細胞破裂，溶解崩潰，造成巨噬細胞數(shù)量減少，肺泡壁增厚，淋巴組織呈衰竭狀態(tài)，同時降低了肺泡巨噬細胞對其他細菌和病毒免疫力。另外，因為毒株的變異，導致免疫細胞識別能力降低，從而逃避抗體的作用，極易繼發(fā)或并發(fā)其它疾病，使病情非常復雜。圖二正常巨噬細胞（Healthymacrophage）圖三巨噬細胞被PRRSV攻擊破裂（Unh

2、ealthymacrophage）2非特異性免疫與巨噬細胞2.1 非特異性免疫豬在進化過程中形成的、天生即有、相對穩(wěn)定、無特殊針對性的對病原微生物的天然抵抗力，稱為非特異性免疫或先天免疫。非特異性免疫主要由豬體的屏障結構（血腦屏障、胎盤屏障）、吞噬細胞的吞噬功能、正常組織和體液中的抗菌物質以及炎癥反應等所組成。其中吞噬細胞包括大吞噬細胞（即單核巨噬細胞）和小吞噬細胞（即中性粒細胞）。2.2 巨噬細胞及其特點2.2.1 巨噬細胞巨噬細胞（Macrophage,M（|）由單核細胞發(fā)育而成，成熟后的體積較大。游離于血液中與固定在不同組織中的巨噬細胞其形態(tài)與名稱不同。在光學顯微鏡下，可見有圓形或其他形

3、狀的核，染色質較濃縮，經(jīng)特殊染色還可見到線粒體、高爾基體和中心體等。在電子顯微鏡下，還可進一步看到內質網(wǎng)、溶酶體、微絲、微管和吞噬體等。巨噬細胞在機體免疫中有著極其重要的作用。最初只知道它有吞噬外來異物的作用，因此只認為是一種非特異性的免疫作用。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)其在協(xié)同T、B淋巴細胞參與特異性免疫反應及在抗感染方面都有著重要的作用。2.2.2 巨噬細胞特點巨噬細胞具有多種免疫功能，它可吞噬消滅入侵的病原體、有害異物，清除損傷、衰老、死亡和突變細胞及代謝廢物，能加工、提呈抗原給淋巴細胞。所以特異性免疫功能是建立在非特異性免疫功能基礎之上，使機體免疫功能進一步完善。巨噬細胞之所以能完成這些功能

4、是由于它具有三個特點：（1）巨噬細胞是機體最早識別外來異物的細胞。人們驚異地發(fā)現(xiàn)，巨噬細胞可以識別和吞噬各種各樣的外來的或“自身”的物質，沒有這種廣泛而有效的識別，也就談不上免疫系統(tǒng)對抗原物質的免疫應答和有效保護。研究表明這種識別的基礎是在巨噬細胞膜上存在很多的受體（表1）,這種能力是在物種系統(tǒng)發(fā)生中逐漸形成的。表1單核巨噬細胞膜上的受體性能受體名稱結合對象對胰酶敏感性主要功能Fc受體I(FcRIgG2a敏感ADCC、調理、吞Fc受祿力(FcRm聚合IgG、IgG1、IgG2b不敏感ADCC、端理、吞噬Fc受體田（FcRIgG3ADCC、調理、吞田）噬IgM受體(Fc單體或完整ADCC、調理、

5、吞補體R3b受體(C3bR)IgMC3b、C3cADCC、手連、吞噬補體C3d受體(C3bR)C3b、C4ADCC、粘連、吞噬各種淋巴因子受體MIF、CSF、見注(1)淋巴細胞受體LDCFT、B細胞細胞間相互激活聚合蛋白受體聚合的蛋白轉接異物，加速吞連接蛋白受體(FNR)連接蛋白(FN)促進內看消除病原高密度脂蛋白受體高密度脂蛋白乳鐵傳遞蛋白受體乳鐵蛋白唾液糖蛋白受體唾液糖蛋白胰島素受體胰島素纖維蛋白原受體纖維蛋白質其他各種受體見注(2)見注(2)注：(1)MIF可阻止巨噬細胞游動。CSF可促進單核巨噬細胞生長，LDCF(淋巴細胞衍生的趨化因子)招引單核巨噬細胞趨向異物；(2)包括對各種激素、

6、神經(jīng)肽、多糖質、糖蛋白、脂蛋白及脂多糖的受體，可調控單核巨噬細胞功能。(2)巨噬細胞具有多種胞內酶和胞外酶(表2),使之有效地消化、殺滅被吞噬進入細胞內的病原體及異物。表2單核巨噬細胞的酶類及其功用酶系名稱主要功能溶酶體水解酶組織蛋白酶B(cathepsinB1細胞內水解消除吞噬的異物及病原透明質酸酶(hyaluronidase?體細胞外破壞炎癥組織糖甘酶(gucosidase)脫氧-/核糖核酸酶促進創(chuàng)傷愈合降解彈性蛋白促進溶解血塊促進降低血壓降解脂質及磷脂、消除內毒素脂多糖氧化及催化Cl-水解殺菌(DNase/RNase)溶酶源中性蛋白酶膠原蛋白酶(collagenase)彈性蛋白酶(ela

7、stase)血纖維蛋白溶酶原激活劑(PA)血管緊張素轉化酶(angiotensinCse)溶酶體脂酶脂蛋白脂酶(lipoproteinlipasej-)磷月旨酶(phospholipase)溶菌酶(lysozyme)髓過氧化物酶(myeloperoxidase)胞外酶核甘酸酶(nucleotidase)在細胞外進行物質代謝，供給養(yǎng)分及能量亮氨酸氨肽酶(leucine/aminopeptodase)堿性磷酸酯酶(alk.phophoesterase)精氨酸酶(arginase)脫氨酶(deaminase)其他酶類3)巨噬細胞還可以分泌很多活性物質，其分泌產物之多，可與肝細胞相比擬。這些分泌產物對

8、組織、細胞起著重要調節(jié)作用(表3)。表3巨噬細胞的分泌產物1 .單核因子(monokines)5.細胞外基質及連接蛋白IL-1=LAF纖維連接素(Fibronectin)IL-3=CSFIL-6=BCDF干擾素(IFN-a/y)=MAF腫瘤壞死因子(TNF)2 .激素(normones)樣物前列腺素(PGE2,PGF2a)凝血嗯烷(thromboxane)白三烯(leukotriene)花生四烯酸(eicosatetraenoicacid促腎上腺皮質激素(ACTH)胰島素樣物(insuline-like)胸腺素B4(thymosineB4)為內啡肽(為endorphin)二羥基維生素D3 .補

9、體(comlement,C)成分C1、C2、C3、C4及C5備解素(P)、B因子、D因子抑制物：C3b抑制物、B1H補體裂解成分(由M小蛋白酶裂解)：C3a、C3b、C5a、Bb4,凝血因子凝血因子V、V11、1X及X凝血酶原、凝血酶原酶組織因子、血纖維蛋白溶酶95000明膠結合蛋白凝血揚升素(thrombospodin)6 .反應性中間物超氧化物(superxide)過氧化氫(H2O2)羥基(hydroxylradical)亞硝酸鹽、硝酸鹽7 .生長因子及活化因子粒細胞集落刺激因子(G-CSF)中性粒細胞活化因子(NAF)單核細胞/巨噬細胞集落刺激因子(G/M-CSF)促紅細胞生成素細胞集落

10、增強因子成纖維細胞生成因子、活化因子及轉化因子漿細胞瘤生長因子血小板衍生的生長因子谷胱甘肽(glutathione)8 .酶及細胞抑制物蛋白酶抑制物a1抗胰蛋白酶a2巨球蛋白(a2M)膠原蛋白酶抑制物磷脂酶抑制物月旨調節(jié)素(lipomodulin)抑制物、血纖維蛋白溶酶原激活劑及抑制物9 .喋吟及喀咤產物胸腺嚅咤脫氧核昔（dT）脫氧胸音（deoxycytidine）尿（uracil）尿酸新蝶吟（neopterin）10 .其他結合蛋白3特異性免疫與藍耳病疫苗3.1 特異性免疫1L-1抑制物轉鐵蛋白(transferrin)同族鐵蛋白(isoferrin)轉鉆胺素II(rtanscobalami

11、neII)脫輔基月旨蛋白E(apolipopreoteinE)脂質轉移蛋白(lipidtransferpreotein)親和素(avidin)特異性免疫又稱獲得性免疫或適應性免疫，是經(jīng)后天感染（病愈或無癥狀的感染）或人工預防接種（菌苗、疫苗、類毒素、免疫球蛋白等）而使機體獲得抵抗感染能力。一般是在微生物等抗原物質刺激后才形成的（免疫球蛋白、免疫淋巴細胞），弁能與該抗原起特異性反應。主要參與細胞是T、B細胞和抗原提呈細胞。在抗原刺激下，機體的特異性免疫應答（體液免疫或細胞免疫），般可分為感應階段、反應階段和效應階段。感應階段是對抗原的識別及處理階段。絕大多數(shù)抗原物質第一次進入機體后，須經(jīng)巨噬細胞

12、處理后將抗原信息傳遞給免疫活性細胞（T細胞、B細胞）。反應階段是免疫活性細胞接受抗原刺激后，進行分化、增殖，產生大量致敏T細胞和B細胞，由B細胞產生抗體的階段。此階段尚有少量細胞停止分化、增殖，成為保留抗原信息的記憶細胞。效應階段是致敏T細胞及抗體發(fā)揮免疫功能的階段。當再次遇到相同抗原時，致敏T細胞直接作用于抗原，同時釋放出多種淋巴因子，消滅抗原，發(fā)揮細胞免疫的作用。而抗體可直接作用于抗原，或與巨噬細胞、補體等協(xié)同作用，殺滅或破壞抗原異物，發(fā)揮體液免疫的功能。圖四巨噬細胞加工、處理和遞呈抗原3.2 豬藍耳病疫苗隨著PRRS的發(fā)現(xiàn)，PRRS的疫苗研究也就隨之開展，對于藍耳病的免疫現(xiàn)在養(yǎng)豬界的說法

13、很多，到底應不應該注射疫苗，在疫苗的選擇上是應用弱毒苗還是滅活苗，每個人都有自己的看法。目前，世界上商品化的PRRS疫苗有弱毒苗和滅活苗兩類。弱毒苗的缺點是：把它注射入體內的效果與感染野毒沒有多大差別。對完全藍耳病陰性的場或已經(jīng)是藍耳病陽性的豬，當注入另外一種毒株的的PRRS疫苗后，它會同野毒一樣照樣穿過胎盤侵害胎兒。有時，如果我們所使用的疫苗的基因序列與某一群體存在的PRRS病毒基因序列相似性達到70%80%時，疫苗會比較有效。如果我們所使用的疫苗的基因序列與我們本場存在的PRRS病毒基因序列不同時，則意味著可能會有一場新的藍耳病到來。Botner等報道，在丹麥，對1000多頭PRRS血清學

14、陰性豬使用了弱毒疫苗，可是不久后豬群發(fā)生了PRRS,而且從流產胎兒和死胎中分離到了疫苗病毒，發(fā)現(xiàn)疫苗病毒可經(jīng)胎盤感染胎兒，并向未接種的母豬傳播，有些豬群則表現(xiàn)出急性PRRS樣綜合癥狀。Opriessnig報道從一個多次接種IngelvacPRRSMLV的豬場發(fā)生PRRS后分離到一株PRRSV98-38803，并證實該毒株來自于IngelvacPRRSMLV。所以PRRS弱毒疫苗的毒力返強的可能性是存在的。從以上結果來看，PRRS弱毒疫苗免疫產生期快，在控制PRRS臨床癥狀上明顯好于PRRS滅活疫苗。但PRRS強毒和弱毒在豬體內的反應過程是一致的，所以長期使用PRRS弱毒疫苗所帶來的安全問題仍是

15、目前PRRS免疫中最大的爭議。滅活苗的缺點是：免疫劑量大、免疫次數(shù)多、免疫力產生期較長，誘導有效免疫力的能力比較差。但毫無疑問，滅活苗在使用上是比較安全的，可以誘導一定的抗體產生，如果抗體與野毒的基因序列比較相似，同樣還會產生保護；如果基因序列不相似，則保護力比較差。這就是這兩種疫苗的不同之處，了解到他們的缺點后我們在生產實踐中就要避免它。所以要根據(jù)每個養(yǎng)殖場不同的情況來選擇疫苗。滅活苗的安全性大大高于弱毒苗，而且不存在散毒的危險，然而再好的滅活苗的效果也不能和弱毒苗的效果相比較的。所以對于種豬和陰性場應該選用滅活苗，而陽性場為了凈化藍耳病最好選用免疫效果好的弱毒疫苗。專家之音南方農村報：當前

16、，不少地方養(yǎng)殖場出現(xiàn)接種藍耳病疫苗（尤其是弱毒苗）后大量死豬的現(xiàn)象，這是否意味著弱毒苗有很大的危險性？樊福好：我個人覺得，接種疫苗只是防控高致病性豬藍耳病的權宜之計，市場上個別廠家的產品也存在著滅活疫苗滅活不完全、弱毒疫苗混有強毒的情況，建議養(yǎng)殖戶在選用疫苗產品時，一定要慎重。從理論上說，弱毒苗雖然在實際效果上會好于滅活疫苗，但是在目前的情況下，藍耳病的免疫還存在著許許多多的問題尚未解決，匆匆忙忙推薦某些疫苗（弱毒或滅活疫苗）的做法值得商榷。目前針對所謂新變異毒株的疫苗主要是滅活疫苗，具免疫效果，我個人不太了解。減少養(yǎng)豬生產中抗生素的使用，減少過多種類的疫苗接種，反而是當前提高豬群免疫水平的有

17、效途徑之一。袁世山：這種打苗（尤其是應急免疫）后發(fā)病的情況可能會出現(xiàn)。主要原因包括：第一，免疫程序（亦即打苗時機及疫苗劑量）不當：嚴格來說，應急免疫對藍耳病效果不好，但如果進行，建議越早越好；注苗前已感染的豬肯定是要發(fā)病乃至死亡的；另外，因為藍耳病疫苗保護性免疫應答遲緩，一般需要3-4周才能起作用，在此期間內感染豬也會發(fā)病或死亡。第二，慎選疫苗，正規(guī)疫苗質量較好，一般無毒力過高或返強問題。楊漢春：關于藍耳病活疫苗的使用在生產上應慎重，從國家相關單位的試驗結果來看，現(xiàn)有的活疫苗對流行的變異毒株的免疫保護率不好；至于變異毒株的滅活苗，已有的數(shù)據(jù)表明，對變異毒株具有較高的免疫保護率，但在實際生產中的

18、免疫效果如何還需要進一步驗證，對其他藍耳病病毒毒株的免疫效果如何還缺乏實驗室數(shù)據(jù)，因藍耳病病毒本身就容易變異，不同毒株之間的交叉的免疫保護效果就不是很好，這也是防治藍耳病的難題所在。至于自家組織苗，我認為規(guī)?；i場可以采用這一措施，用采自豬場本身發(fā)病死亡豬的組織制成滅活苗（但要滅活徹底）用于本場豬的免疫，也不失為一種有效的方法，但最好不要用于其他豬場。（樊福好：現(xiàn)任廣東省養(yǎng)豬行業(yè)協(xié)會技術部部長、農業(yè)部種豬質量監(jiān)督檢驗測試中心基因分析室負責人。）（袁世山：中國農業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所動物傳染病學研究室教授，主持藍耳病基因工程疫苗研制。）（楊漢春：中國農業(yè)大學動物醫(yī)學院教授，對豬豬藍耳病和豬圓環(huán)病

19、毒病研究方面有很高的造詣。）（摘自：南方農村報）圖五藍耳病導致豬耳朵發(fā)綃，母豬流產4非特異性免疫與特異性免疫的比較非特異性免疫與特異性免疫之間有著極為密切的聯(lián)系。以抗病原體來說，非特異性免疫是基礎，它的特點是出現(xiàn)快，作用范圍廣，但強度較弱，尤其是對某些致病性較強的病原體難以一時消滅，這就需要特異性免疫來發(fā)揮作用。特異性免疫的特點是出現(xiàn)較慢，但是針對性強，在作用的強度上也遠遠超過了沒有針對性的非特異性免疫。由于機體在任何時間、任何地點，都有可能接觸到各種各樣的異物，如果全部都以特異性免疫來對付，機體的消耗就會過大，因此先以非特異性免疫來處理，對機體更為有利。特異性免疫是在非特異性免疫的基礎上形成的。例如，進入機體的抗原，如果不經(jīng)過吞噬細胞的加工處理，多數(shù)抗原將無法對免疫系統(tǒng)起到刺激作用，相應的特異性免疫也就不會發(fā)生。止匕外，特異性免疫的形成過程,又反過來增強了機體的非特異性免疫。非特異性免疫與特異性免疫區(qū)別見表4。表4非特異性免疫與特異性免疫區(qū)別范圍細胞組成作用時間作用特點作用時間非特異性免疫特異性免疫機體僅對某一異物（抗原）產