1、植物組織培養(yǎng)和動物植物組織培養(yǎng)和動物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)原理原理細(xì)胞的細(xì)胞的 細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì) 培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有培養(yǎng)基特有成分成分 、植物激素、植物激素 葡萄糖、葡萄糖、 培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果植物體植物體培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株無病毒植株獲得獲得全能性全能性增殖增殖(zngzh)固體固體(gt)液體液體蔗糖蔗糖動物血動物血清清細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系 細(xì)胞或細(xì)細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白胞分泌蛋白第一頁，共二十三頁。溫故而知新溫故而知新植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜

2、交(zjio)（馬鈴薯番茄馬鈴薯番茄）融合融合(rngh)(rngh)的的原生質(zhì)原生質(zhì)體體ABAB再再生生(zishng)出出細(xì)細(xì)胞胞壁壁植物細(xì)胞的融合植物細(xì)胞的融合雜種雜種細(xì)胞細(xì)胞AB雜雜種種植植株株脫脫分分化化愈愈傷傷組組織織再再分分化化植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)原生質(zhì)體原生質(zhì)體B原生質(zhì)體原生質(zhì)體A去去 壁壁去去 壁壁人人工工誘誘導(dǎo)導(dǎo)植物細(xì)胞植物細(xì)胞A植物細(xì)胞植物細(xì)胞B第二頁，共二十三頁。帶著問題帶著問題(wnt)走進(jìn)課堂？走進(jìn)課堂？2.2 2.2 動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程(gngchng)(gngchng)第三頁，共二十三頁。自主閱讀，自主閱讀，p52第第2自然段，自然段，思考下列思考下列

3、(xili)問題：問題：什么叫什么叫動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合 ？（概念（概念(ginin)(ginin)要點(diǎn)）要點(diǎn)）兩個細(xì)胞正在融合兩個細(xì)胞正在融合 受精作用受精作用 兩個兩個(lin )或多個或多個動物細(xì)胞動物細(xì)胞 一個細(xì)胞一個細(xì)胞（雜交單（雜交單核細(xì)胞）核細(xì)胞）第四頁，共二十三頁。植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較. 動物動物(dngw)(dngw)細(xì)胞融合過程示細(xì)胞融合過程示意圖意圖不同DNA的兩個(lin )細(xì)胞 滅活的病毒(bngd)有絲分裂兩個完整的雜交細(xì)胞第五頁，共二十三頁。一、動物細(xì)胞(xbo)融合（細(xì)胞(xbo)雜交）1、概念(ginin)：指兩個(lin )或多個動物細(xì)胞結(jié)合

4、形成一個細(xì)胞的過程。2、結(jié)果： 形成單核的雜交細(xì)胞3、原理：細(xì)胞膜的流動性4、誘導(dǎo)方式物理法：離心、振動、電激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活的病毒第六頁，共二十三頁。 因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合(rngh)，不，不滅滅活的話會感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合?；畹脑挄腥炯?xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。第七頁，共二十三頁。5、過程(guchng)：動物細(xì)胞A動物細(xì)胞B誘導(dǎo)(yudo)，融合2個完整(wnzhng)的雜交細(xì)胞AB有絲分裂（膜融合、質(zhì)融合）（核融合

5、）注意：動物細(xì)胞的融合也需要把多個兩種細(xì)胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再從中篩選雜交細(xì)胞第八頁，共二十三頁。6、意義：突破了有性雜交方法(fngf)的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。7、應(yīng)用：成為研究細(xì)胞(xbo)遺傳、細(xì)胞(xbo)免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段 特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體第九頁，共二十三頁。植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較.思考題思考題1.植物體細(xì)胞雜交時首先應(yīng)用什么(shn me)方法去掉細(xì)胞壁？ 酶解法(ji f)，如纖維素酶或果膠酶2.動物細(xì)胞融合時需要進(jìn)行(jnxng)去壁處理嗎？為什么？無需，因?yàn)閯游锛?xì)胞無細(xì)胞壁3.植物體

6、細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法4.動物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能 還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)5.植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形 成完整的雜種個體，動物細(xì)胞融合后能形成雜種動物個體嗎？不能第十頁，共二十三頁。植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交(zjio)和動物細(xì)胞融合的比較和動物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法用途用途獲得獲得(hud)雜種植株雜種植株細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動

7、性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞細(xì)胞(xbo)的全能性的全能性去除細(xì)胞壁去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合物理（離心、振蕩、電物理（離心、振蕩、電刺激）刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法（同左）物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒滅活的病毒主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體第十一頁，共二十三頁。植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較.2.動物(dngw)細(xì)胞融合的概念 動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個(y )細(xì)胞的過程，融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞。第十二頁

8、，共二十三頁。1 1、抗體抗體1.1 1.1 概念：概念： 抗體是機(jī)體受抗原抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫的具有免疫(miny)(miny)功能的功能的球蛋白球蛋白 。1.2 1.2 來源：來源： B B淋巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞。第十三頁，共二十三頁。 B B淋巴細(xì)胞與抗體淋巴細(xì)胞與抗體(kngt)(kngt)的關(guān)系：的關(guān)系：B B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。動物動物(dngw)(dngw)體內(nèi)的體內(nèi)的B B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原

9、具有特種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。異性免疫作用。每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。自主閱讀自主閱讀P52：傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個缺陷是什么？怎樣解決這個(zh ge)問題？問題？第十四頁，共二十三頁。2.1 、單克隆、單克隆 由一個細(xì)胞由一個細(xì)胞(xbo)經(jīng)過無性繁殖經(jīng)過無性繁殖(多次有絲分裂多次有絲分裂)形形成的一個細(xì)胞群，叫一個克隆，即單克隆。成的一個細(xì)胞群，叫一個克隆，即單克隆。2.2 、單克隆抗體、單克隆抗體 由一個效應(yīng)由一個效應(yīng)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖形成的淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖形成的一

10、個細(xì)胞群產(chǎn)生一個細(xì)胞群產(chǎn)生(chnshng)的化學(xué)性質(zhì)單一，特異的化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體，即單克隆抗體。性強(qiáng)的抗體，即單克隆抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞群。形成細(xì)胞群。第十五頁，共二十三頁。3、原理：雜交瘤細(xì)胞具有兩個親本(qn bn)的特性，即能迅速大量增殖，又能足夠數(shù)量的單一抗體。4、過程(guchng)B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞(xbo)誘導(dǎo)融合B-B細(xì)胞B-瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（ B-瘤細(xì)胞）克隆化培養(yǎng)抗體檢測雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體第十六頁，共二十三頁。6.單克隆抗體單

11、克隆抗體(kngt)的應(yīng)用：的應(yīng)用：特異性強(qiáng)、靈敏度高、產(chǎn)量特異性強(qiáng)、靈敏度高、產(chǎn)量(chnling)(chnling)大大 作為診斷試劑：準(zhǔn)確識別作為診斷試劑：準(zhǔn)確識別(shbi)(shbi)各種抗原物質(zhì)，并與各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合特異性結(jié)合 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速準(zhǔn)確、高效、簡易、快速用于用于運(yùn)載藥物：制成運(yùn)載藥物：制成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療5、單克隆抗體的特點(diǎn)：單克隆抗體的特點(diǎn)：第十七頁，共二十三頁。思考思考(sko)問題問題：1 1、本過程、本過程(guchng)(guchng)利用了哪些原理？利用了哪些原理？免疫原理

12、免疫原理(yunl)(yunl)，細(xì)胞融合原理，細(xì)胞融合原理(yunl)(yunl)和動物細(xì)胞培和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理養(yǎng)原理(yunl)(yunl)這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有物質(zhì)，不僅具有B B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體2 2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B B細(xì)胞融合？細(xì)胞融合？第十八頁，共二十三頁。植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較.知識結(jié)構(gòu)兩個(lin )過程動物(dngw)細(xì)胞培

13、養(yǎng)過程單克隆抗體(kngt)制備過程三個“一”一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活的病毒一個新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢第十九頁，共二十三頁。1、動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是 （ ） A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和克服遠(yuǎn)源雜交不親和 B.制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.培育新物種培育新物種 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞生產(chǎn)雜種細(xì)胞2、 動物細(xì)胞融合過程中所用動物細(xì)胞融合過程中所用(su yn)的誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)劑滅活的病毒，抗原性和感染力的有無是滅活的病毒，抗原性和感染力的有無是 （ ） A.失去抗原性，具有感染力失去抗原性，具有感染力 B.具有抗原性，也具

14、有感染力具有抗原性，也具有感染力 C.失去抗原性，也失去感染力失去抗原性，也失去感染力 D.具有抗原性，失去感染力具有抗原性，失去感染力BD 第二十頁，共二十三頁。3 3、“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”是指是指 （ ） A.A.單克隆抗體單克隆抗體 B. B.雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 C. C.產(chǎn)生產(chǎn)生(chnshng)(chnshng)特定抗體的特定抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物在單克隆抗體上連接抗癌藥物 D4、科學(xué)家們用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜科學(xué)家們用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量克隆交瘤細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量克隆(k ln

15、)抗體，與骨髓瘤抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是細(xì)胞融合的是 （ ） A.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B.未經(jīng)過免疫的未經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.未經(jīng)過免疫的未經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C第二十一頁，共二十三頁。植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較.5. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合(rngh)后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是 （ ）淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞A. B.C. D. C6.動物細(xì)胞融合(rngh)和植物原生質(zhì)融合(rngh)決定于 ( )A.細(xì)胞膜的流動性 B細(xì)胞膜的選擇透過性C.細(xì)胞質(zhì)的流動性D細(xì)胞質(zhì)酶的活性 A第二十二頁，共二十三頁。植物組織培養(yǎng)