1、分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用進展摘要 分子生物學(xué)技術(shù)是醫(yī)學(xué)檢驗的重要診療手段。本文概述醫(yī)學(xué)檢驗中常用的分子生物學(xué)技術(shù),列舉其在臨床病原微生物檢驗、腫瘤診斷及評估、遺傳病診斷、免疫系統(tǒng)疾病診斷中的具體應(yīng)用,分析分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用中應(yīng)注意的問題,并對發(fā)展趨勢進行預(yù)測。關(guān)鍵詞 分子生物學(xué)技術(shù);醫(yī)學(xué)檢驗;應(yīng)用;進展分子生物學(xué)是以核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子為研究對象的學(xué)科,分子生物學(xué)技術(shù)即建立在核酸生化基礎(chǔ)上的一類研究手段,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗中。研究內(nèi)容也從DNA 鑒定、擴展到核酸及表達產(chǎn)物分析,技術(shù)不斷進步為原微生物檢驗、腫瘤診斷及評估、遺傳病診斷、免疫系統(tǒng)疾病診斷提供重要依據(jù)和創(chuàng)新思路?，F(xiàn)就分

2、子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用進展進行綜述,試分析應(yīng)注意的問題及預(yù)測發(fā)展趨勢。1 醫(yī)學(xué)檢驗中常用的分子生物學(xué)技術(shù)概述分子生物學(xué)技術(shù)的核心是聚合酶鏈反應(yīng)(PCR,能在最短的時間內(nèi)擴增。由此衍生出新PCR 技術(shù),如原位PCR技術(shù)、實時定量PCR、鏈置換擴增技術(shù)、LCR、NASBA、TAS等。此外,生物芯片技術(shù)、核酸探針技術(shù)、生物傳感器、SELEX技術(shù)、循環(huán)核酸分析技術(shù)都極大的完善了檢驗技術(shù),直接解釋生命規(guī)律,在臨床診斷和治療中意義重大。2 分子生物學(xué)技術(shù)在臨床中的具體應(yīng)用2.1 病原微生物檢驗PCR和生物芯片技術(shù)用于病原微生物檢驗術(shù)與傳統(tǒng)的培養(yǎng)鑒定、免疫測定相比,其具有高的敏感性,較短的耗時和更廣

3、的適用范圍1。PCR通過向反應(yīng)管中加入特異性引物可同時鑒定出單種或多種病原體,即便存在大量死菌也能得到準確結(jié)果,不受混合標本和微生物生長時間的限制。生物芯片技術(shù)則以其更高的靈敏性和高效率,同時檢測出上百種病原微生物,可用于快速查找樣本的耐藥基因指導(dǎo)臨床用藥。2.2 腫瘤及遺傳病診斷研究證實腫瘤及遺傳病幾乎都存在著一定的基因缺陷,只要找到人體中與基因相互作用的結(jié)合點,從基因水平診斷就能準確診斷。通過基因芯片判定靶基因P53抑癌基因的突變,通過分子蛋白質(zhì)組學(xué)、生物傳感器和流式細胞術(shù)診斷腫瘤特異性標志物。在遺傳病中,分子生物技術(shù)能識別患病家族基因存在的特定多態(tài)性,常用技術(shù)有DNA限制性片段長度多態(tài)性

4、分析,單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析,熒光原位雜交染色體分析,酶基因調(diào)控和微陣列技術(shù)。2.3 免疫系統(tǒng)疾病診斷免疫系統(tǒng)疾病診斷關(guān)鍵是確定基因水平上的調(diào)控表達。如在人類免疫缺陷病毒的研究中,分子生物納米技術(shù)即以抗體為基礎(chǔ),用免疫分析和磁性修飾的方法來檢測免疫物質(zhì),通過酶、熒光劑、同位素把特異的抗體抗原與納米磁性微球固定,既能自動檢測人免疫缺陷病毒1型和2型抗體,為人類防治病毒性疾病提供了有力的武器。3 分子生物學(xué)技術(shù)在檢驗應(yīng)用的新進展現(xiàn)階段分子生物學(xué)新技術(shù)的發(fā)展方興未艾,給人們提供了探索人類生命科學(xué)的工具,推動了檢驗學(xué)發(fā)展。分子生物技術(shù)最顯著的醫(yī)學(xué)成就是對遺產(chǎn)病中的致病基因的準確定位及克隆,早在1998年就

5、完成了遺傳性耳聾的基因克隆;2003年SARS肆虐時,科學(xué)家就研制出專門診斷該病的基因芯片;2004年后實現(xiàn)了用多重PCR技術(shù)對我國新生兒多發(fā)的地中海貧血、苯丙酮尿癥、G6DP缺乏癥的產(chǎn)前和病例診斷;近年來,遺傳標記技術(shù)的進步,結(jié)合現(xiàn)有分子學(xué)研究技術(shù),加速了遺傳基因圖譜的制作和相關(guān)疾病的基因檢測和鑒定,從而為醫(yī)學(xué)檢驗的加速發(fā)展提供了有效的載體。4 存在問題及發(fā)展趨勢現(xiàn)階段面臨的問題主要是技術(shù)相對復(fù)雜和儀器要求太高、藥品和反應(yīng)盒昂貴等2,限制了臨床推廣。首先,合理選用檢驗項目的問題,分子生物學(xué)方法具有高特異性和高靈敏性,但臨床中仍要根據(jù)實際需要選用經(jīng)濟合理的檢驗項目,如結(jié)核菌培養(yǎng)和涂片鏡檢就能達

6、到目的,不必舍廉選貴,增加患者負擔(dān)。其次,疾病診斷過度依賴檢驗結(jié)果問題,應(yīng)將臨床資料綜合考慮,不能僅靠分子生物學(xué)技術(shù)檢驗結(jié)果就妄下診斷,忽略標本取樣和檢驗過程中的操作不當及病程發(fā)展規(guī)律造成的假陽性或是假陰性,貽誤病情。再者,上級部門管理不足問題,國家相關(guān)部門要擔(dān)任監(jiān)管的職責(zé),參考國際慣例,制定符合我國醫(yī)學(xué)檢驗現(xiàn)狀的實驗操作管理規(guī)章制度,嚴格培訓(xùn)檢驗人員,規(guī)范試劑的準入和儀器的管理,最大程度保證檢驗結(jié)果的可信度。雖然分子生物技術(shù)在臨床推廣應(yīng)用中存在著許多尚待解決的問題,但是它仍然顯現(xiàn)出了快速發(fā)展的趨勢。未來其發(fā)展會傾向于:現(xiàn)有、僅停留在實驗室的分子生物學(xué)技術(shù)逐步向臨床實用型改進,降低實驗投入、簡

7、化操作步驟,推進實驗過程全自動化的實施降低人為因素對結(jié)果的影響,根據(jù)臨床實際修正技術(shù),提高檢驗的特異性和敏感性。積極推進實驗室建設(shè),加大儀器和檢驗人員的培訓(xùn)投入,為分子生物學(xué)的臨床應(yīng)用提供必要的基礎(chǔ)保障,以先進的、可持續(xù)性的實驗檢驗手段為臨床提供可靠的依據(jù)。參考文獻1 Yuregir OO,Sahin FI,Yilmaz Z,et al.Fluorescent in situ hybrid-ization studies in multiple myelomaJ.Hematology,2009,14(2:90-94.2 李鵬.現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用J.臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志,2007

8、,3(6:161.PCR在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用關(guān)鍵詞:醫(yī)學(xué)檢驗應(yīng)用PCR現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗王耿新劉德亮王志群陳獻業(yè)山東省青島市腫瘤醫(yī)院青島266042聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR 又稱體外基因擴增技術(shù)或DNA擴增技術(shù)。自1985 年美國PE-Cetus 公司的K.B Mullis 等人首創(chuàng)了PCR 技術(shù)之后,它以相當驚人的速度被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)及分子生物學(xué)等各個領(lǐng)域?，F(xiàn)今,PCR 技術(shù)已成為一種對標本中特定的DNA 片段進行分析研究和檢測鑒定的重要方法。近20 年來P CR 技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)等各個研究領(lǐng)域和臨床應(yīng)用中發(fā)揮了重大的作用,在病原體鑒定、遺傳病診

9、斷、免疫學(xué)研究、癌基因探索及治療等方面都作出了相應(yīng)的貢獻。1. PCR 技術(shù)的基本原理與特點1-2PCR 技術(shù)的基本原理是模仿DNA 體內(nèi)復(fù)制的機制,在體外進行擴增特異的DNA 片段。它主要是由三個基本步驟組成的循環(huán)反應(yīng)。首先是變性,用加熱的方法使雙鏈DNA 解鏈成兩股單鏈;其次是復(fù)性,用降溫的辦法使這兩股單鏈按堿基互補的原則分別與加入的兩條人工合成的寡聚核苷酸鏈(引物結(jié)合成雙鏈;最后是延伸,在合適的緩沖液、鎂離子及脫氧核苷酸存在的條件下,用DNA 聚合酶進行催化,按堿基配對的原則合成互補鏈。引物從3 端進行延伸,合成的方向為5 端(一條人工合成的引物至3 端,從而合成與模板DNA 結(jié)構(gòu)相同的

10、片段。重復(fù)上述三步驟,變性復(fù)性引物延伸的過程,經(jīng)過約30 個周期的循環(huán)(每三個步驟為一周期,約需2-3 分鐘,1-2 小時就能將所需基因擴增幾百萬倍,使極微量的所需DNA 達到極易檢測的水平。其擴增效率公式為:Y= (1+X n ,式中Y 為擴增數(shù)目,X 為放大效率,n 為循環(huán)次數(shù)。PCR 技術(shù)具有敏感性高、特異性強、操作簡便、快速省時等特點。其靈敏度可達到Pg 級,甚至達到fg 級3 水平,而被擴增的基因片段能與原基因片段保持不變。PCR 技術(shù)操作簡便、快速而易掌握,并且對標本要求不高。用過去的方法完成一項試驗少則幾周,多則幾個月。應(yīng)用全自動DNA 擴增儀,整個PCR 過程均由電腦控制,只需

11、數(shù)小時即可完成整個試驗過程,用極微量的粗制標本就可獲取目的產(chǎn)物。2. 常用的幾種PCR 及主要用途4-52.1 定量PCR :用于mRNA 定量及轉(zhuǎn)錄水平的研究。2.2 抗原捕獲PCR (AC-PCR :用于病毒感染的檢測。2.3 不對稱PCR (Asymmetric PCR :用于制備探針或測序。2.4 彩色PCR (CCA-PCR “用于檢測某些多型別病毒的混合感染。2.5 原位逆轉(zhuǎn)錄PCR (In Situ RT-PCR :定位檢測細胞中RNA 病毒感染。2.6 逆轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR :用于克隆cDNA 、檢測RNA 病毒、cDNA 探針。2.7 反向PCR (inverted

12、PCR :用于擴增已知基因片段兩側(cè)的未知序列。2.8 膜PCR (membrane-bound PCR :可去除污染的雜質(zhì)或PCR 產(chǎn)物殘留,檢測低豐度靶DNA 。2.9 間接原位PCR (Indirect In Situ PCR :定位檢測細胞中DNA 病毒感染,是目前應(yīng)用較廣泛的一種原位PCR 技術(shù),其特異性比直接PCR 強。3. PCR 技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的地位現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明,人類疾病多數(shù)是直接或間接與基因有關(guān)6 ,如腫瘤、糖尿病和心血管疾病等。在醫(yī)學(xué)實驗診斷中我們經(jīng)歷了生化和免疫診斷的發(fā)展過程,由于各類擴增技術(shù)的出現(xiàn)使我們進入了基因診斷的新時代并成就了現(xiàn)代意義基因診斷的崛起。這將改變以

13、往對疾病的表型認識和表型診斷,從本質(zhì)上認識疾病和診斷疾病。在各類擴增技術(shù)中,PCR 的地位尤為突出。目前,全世界利用PCR 技術(shù)診斷感染性疾病每年達幾千萬人次,其費用早已大幅下降,說明PCR 有著巨大的潛在市場。美國臨床檢驗標準化委員會于1995 年頒布了關(guān)于感染性疾病分子診斷應(yīng)用范圍、條件和質(zhì)量控制細則等準則文件7 。而國際臨床化學(xué)學(xué)會于1998 年又發(fā)布了關(guān)于分子擴增在臨床診斷中應(yīng)用的質(zhì)量評估基礎(chǔ)的文件并對PCR 操作的各個環(huán)節(jié)進行了詳細論述8 。由此可見,兩個權(quán)威性文件也都肯定了PCR 技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗方面的重要性。基因診斷可能將是以后的發(fā)展方向并作為疾病的常規(guī)診斷技術(shù)。4. PCR 技術(shù)

14、在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用4.1 PCR 技術(shù)在腫瘤方面的應(yīng)用目前,腫瘤發(fā)病的分子機制尚不完全清楚。研究表明,人類許多常見的腫瘤疾病與某些病毒病因及腫瘤相關(guān)基因的遺傳學(xué)改變有著密切的關(guān)系。PCR 技術(shù)的腫瘤病毒病因、腫瘤相關(guān)基因、腫瘤相關(guān)抑癌基因等研究方面已取得可喜成果。據(jù)有關(guān)資料表明1 ,4 前列腺癌、結(jié)腸癌和Kaposi 肉瘤等與人巨細胞病毒(CMV 有關(guān);鼻咽癌和Burkitt 淋巴瘤與EB 病毒有關(guān);原發(fā)性肝癌與乙型肝炎病毒(HBV 有關(guān);泌尿道腫瘤和食道腫瘤等與人乳頭瘤病毒(HPV 有關(guān)。人類腫瘤病毒病因中較為重要的一類病毒是HPV ,其中大部分只與良性增生有關(guān),只有16 、18 、31 、

15、3 5 、39 等十余型與惡性腫瘤關(guān)系密切。PCR 在檢測HPV ,尤其是第16 、18 型有無感染,對子宮頸癌的早期診斷及預(yù)防有著顯著的意義。目前,已知腫瘤相關(guān)基因有上百多種,但較常見的是ras 家族的H-ras 、K-ras 和N-ra s 三種癌基因。它們的結(jié)構(gòu)相似,其表達產(chǎn)物是P21 蛋白。在不同腫瘤中ras 家族癌基因的H-ras 、K-ras 點突變多集中在第12 和61 號密碼子上,而N-ras 在第13 號密碼子上多發(fā)生突變。PCR 在癌基因的研究方面主要是ras 基因與腫瘤的關(guān)系。現(xiàn)已查明與ras 基因突變有關(guān)1 ,2 ,4 ,9 ,10 的腫瘤有幾十種。如:各種急性慢性白血

16、病、精原細胞癌、惡性黑色素瘤、神經(jīng)母細胞瘤、卵巢癌、胰腺病、肺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、子宮瘤等。Rb 基因11 是人類最早(1986 年發(fā)現(xiàn)的抑癌基因,其后又相繼發(fā)現(xiàn)了P53 、WT1 、NF1 、DCC 、MCC 、APC 、P16 和P21 等抑癌基因。在遺傳性視網(wǎng)膜母細胞瘤研究中發(fā)現(xiàn)位于13 號染色體上Rb 基因的缺失與癌變有關(guān)。在許多常見腫瘤,如骨肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳腺癌等惡性腫瘤中,常發(fā)現(xiàn)該基因失活11 。在對P53 基因的研究中12-14 發(fā)現(xiàn)該基因的突變和缺失是許多腫瘤發(fā)生的原因,這些腫瘤主要有子宮頸癌、肝癌、成骨肉瘤等。遺傳學(xué)改變主要是引起癌基因激活和抑癌基因的失活,使基因發(fā)生突

17、變、缺失、增加和易位等而導(dǎo)致了細胞癌變。PCR 不但能有效地檢測基因的突變、重排、易位等,而且能準確檢測癌基因表達量,可據(jù)此進行腫瘤早期診斷、鑒別、分型、分期、治療及預(yù)后評估等。近年,剛興起的熒光定量逆轉(zhuǎn)錄(RT -PCR 10 在腫瘤診斷、治療和微轉(zhuǎn)移以及微小殘留病灶檢測等方面具有廣泛的應(yīng)用價值。研究表明,癌細胞或癌前期細胞在進入血液循環(huán)以后,通過定量RT-PCR 檢測外周血腫瘤特異性標志物mRNA ,可進行實體腫瘤的篩查,檢測腫瘤術(shù)后及淋巴轉(zhuǎn)移陰性的病人外周血腫瘤細胞的數(shù)量,以便估計腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,制訂合理的治療方案。另外,定量RT-PCR 還可用于腫瘤耐藥基因(MDR1 10 表達水平

18、檢測,為臨床篩選化療藥物及治療方法提供依據(jù)。4.2 PCR 技術(shù)在遺傳病方面的應(yīng)用PCR 技術(shù)首次臨床應(yīng)用10 就是從檢測鐮狀細胞和 - 地中海貧血的基因突變開始的。十幾年來,該技術(shù)在遺傳病診斷的臨床應(yīng)用方面獲得了極大的成功。它能用于檢測已知基因序列的任何遺傳病基因的突變,如倒位、缺失/ 插入、動態(tài)突變、部分高發(fā)的點突變及表達量的異常等都可通過基因分析直接檢測用于臨床進行診斷,像地中海貧血、血友病、杜氏肌營養(yǎng)不良癥、脆X 綜合征、苯丙酮尿癥等這些遺傳性疾病。PCR 在遺傳病診斷及遺傳病預(yù)防與產(chǎn)前基因診斷方面具有明顯的應(yīng)用價值,PCR 產(chǎn)物直接測序已成為檢測遺傳病基因突變的常用方法。另外,PCR

19、 在鑒定編碼抗生素耐藥性基因10 ,尤其是在細菌不攜帶同源性序列且取單個菌落進行PCR 擴增時,具有較高的特異性和敏感性。4.3 PCR 技術(shù)在感染性疾病方面的應(yīng)用目前PCR 在醫(yī)學(xué)檢驗中對感染性疾病的診斷10 ,15 極具突出,只要核酸序列是清楚的,就可以檢測到任何有限的病原體。一般實驗室可檢出10-100 個基因拷貝,而目前,病原體抗原檢測方法一般需要10 5 10 7 個病原體才能檢測到。PCR 技術(shù)的運用解決了免疫學(xué)檢測的“窗口期”問題,可判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)。再者,抗體檢測不能判定是現(xiàn)癥感染還是既往感染時,也需要用PCR 方法來確定。另外,病原體感染后的發(fā)病時間和病情輕重

20、均與病原體數(shù)量有關(guān)。如艾滋病(AIDS 由人免疫缺陷病毒(H IV 感染后,可根據(jù)HIV 檢測的含量預(yù)知發(fā)病的時間。因為AIDS 潛伏期的長短和臨床癥狀的輕重與血液中的病毒量呈顯著相關(guān)。在其它病毒性疾病中也多半存在類似情況,這均需PCR 來定量說明。PCR 在HBV 定量研究中表明,HBV 載量與肝炎的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后以及與藥物療效有關(guān),并證明定量PCR 是鑒別HBV 感染各期的良好工具。該技術(shù)能有效地確定血清HBe Ag 轉(zhuǎn)陰和非活動性攜帶者病人的HBV DNA 水平,而常規(guī)雜交法則對這些低病毒血癥的HBV DNA 探測不到。在抗病毒治療中,通過定量PCR 檢測HBV 的載量,來觀察拉咪呋啶

21、及多種聯(lián)合用藥治療慢性乙型肝炎的療效具有指導(dǎo)意義。PCR 對某些傳染性疾病疫苗接種后感染的鑒別也是極為重要的。例如:腮腺炎病毒疫苗接種后感染的病例時有發(fā)生,是疫苗引起的還是野生型腮腺炎病毒引起的,這就需要一種行之有效的方法來進行鑒別,以往的血清學(xué)、病毒培養(yǎng)及探針雜交等方法都很難做到。過去,對結(jié)核病等其他分支桿菌病的診斷方法雖然很多,但均不夠理想。簡便易行的方法經(jīng)常查不到抗酸桿菌,也無法鑒別結(jié)核桿菌與其他分支桿菌。用分支桿菌培養(yǎng)的方法且陽性率較低又耗時,而麻風(fēng)桿菌在體外又不能培養(yǎng),主要靠感染組織的涂片或切片鏡檢。其他方法,如血清學(xué)、氣相色譜等方法的敏感性及特異性都不夠理想,PCR 技術(shù)的運用使上

22、述問題得到了解決。還有PCR 技術(shù)在技術(shù)性病監(jiān)控和性病病原體的檢測方面也正在擴大,并列為監(jiān)控手段和作為檢測的金標準。5. PCR 技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗應(yīng)用中的問題5.1 假陽性通常PCR 在醫(yī)學(xué)檢驗應(yīng)用中所面臨的問題之一是擴增產(chǎn)物污染帶來的假陽性,而實驗室污染又是假陽性的主要因素。只要實驗室被擴增產(chǎn)物污染,擴增片段隨時都可能污染新的樣本并又被同一PCR 反應(yīng)體系擴增出來而產(chǎn)生假陽性。解決的根本措施就是在封閉狀態(tài)下進行擴增和產(chǎn)物分析。近年發(fā)展了一種熒光定量PCR 技術(shù),從根本上解決了PCR 擴增產(chǎn)物污染和不能定量的問題。該技術(shù)把基因擴增PCR 、分子雜交和光化學(xué)融為一體,實現(xiàn)了對PCR 擴增產(chǎn)物進行全

23、過程的封閉,并進行實時動態(tài)檢測和自動分析結(jié)果,進一步提高了其特異性。由于造成假陽性的因素相對單一,因此假陽性并不是困惑檢驗工作的主要原因。5.2 假陰性PCR 假陰性的原因相對較為復(fù)雜,主要包括有儀器設(shè)備的質(zhì)量、試劑開殼劑和操作問題、PCR 產(chǎn)物的電泳檢測時間及有關(guān)PCR 反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)等。PCR 儀本身的質(zhì)量問題能使擴增效率下降或造成非特異性擴增而出現(xiàn)假陰性或假陽性。離心機的質(zhì)量問題或使用不正確,可造成離心標本模板不能分離而產(chǎn)生假陰性。試劑開殼劑和操作問題造成標本DNA 沒有暴露出來,致使擴增無法進行而導(dǎo)致假陰性。PCR 產(chǎn)物的電泳檢測時間一般為48h 以內(nèi),大于48h 后帶型不規(guī)則甚致消失

24、不出現(xiàn)擴增條帶而程現(xiàn)假陰性。PCR 反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有模板核酸的制備、引物的質(zhì)量與特異性、酶的質(zhì)量及PCR 循環(huán)條件等,在這些環(huán)節(jié)中操作不當都可引起假陰性。另外,Mg 2+ 濃度和物理因素變性等對PCR 擴增效率影響也很大。Mg 2+ 濃度過高可降低PCR 擴增的特異性,濃度過低則影響PCR 擴增產(chǎn)量。而變性溫度低,變性時間短,極有可能出現(xiàn)假陰性;退火溫度過低,可致非特異性擴增而降低異性擴增效率;退火溫度過高,影響引物與模板的結(jié)合而降低PCR 擴增效率,最終都可導(dǎo)致PCR 擴增失敗。還有靶序列變異使引物與模板失去互補序列,其PCR 擴增也不會成功。6. PCR 技術(shù)的應(yīng)用前景自從PCR 技術(shù)誕生

25、以來,隨著其深入不斷的發(fā)展與完善,許多與其相關(guān)的新類型及改良的新方法在不斷的涌現(xiàn),這些派生出的新類型和新方法解決了以往傳統(tǒng)PCR 的瓶頸問題。雖然,PCR 可對基因分析直接檢測用于臨床進行診斷,但大部分基因突變還是難以直接檢測。近年來,分子診斷技術(shù)最大突破就是集擴增、檢測和靶定量于一體的實時熒光PCR 技術(shù)的問世。該技術(shù)的出現(xiàn),對基因檢測和基因分型的應(yīng)用范圍將進一步擴大,為PCR 的臨床應(yīng)用帶來曙光。因此,PCR 技術(shù)將有極大的發(fā)展空間和廣泛的應(yīng)用前景,它將對腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)和基因治療等進一步研究及臨床應(yīng)用起著積極重要的作用。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗中,PCR 的應(yīng)用將更加廣泛

26、和深入。相信在不久的將來,隨著PCR 技術(shù)的更進一步完善,它將作為常規(guī)檢驗方法進行全面普及,發(fā)揮更大的作用,為全人類健康做出更大的貢獻。參考文獻1. 楊道理, 王寶成主編 . DNA 擴增技術(shù)與醫(yī)學(xué)應(yīng)用 . 濟南:山東科學(xué)技術(shù)出版社 . 199 2,51-54,283,396.2. 郭永軍 . 聚合酶鏈式反應(yīng)在腫瘤研究中的應(yīng)用 . 國外醫(yī)學(xué)腫瘤分冊 . 1991,18(1:1-3.3. 陳志杰主編 . 醫(yī)學(xué)檢驗新技術(shù) . 濟南: 山東科學(xué)技術(shù)出版社 . 1993 :544.4. 陳意生, 史景泉主編 . 腫瘤分子細胞生物學(xué) . 北京:人民軍醫(yī)出版社 . 2002 :190-192,270,287-288.5. 楊占秋, 劉建軍, 肖紅, 等主編 . 診斷與實驗病毒學(xué) . 鄭州: 鄭州大學(xué)出版社 . 20 02:167-169.6. T. D. 蓋萊哈特, F. S. 柯林斯, D. 金斯伯格主編 . 孫開來主譯 . 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)原理 .北京: 科學(xué)出版