1、名詞解釋1 DNS試劑:3,5-二硝基水楊酸試劑,與還原糖共熱后被還原成棕黑色的化合物2 Km:米氏常數(shù)，是酶的一個(gè)特征常數(shù)大小反映了酶與底物親和力的強(qiáng)弱。 Vmax：是酶被底物飽和時(shí)的反應(yīng)速度，Km值的物理意義為反應(yīng)達(dá)到1/2Vmax的底物濃度再增加底物對(duì)反應(yīng)速度沒有什么影響。反應(yīng)速度逐漸趨近的恒定值稱為最大反應(yīng)速度Vmax。3 還原糖：是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的蛋湯和某些二糖（如乳糖和麥芽糖）。4 gel filtration:凝膠層析法，是利用凝膠吧分子大小不同的物質(zhì)分離開的一種方法，又叫做分子篩層析法，排阻層析法。5 Acr：丙烯酰胺，可與少量的交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺

2、（Bis），在催化劑的作用下聚合交聯(lián)而成三維網(wǎng)狀的聚丙烯酰胺凝膠。6 酶的比活力：在特定條件下，單位重量（mg）蛋白質(zhì)或RNA所具有的酶活力單位數(shù)。7 酶的活力單位: 是指在特定條件下(25、最適的pH值和底物濃度),每分鐘可催化1微摩爾底物轉(zhuǎn)化所需要的酶量。8 電泳：帶電粒子在直流電場(chǎng)中向著 所帶電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。9 層析（色譜）：用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇性分配,以流動(dòng)相對(duì)固定相中的混合物進(jìn)行洗脫，使混合物各組分以不同速度移動(dòng)，從而達(dá)到分離的一種物理方法。10 分子篩效應(yīng)：凝膠本身具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),大的分子在通過這種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上的孔隙時(shí)阻力較大,小分子通過時(shí)阻力較小。分子量大小不同的

3、多種成份在通過凝膠床時(shí),按照分子量大小“排隊(duì),凝膠表現(xiàn)分子篩效應(yīng)。11 電泳的原理：電泳是指帶電顆粒在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過程。許多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等都具有可電離基團(tuán)，它們?cè)谀硞€(gè)特定的pH值下可以帶正電或負(fù)電，在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng)。電泳技術(shù)就是利用在電場(chǎng)的作用下，由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的技術(shù)。12 凝膠過濾層析的原理：一種利用帶孔凝膠珠作基質(zhì)，按照分子大小分離蛋白質(zhì)或其它分子混合物的層析技術(shù)。凝膠過濾層析

4、具有分子篩效應(yīng)13 按層析過程的機(jī)理，層析法分哪幾類？按操作形式不同又分哪三類？：根據(jù)分離的原理不同分類，層析主要可以分為吸附層析、分配層析、凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析等。按操作形式不同又分層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。14 可見分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)？：（1） 使用過程中比色皿的四個(gè)面在槽中保持一定的位置,取用比色皿時(shí)手應(yīng)該捏住四個(gè)棱而不能碰到面。比色皿應(yīng)該避免磨損透光面。（2） 使用過程中不得打開蓋子，保持儀器清潔,為避免溶液灑落對(duì)儀器造成的腐蝕，所有溶液的配置、傾倒都不要在儀器附近操作。比色皿放進(jìn)樣品池之前必須把外表面擦干。（3）當(dāng)（僅當(dāng)）操作者錯(cuò)誤操作或其他干擾引起

5、微機(jī)錯(cuò)誤時(shí)，應(yīng)該立即關(guān)斷主機(jī)電源，重新啟動(dòng)，但無須關(guān)斷燈源電源。（4）光學(xué)器件和儀器運(yùn)行環(huán)境需保護(hù)清潔。清潔儀器外表時(shí) ,請(qǐng)勿使用乙醇乙醚等有機(jī)溶劑,請(qǐng)勿在工作中清潔,不使用時(shí)請(qǐng)加防塵罩。15 蛋白質(zhì)含量測(cè)定的常用方法有那些？：（1）微量凱式定氮法。（2）雙縮脲法。（3）folin酚試劑法。（4）紫外分光光度法。（5）考馬斯亮藍(lán)染色法。16 雙倒數(shù)法測(cè)定米氏常數(shù)的基本原理：Lineweaver和Burk將米氏方程改寫成倒數(shù)形式：17 聚丙烯酰胺凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)？：聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和N，N'甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子。電滲作用比較小，不易和樣品相互作用。 由于聚丙烯酰胺凝膠是

6、一種人工合成的物質(zhì)，在聚合前可調(diào)節(jié)單體的濃度比，形成 不同程度交鏈結(jié)構(gòu)，其空隙度可在一個(gè)較廣的范圍內(nèi)變化，可以根據(jù)要分離物質(zhì)分子 的大小，選擇合適的凝膠成分，使之既有適宜的空隙度，又有比較好的機(jī)械性質(zhì)。在一定濃度范圍聚丙烯酰胺對(duì)熱穩(wěn)定。凝膠無色透明，易觀察，可用檢測(cè)儀直接測(cè)定。 丙烯酰胺是比較純的化合物，可以精制，減少污染。18 如何證明提取到的某種核酸是DNA還是RNA？（6分）：（1）用定糖法檢測(cè)。（2）用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)。（3）用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。等19 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白時(shí)，使用的電泳緩沖液PH8.3，那么樣品應(yīng)點(diǎn)在哪端？為什么？（6分）：樣品應(yīng)點(diǎn)在負(fù)極端，因?yàn)殡娪揪彌_

7、液PH8.3，在這樣的環(huán)境中，血清蛋白的幾種蛋白質(zhì)電離后都帶上負(fù)電荷，所以只有點(diǎn)樣在負(fù)極端，外加電壓后，才能向正極移動(dòng)，彼此才能分開。20 凝膠電泳的一般操作步驟（11分）：制膠，加入電泳緩沖液，加樣，電泳，剝膠，染色，脫色。21 要配制500ml 0.01mol/L的NaOH溶液應(yīng)如何配制？（10分）：準(zhǔn)確稱量0.2gNaOH用少量蒸餾水溶解，然后轉(zhuǎn)入500ml的容量瓶中，再用蒸餾水少量多次（至少3次）洗滌燒 杯，都轉(zhuǎn)入容量瓶中，最后定容至刻度線，蓋好容量瓶后混勻即可。22 PI: 指氨基酸的正離子濃度和負(fù)離子濃度相等時(shí)的pH值，用符號(hào)pI表示。23 層析：按照在移動(dòng)相和固定相（可以是氣體或

8、液體）之間的分配比例將混合成分分開的技術(shù)。24 同工酶：能催發(fā)相同的反應(yīng)類型但其理化性質(zhì)及免疫學(xué)性質(zhì)不同的酶。25 DNA變性：DNA雙鏈解鏈，分離成兩條單鏈的現(xiàn)象。26 Sanger試劑是2，4-二硝基氟苯27 肽鍵在下列哪個(gè)波長具有最大光吸收？215nm28 酶的活化和去活化循環(huán)中，酶的磷酸化和去磷酸化位點(diǎn)通常在酶的哪一種氨基酸殘基上？絲氨酸29 通?？捎米贤夥止夤舛确y(cè)定蛋白質(zhì)的含量，這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子中的Trp、Tyr、phe三種氨基酸的共軛雙鍵有紫外吸收能力30 移液槍在每次實(shí)驗(yàn)后應(yīng)將刻度調(diào)至最大，讓彈簧回復(fù)原型以延長移液槍的使用壽命，并嚴(yán)禁吸取強(qiáng)揮發(fā)性、強(qiáng)腐蝕性的液體。31 測(cè)定蛋

9、白質(zhì)濃度的方法主要有雙縮脲法、Folin-酚試劑法、凱氏定氮法32 在分光光度計(jì)的使用或檢定中，透射比或吸光度的準(zhǔn)確度是衡量儀器工作性能的一項(xiàng)重要指標(biāo)，它的準(zhǔn)確程度直接關(guān)系到所測(cè)數(shù)據(jù)的可信性及科學(xué)性。透射比或吸光度的誤 差越大，測(cè)試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。33 紫外分光光度法測(cè)定核酸含量的原理。核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵系統(tǒng)，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波長處。一般在260nm波長下，每1ml含1µg RNA溶液的光吸收值為0.0220.024，每1m1含1µg DNA溶液的光吸收值約為0.020，故測(cè)定未知濃度RNA

10、或DNA溶液在260nm的光吸收值即可計(jì)算出其中核酸的含量。此法操作簡便，迅速。若樣品內(nèi)混雜有大量的核苷酸或蛋白質(zhì)等能吸收紫外光的物質(zhì)，則測(cè)光誤差較大，故應(yīng)設(shè)法事先除去。34 牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。牛奶含有半乳糖、蛋白質(zhì)、脂肪成分。蛋白質(zhì)中的酪蛋白通過等電點(diǎn)沉淀，再通過離心而獲得，糖類小分子由于處于清夜中而分離，沉淀物中所含有的脂肪通過有機(jī)溶劑抽提而去除，最終得到純白色、晶狀酪蛋白。方法：取新鮮牛乳，用酸堿調(diào)PH到酪蛋白的等電點(diǎn)沉淀析出酪蛋白，然后洗滌，醇醚吸水至干燥得粉末稱重，計(jì)算提取率。步驟：保溫調(diào)PH沉淀離心洗滌干燥稱量35 考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理是什么？考馬斯亮藍(lán)G-250（Coomassie brilliant blue G-250）染料，在游離狀態(tài)下溶液呈棕紅色，當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色。蛋白質(zhì)含量在01000g范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm下的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用比色法進(jìn)行