1、實(shí)驗六 轉(zhuǎn)化及重組子的篩選 實(shí)驗?zāi)康?. 實(shí)驗原理3. 實(shí)驗儀器、材料與試劑4. 實(shí)驗步驟 5. 實(shí)驗結(jié)果與討論實(shí)驗?zāi)康膙了解細(xì)胞轉(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學(xué)研究中的意義；v學(xué)習(xí)外源DNA轉(zhuǎn)化入受體菌細(xì)胞并篩選轉(zhuǎn)化子的方法。 實(shí)驗原理v轉(zhuǎn)化（transformation）是將異源DNA分子導(dǎo)入另一細(xì)胞品系，使受體細(xì)胞獲得新的遺傳性狀的一種手段。其原理是細(xì)菌處于0， CaCl2低滲溶液中，菌細(xì)胞膨脹成球形。v轉(zhuǎn)化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復(fù)合物黏附于細(xì)胞表面，經(jīng)42短時間熱擊處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收DNA復(fù)合物。進(jìn)入細(xì)胞的DNA分子通過復(fù)制、表達(dá)，實(shí)現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移，使受體細(xì)胞出現(xiàn)新的

2、遺傳性狀。v將經(jīng)轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞在選擇性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，即可篩選出轉(zhuǎn)化體(transformant)，即帶有異源DNA分子的受體細(xì)胞。 DNA重組重組v外源基因插入與否可通過載體上的Lac Z基因進(jìn)行初步的篩選。有外源基因插入的細(xì)菌呈白斑，無外源基因插入的細(xì)菌呈藍(lán)斑。AlfaAlfa互補(bǔ)互補(bǔ)實(shí)驗儀器、材料與試劑（一）儀器 v1. 恒溫?fù)u床 v2. 超凈工作臺 v3. 恒溫水浴鍋 v4. 恒溫箱 v5. 微量取液器 （二）材料 v1. 實(shí)驗四所得連接產(chǎn)物 v2. 實(shí)驗五制備的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞 （三）試劑v1. LB固體培養(yǎng)基 v2. 氨芐青霉素（Amp） 100mg/ml 實(shí)驗步驟 轉(zhuǎn)化: v1取適量連接產(chǎn)物加到分裝的200 L感受態(tài)細(xì)胞中，冰上混勻，冰浴30min；此過程中，需倒含氨芐的LB平板。 v242熱激90s，迅速在冰浴中冷3-5min； v3上述管中加入600L LB培養(yǎng)基，于37振蕩培養(yǎng)45min；此過程中，在LB平板上涂布X-Gal 40 L和IPTG 20 L 。v4取適量菌液涂布LB平板(含Amp 50g/ml)，室溫涂布均勻后（至菌液完全被吸干），于37倒置，過夜培養(yǎng)； v5觀察菌落，篩選陽性克隆。實(shí)驗結(jié)果與討論v經(jīng)抗生素初