1、農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法 農(nóng)桿菌是普遍存在于土壤中的一種革蘭氏農(nóng)桿菌是普遍存在于土壤中的一種革蘭氏陰性陰性細(xì)菌，細(xì)菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數(shù)雙子葉植物的受傷它能在自然條件下趨化性地感染大多數(shù)雙子葉植物的受傷部位，并誘導(dǎo)產(chǎn)生部位，并誘導(dǎo)產(chǎn)生冠癭瘤或發(fā)狀根冠癭瘤或發(fā)狀根。農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌感染柳樹感染柳樹產(chǎn)生產(chǎn)生冠癭瘤冠癭瘤原理：原理： 根癌農(nóng)桿菌和發(fā)根農(nóng)桿菌細(xì)胞中分別含有根癌農(nóng)桿菌和發(fā)根農(nóng)桿菌細(xì)胞中分別含有TiTi質(zhì)粒和質(zhì)粒和RiRi質(zhì)粒質(zhì)粒，其上有一段，其上有一段T-DNAT-DNA，農(nóng)桿菌通過侵染植物傷口，農(nóng)桿菌通過侵染植物傷口進(jìn)入細(xì)胞后，可將進(jìn)入細(xì)胞后，可將T-DNAT-DN

2、A插入到植物基因組中。插入到植物基因組中。 因此，農(nóng)桿菌是一種因此，農(nóng)桿菌是一種天然天然的植物遺傳轉(zhuǎn)化體系。人的植物遺傳轉(zhuǎn)化體系。人們將們將目的基因目的基因插入到經(jīng)過改造的插入到經(jīng)過改造的T-DNAT-DNA區(qū)，借助農(nóng)桿菌的區(qū)，借助農(nóng)桿菌的感染實(shí)現(xiàn)感染實(shí)現(xiàn)外源基因外源基因向植物細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與整合，然后通過向植物細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與整合，然后通過細(xì)胞和組織培養(yǎng)技術(shù)，再生出轉(zhuǎn)基因植株。細(xì)胞和組織培養(yǎng)技術(shù)，再生出轉(zhuǎn)基因植株。 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法起初只被用于雙子葉植物中，近年來，農(nóng)桿菌介導(dǎo)法起初只被用于雙子葉植物中，近年來，農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化在一些單子葉植物（尤其是水稻）中也農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化在一些單子葉植物（尤其是水稻）中

3、也得到了廣泛應(yīng)用。得到了廣泛應(yīng)用。StoryStory冠癭瘤病冠癭瘤?。弘p子葉植物經(jīng)常發(fā)生，因腫瘤著生地面在近地面的根莖交界處，形似帽狀而得名。1907年， Smith & Townsent 農(nóng)桿菌誘發(fā)冠癭瘤病。1947年， Braun et al. 證實(shí)倆者的關(guān)系，但發(fā)現(xiàn)有的菌株不 致病。提出了假說：tumour-inducing principle,TIP.腫瘤 誘導(dǎo)因子 。60s , 腫瘤組織中含高濃度的氨基酸（octopine , nopaline） 總稱冠癭堿（opine) 。 Petit et al.證實(shí)腫瘤組織 合成的冠癭堿冠癭堿取決于菌株，而且菌株能專一地利用 冠癭堿作

4、為菌株生存的唯一的碳源和氮源碳源和氮源。(證實(shí)了TIP)1974年，Zaenen et al, Schell, Van Larebeke et al. 從致瘤農(nóng)桿菌中分離出一類巨大的質(zhì)粒 (t tumor i inducing plasmid)，稱為Ti質(zhì)粒。 Ti=TIPTi=TIP1977年，Chilton et al.分子雜交技術(shù)證實(shí)腫瘤細(xì)胞中存 在外源的DNA ,與Ti質(zhì)粒的DNA有同源性，是整 合到了植物染色體的農(nóng)桿菌質(zhì)粒DNA片段， T- DNAT- DNA (transferred DNA),其內(nèi)有致瘤和冠癭 堿合成酶等基因。1981年，Ooms et al.發(fā)現(xiàn)Ti質(zhì)粒上有致瘤

5、區(qū)(virulence region)，Vir區(qū)。TiTi質(zhì)粒是根癌質(zhì)粒是根癌農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌細(xì)胞核外細(xì)胞核外存在的一種存在的一種環(huán)狀雙鏈環(huán)狀雙鏈DNADNA分子，長(zhǎng)分子，長(zhǎng)度約度約200kb200kb，平均周長(zhǎng)，平均周長(zhǎng)54.154.175 .4 um75 .4 um，分，分子質(zhì)量為（子質(zhì)量為（9090150150）10106 6 DaDa。在溫度。在溫度低低與與3030的條件下，的條件下，TiTi質(zhì)?？煞€(wěn)定地存在于質(zhì)粒可穩(wěn)定地存在于根癌農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)。根癌農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)。Ti質(zhì)粒除上述上述誘導(dǎo)受侵染的植物組織產(chǎn)生冠癭瘤外，還具有以下幾種重要功能：1、賦予根癌農(nóng)桿菌附著于植物細(xì)胞的能力；2、賦予根癌

6、農(nóng)桿菌分解代謝冠癭堿的能力；3、根癌農(nóng)桿菌的寄主植物范圍；4、決定所誘導(dǎo)的冠癭形態(tài)和冠癭堿的成分；5、參與寄主細(xì)胞合成植物激素吲哚乙酸和一些細(xì)胞分裂素的代謝活。 1) Ti1) Ti質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)來自于不同野生型根癌農(nóng)桿菌的來自于不同野生型根癌農(nóng)桿菌的TiTi質(zhì)?？筛鶕?jù)其產(chǎn)生質(zhì)?？筛鶕?jù)其產(chǎn)生的的冠癭堿冠癭堿類型分為三類：章魚堿類型分為三類：章魚堿(octopine)(octopine)類類 胭脂堿胭脂堿(nopaline)(nopaline)類類 農(nóng)桿堿（農(nóng)桿堿（agropineagropine） 類。類。TiTi質(zhì)粒攜帶著質(zhì)粒攜帶著既能分解又能合成既能分解又能合成這些化合物的酶類和相應(yīng)

7、這些化合物的酶類和相應(yīng)基因，然而冠癭堿合成基因卻不能在根癌農(nóng)桿菌中表達(dá)，基因，然而冠癭堿合成基因卻不能在根癌農(nóng)桿菌中表達(dá)，它們只有它們只有進(jìn)入植物細(xì)胞后進(jìn)入植物細(xì)胞后才能表達(dá)，才能表達(dá)，TiTi質(zhì)粒上的冠癭堿分質(zhì)粒上的冠癭堿分解基因產(chǎn)物卻能分解冠癭堿，為宿主細(xì)胞提供能源、氮源解基因產(chǎn)物卻能分解冠癭堿，為宿主細(xì)胞提供能源、氮源和碳源。和碳源。長(zhǎng)度：長(zhǎng)度：160-250 kb160-250 kb6 6大功能區(qū)：大功能區(qū)：1)1)致瘤區(qū)，這個(gè)區(qū)主要合成植物致瘤區(qū)，這個(gè)區(qū)主要合成植物 生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素；生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素；2)2)冠癭堿合成區(qū)；冠癭堿合成區(qū)；3)3)冠癭堿分解區(qū)；冠癭堿分解區(qū)；4)T

8、i4)Ti質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移區(qū)質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移區(qū)(tra)(tra)；5)5)毒性區(qū)（毒性區(qū)（VirVir）；）；6)DNA6)DNA復(fù)制區(qū)（復(fù)制區(qū)（RepRep）。）。在致瘤區(qū)、冠癭堿合成區(qū)的兩側(cè)存在著一個(gè)24 bp直接重復(fù)序列，由這三部分所構(gòu)成的DNA區(qū)域叫做T-DNA。致致瘤區(qū)瘤區(qū)+ +冠癭堿冠癭堿+ +左右邊界左右邊界=T-DNA=T-DNAv插入植物染色體中的Ti質(zhì)粒片段只有只有T-DNAT-DNA。vT-DNA T-DNA 區(qū)域中的這些基因只有區(qū)域中的這些基因只有在在T-DNAT-DNA插入到插入到植物基因組植物基因組后才后才能激活表達(dá)能激活表達(dá). .T-DNAT-DNAT-DNA T-DN

9、A ：Tms1Tms1、Tms2Tms2、TmrTmr這這3 3個(gè)基因表個(gè)基因表達(dá)植物達(dá)植物生長(zhǎng)素生長(zhǎng)素和和細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素, ,可調(diào)節(jié)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)育可調(diào)節(jié)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)育, ,它們的過量表達(dá)刺激植物細(xì)胞它們的過量表達(dá)刺激植物細(xì)胞大量快速增長(zhǎng)而形成冠癭。大量快速增長(zhǎng)而形成冠癭。冠癭堿合成基因在冠癭堿合成基因在宿主植物體宿主植物體內(nèi)內(nèi)合并分泌出來合并分泌出來, ,被被TiTi質(zhì)粒上質(zhì)粒上的的冠癭堿代謝基因分解成碳源和冠癭堿代謝基因分解成碳源和氮源，氮源，供根癌農(nóng)桿菌供根癌農(nóng)桿菌生長(zhǎng)所須。生長(zhǎng)所須。脂堿型根癌農(nóng)桿菌脂堿型根癌農(nóng)桿菌TiTi質(zhì)粒中質(zhì)粒中T-DNAT-DNA的左右兩側(cè)是一

10、段的左右兩側(cè)是一段24bp24bp的重復(fù)序列的重復(fù)序列, ,構(gòu)成構(gòu)成T-DNAT-DNA的左的左邊界和右邊界。邊界和右邊界。在某些章魚堿型根癌農(nóng)根癌在某些章魚堿型根癌農(nóng)根癌農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌TiTi質(zhì)粒中質(zhì)粒中T-DNAT-DNA是以兩是以兩個(gè)分開的獨(dú)立片段形式存在，個(gè)分開的獨(dú)立片段形式存在，即即T-DNAT-DNA左邊區(qū)段和左邊區(qū)段和T-DNAT-DNA右右邊區(qū)段。邊區(qū)段。插入在插入在T-DNAT-DNA邊界序列之間的邊界序列之間的任何任何DNADNA都可被轉(zhuǎn)到植物染色都可被轉(zhuǎn)到植物染色體中。因此體中。因此TiTi質(zhì)?？捎米鐾赓|(zhì)粒可用做外源目的基因的載體。源目的基因的載體。 Vir Vir區(qū)（區(qū)（

11、Vir-regionVir-region）：即毒性區(qū)。其長(zhǎng)度約為）：即毒性區(qū)。其長(zhǎng)度約為35kb35kb。控制根癌農(nóng)桿菌附著于植物細(xì)胞和控制根癌農(nóng)桿菌附著于植物細(xì)胞和TiTi質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞有質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞有關(guān)部位，與感染后冠癭形成有關(guān)。關(guān)部位，與感染后冠癭形成有關(guān)。VirVir區(qū)位于區(qū)位于T-DNAT-DNA區(qū)左側(cè)，包含義個(gè)毒性遺傳點(diǎn)（區(qū)左側(cè)，包含義個(gè)毒性遺傳點(diǎn)（virvirA A、virvir、virCvirC、 virvir、virvir和和virvirG G）。）。virvir基因控制著的轉(zhuǎn)移?；蚩刂浦霓D(zhuǎn)移。virvirvirC virG virvirA植物細(xì)胞受傷后，細(xì)胞壁破植物細(xì)胞受

12、傷后，細(xì)胞壁破裂，分泌物中含有高濃度的裂，分泌物中含有高濃度的創(chuàng)傷誘導(dǎo)分子。它們是一些創(chuàng)傷誘導(dǎo)分子。它們是一些酚類化合物酚類化合物，如乙酰丁酮，如乙酰丁酮（acetosyringoneacetosyringone，ASAS）和）和-羥基酰丁香酮（羥基酰丁香酮（-hydroxacetosyringonehydroxacetosyringone，OH-OH-ASAS）。）。根癌農(nóng)桿菌對(duì)這一類物質(zhì)具根癌農(nóng)桿菌對(duì)這一類物質(zhì)具有有趨化性趨化性，在植物細(xì)胞表面，在植物細(xì)胞表面附著后，受這些創(chuàng)傷誘導(dǎo)分附著后，受這些創(chuàng)傷誘導(dǎo)分子的刺激，子的刺激，TiTi質(zhì)粒質(zhì)粒virvir區(qū)毒性區(qū)毒性基因被激活和表達(dá)?；虮?/p>

13、激活和表達(dá)。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)9 9種信號(hào)因子，均為水溶性酚類化合物。種信號(hào)因子，均為水溶性酚類化合物。其中乙酰丁香酮（其中乙酰丁香酮（acetosyringoneacetosyringone，ASAS）和羥基乙酰丁）和羥基乙酰丁香酮（香酮（OH-ASOH-AS）的作用較強(qiáng)，兒茶酚、原兒茶酚、沒食）的作用較強(qiáng)，兒茶酚、原兒茶酚、沒食子酸、焦性沒食子酸、二羥基苯甲酸、香草酚和對(duì)羥基子酸、焦性沒食子酸、二羥基苯甲酸、香草酚和對(duì)羥基苯酚處理農(nóng)桿菌時(shí)也對(duì)苯酚處理農(nóng)桿菌時(shí)也對(duì)VirVir區(qū)的基因表達(dá)起促進(jìn)作用。區(qū)的基因表達(dá)起促進(jìn)作用。雙子葉植物在在農(nóng)桿菌侵染時(shí)可以形成大量的信號(hào)因子，雙子葉植物在在

14、農(nóng)桿菌侵染時(shí)可以形成大量的信號(hào)因子，而使而使T- DNAT- DNA可以成功的轉(zhuǎn)入；可以成功的轉(zhuǎn)入；而單子葉植物需要加入而單子葉植物需要加入外源酚類物質(zhì)外源酚類物質(zhì)，才能激活，才能激活VirVir區(qū)區(qū)的基因，達(dá)到轉(zhuǎn)基因的目的。的基因，達(dá)到轉(zhuǎn)基因的目的。最先激活表達(dá)的是最先激活表達(dá)的是virvirA A基因基因，它編碼感受蛋白，位于細(xì)菌它編碼感受蛋白，位于細(xì)菌細(xì)胞膜的疏水區(qū)，可接受環(huán)細(xì)胞膜的疏水區(qū)，可接受環(huán)境中的信號(hào)分子。境中的信號(hào)分子。在在virAvirA蛋白的激活下，蛋白的激活下，virvirG G基因基因表達(dá)，表達(dá)，virGvirG蛋白經(jīng)磷酸蛋白經(jīng)磷酸化由非活性態(tài)變?yōu)榛罨癄顟B(tài)，化由非活性態(tài)

15、變?yōu)榛罨癄顟B(tài)，進(jìn)而激活進(jìn)而激活virvir區(qū)其他基因表區(qū)其他基因表達(dá)達(dá)。virvirA A基因基因virGvirG基因基因virvirD D基因基因產(chǎn)物：產(chǎn)物：virD1virD1蛋白蛋白是一種是一種DNADNA松弛松弛酶，它可使酶，它可使DNADNA從超螺旋型從超螺旋型轉(zhuǎn)變?yōu)樗沙谛蜖顟B(tài)；轉(zhuǎn)變?yōu)樗沙谛蜖顟B(tài)；virvirD2D2蛋白蛋白則能切割已呈松則能切割已呈松弛態(tài)的弛態(tài)的T-DNAT-DNA，2 2個(gè)邊界產(chǎn)個(gè)邊界產(chǎn)生缺口，使單鏈生缺口，使單鏈T-DNAT-DNA得以得以釋放。釋放。VirEVirE基因基因所表達(dá)的所表達(dá)的virE2virE2蛋蛋白白是單鏈?zhǔn)菃捂淭-DNAT-DNA結(jié)合蛋白。結(jié)

16、合蛋白。可使可使T-DNAT-DNA形成形成1 1個(gè)細(xì)長(zhǎng)的個(gè)細(xì)長(zhǎng)的核酸蛋白復(fù)合物（核酸蛋白復(fù)合物（T-T-復(fù)合復(fù)合體），以此保護(hù)體），以此保護(hù)T-DNAT-DNA不被不被包內(nèi)外的核酸酶降解。包內(nèi)外的核酸酶降解。小結(jié)小結(jié):植物細(xì)胞受傷后，細(xì)胞壁破裂，分泌物中含有高濃度的創(chuàng)傷植物細(xì)胞受傷后，細(xì)胞壁破裂，分泌物中含有高濃度的創(chuàng)傷誘導(dǎo)分子。它們是一些酚類化合物，如乙酰丁酮誘導(dǎo)分子。它們是一些酚類化合物，如乙酰丁酮（acetosyringone，AS）和）和-羥基酰丁香酮（羥基酰丁香酮（-hydroxacetosyringone，OH-AS）。）。根癌農(nóng)桿菌對(duì)這一類物質(zhì)具有趨化性，在植物細(xì)胞表面附著根癌

17、農(nóng)桿菌對(duì)這一類物質(zhì)具有趨化性，在植物細(xì)胞表面附著后，受這些創(chuàng)傷誘導(dǎo)分子的刺激，后，受這些創(chuàng)傷誘導(dǎo)分子的刺激，Ti質(zhì)粒質(zhì)粒vir區(qū)毒性基因被激區(qū)毒性基因被激活和表達(dá)?；詈捅磉_(dá)。最先激活表達(dá)的是最先激活表達(dá)的是virA基因基因，它編碼感受蛋白，位于細(xì)菌細(xì)胞膜的疏水區(qū)，可，它編碼感受蛋白，位于細(xì)菌細(xì)胞膜的疏水區(qū)，可接受環(huán)境中的信號(hào)分子。接受環(huán)境中的信號(hào)分子。在在virA蛋白的激活下，蛋白的激活下，virG基因表達(dá)，基因表達(dá)，virG蛋白經(jīng)磷酸化由非活性態(tài)變?yōu)榛罨鞍捉?jīng)磷酸化由非活性態(tài)變?yōu)榛罨癄顟B(tài)，進(jìn)而激活狀態(tài)，進(jìn)而激活vir區(qū)其他基因表達(dá)。區(qū)其他基因表達(dá)。其中其中virD基因基因產(chǎn)物產(chǎn)物virD1蛋

18、白是一種蛋白是一種DNA松弛酶，它可使松弛酶，它可使DNA從超螺旋型轉(zhuǎn)變?yōu)閺某菪娃D(zhuǎn)變?yōu)樗沙谛蜖顟B(tài)；而松弛型狀態(tài)；而virD2蛋白則能切割已呈松弛態(tài)的蛋白則能切割已呈松弛態(tài)的T-DNA，2個(gè)邊界產(chǎn)生缺口，個(gè)邊界產(chǎn)生缺口，使單鏈?zhǔn)箚捂淭-DNA得以釋放。得以釋放。VirE基因基因所表達(dá)的所表達(dá)的virE2蛋白是單鏈蛋白是單鏈T-DNA結(jié)合蛋白?？墒菇Y(jié)合蛋白?？墒筎-DNA形成形成1個(gè)細(xì)長(zhǎng)個(gè)細(xì)長(zhǎng)的核酸蛋白復(fù)合物（的核酸蛋白復(fù)合物（T-復(fù)合體），以此保護(hù)復(fù)合體），以此保護(hù)T-DNA不被包內(nèi)外的核酸酶降解。不被包內(nèi)外的核酸酶降解。T-復(fù)合體依次穿過根癌農(nóng)桿菌和植物細(xì)胞膜及細(xì)胞壁。并進(jìn)入植物細(xì)胞核，最

19、復(fù)合體依次穿過根癌農(nóng)桿菌和植物細(xì)胞膜及細(xì)胞壁。并進(jìn)入植物細(xì)胞核，最終整合進(jìn)入植物核基因組。終整合進(jìn)入植物核基因組。T-DNA的轉(zhuǎn)移機(jī)理比較復(fù)雜，依賴于的轉(zhuǎn)移機(jī)理比較復(fù)雜，依賴于T-DNA區(qū)和區(qū)和vir區(qū)共同參與，涉及多個(gè)基因區(qū)共同參與，涉及多個(gè)基因表達(dá)及一系列蛋白質(zhì)和核酸的相互作用。表達(dá)及一系列蛋白質(zhì)和核酸的相互作用。Table1 Summary of vir Gene Products Locus Size(kb) ORFsa Proteins Size(kDa) Locationb FunctionvirA2.0190Mplant signal sensor, protein kinase

20、VirG1.0130Ctranscriptional activatorVirD4.5416,47,21,75C/M?T-DNA border endonuclease (VirD1 and VirD2); pilot protein?nuclear localization?(VirD2)VirC2.0226,23C?processing of T-DNA(VirC1)VirE2.027, 60.5C/M?single-strand DNA-binding protein (VirE2) virB9.51126,12,11,87,23,32,5.5,25,32,48,38MT-DNA tra

21、nsfer apparatus?T-DNA加工和轉(zhuǎn)移加工和轉(zhuǎn)移 Vir基因表達(dá)調(diào)控的問題，知道基因表達(dá)調(diào)控的問題，知道VirA和和VirG基因誘導(dǎo)其它基因誘導(dǎo)其它Vir基基因的表達(dá)，當(dāng)因的表達(dá)，當(dāng)VirD操縱元的被誘導(dǎo)表達(dá)后，其中的操縱元的被誘導(dǎo)表達(dá)后，其中的VirD1和和VirD2蛋白質(zhì)具有核酸內(nèi)切酶的活性蛋白質(zhì)具有核酸內(nèi)切酶的活性(Yanofsky MF. 1986)，能夠在能夠在T-DN A邊界重復(fù)序列的特異位點(diǎn)切開邊界重復(fù)序列的特異位點(diǎn)切開T-DNA單鏈，因此單鏈，因此T-DNA往往以單鏈形式進(jìn)入植物細(xì)胞。但是在植物細(xì)胞中也發(fā)往往以單鏈形式進(jìn)入植物細(xì)胞。但是在植物細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)雙鏈現(xiàn)雙鏈

22、T-DNA分子。分子。切刻位點(diǎn)切刻位點(diǎn)(nick site)可作為可作為DNA從從5向向3合成的起始位合成的起始位點(diǎn)，新的點(diǎn)，新的DNA鏈合成后，鏈合成后，T-DNA單鏈即被替換單鏈即被替換(displacement)釋放出來釋放出來(圖圖2)。當(dāng)然這種缺刻也可通。當(dāng)然這種缺刻也可通過重組系統(tǒng)把過重組系統(tǒng)把T-DNA雙鏈從雙鏈從Ti質(zhì)粒上解離下來。質(zhì)粒上解離下來。缺失研究也表明：右邊界重復(fù)序列缺失后，缺失研究也表明：右邊界重復(fù)序列缺失后，T-DNA不能轉(zhuǎn)不能轉(zhuǎn)移，而左邊界重復(fù)序列的缺失會(huì)稍稍降低移，而左邊界重復(fù)序列的缺失會(huì)稍稍降低T-DNA轉(zhuǎn)移頻率轉(zhuǎn)移頻率(Timmerman B1988)，這

23、進(jìn)一步說明，這進(jìn)一步說明T-DNA單鏈?zhǔn)窃趶膯捂準(zhǔn)窃趶挠疫吔绲阶筮吔缬疫吔绲阶筮吔?向向3替換合成中釋放出來的。替換合成中釋放出來的。右邊界的缺失，使得右邊界的缺失，使得DNA合成不能起始，因而合成不能起始，因而T-DNA不不能釋放，所以能釋放，所以T-DNA不能轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞。而左邊界的缺不能轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞。而左邊界的缺失，僅會(huì)影響失，僅會(huì)影響DNA合成過程的終止，可能會(huì)降低導(dǎo)致合成過程的終止，可能會(huì)降低導(dǎo)致T-DNA單鏈釋放，而不會(huì)明顯影響單鏈釋放，而不會(huì)明顯影響T-DNA單鏈的形成。單鏈的形成?？梢娍梢奣-DNA左邊界序列作為合成左邊界序列作為合成DNA的起始位點(diǎn)的效率比的起始位點(diǎn)的效率比右邊界序列低。這種不同不是由于左右邊界的右邊界序列低。這種不同不是由于左右邊界的24bp重復(fù)序重復(fù)序列核苷酸不同，而是由于靠近右邊界位置有一個(gè)轉(zhuǎn)移增強(qiáng)列核苷酸不同，而是由于靠近右邊界位置有一個(gè)轉(zhuǎn)移增強(qiáng)子子(transfer enhancer；overdriverPeralta EG1986)存在。這個(gè)存在。這個(gè)T-DNA轉(zhuǎn)移增強(qiáng)序列能極其明顯的增加農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移增強(qiáng)序列能極其明顯的增加農(nóng)桿菌中中T-DNA鏈形成，并且這種作用與它的位置、方向及距離鏈形成，并且這種作用與它的位置、方向及距離均無關(guān)系