1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導2019 年檢驗技師精選體驗課本章內容一、糖代謝簡述二、高血糖癥和糖尿病三、糖尿病的實驗室檢查四、低血糖癥五、糖代謝先天性異常一、糖代謝簡述（一）糖代謝途徑1. 糖酵解途徑 無氧條件供能2. 糖的有氧氧化途徑 主要供能方式3. 磷酸戊糖途徑 生成 5- 磷酸核糖、 NADPH4. 糖原的合成分解途徑 糖的儲存、調節(jié)血糖5. 糖異生 調節(jié)血糖、饑餓時供能6. 糖醛酸途徑 生成葡萄糖醛酸1. 糖酵解概念： 在無氧 情況下，葡萄糖分解生成乳酸 的過程。要點：（ 1）無氧 條件、胞液進行；（ 2）產能少；（ 1 分子葡萄糖 2 分子 ATP）（ 3）產

2、物 乳酸（ 4）關鍵酶：己糖激酶、磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶。生理意義：（ 1）是機體在 缺氧或無氧狀態(tài)迅速獲得能量 的有效措施；（ 2）是某些組織細胞獲得能量的方式，如紅細胞 ；（ 3）糖酵解的某些中間產物與其他代謝途徑相聯系。2. 有氧氧化概念： 葡萄糖在 有氧條件下徹底氧化成水和二氧化碳的過程。要點：（ 1）第一階段在胞液，第二階段在線粒體；（ 2）經過 三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化過程（呼吸鏈）徹底氧化為CO2和 H2O。三羧酸循環(huán)是糖、脂、蛋白質徹底氧化的共同通路 。專心-專注-專業(yè)第 1 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導糖的有氧氧化基本過程（ 3）產能多： 1 分子葡萄糖徹底氧化產生36 或 3

3、8 分子 ATP。（ 4）關鍵酶： 乙酰 COA合成酶 、檸檬酸合酶、異檸檬酸脫氫酶、 - 酮戊二酸脫氫酶生理意義 ：有氧氧化是糖氧化提供能量的主要方式 。3. 磷酸戊糖途徑產物： 5- 磷酸核糖、 NADPH。關鍵酶： 6- 磷酸葡萄糖脫氫酶。生理意義：（ 1）提供 5- 磷酸核糖，用于核苷酸和核酸的生物合成。（ 2）提供 NADPH（還原型輔酶），參與多種代謝反應，維持谷胱甘肽的還原狀態(tài)等。4. 糖原的合成途徑（ 1）葡萄糖通過 -1 ， 4 糖苷鍵 和 -1 ， 6 糖苷鍵相連而成的具有高度分支的聚合物。（ 2）糖原主要分為 肝糖原和肌糖原 ；（ 3）糖原是可以迅速動用的葡萄糖儲備。肌糖

4、原分解可供肌肉收縮的需要， 肝糖原分解提供血糖 。短期饑餓 后，血糖濃度的恒定主要靠 肝糖原 的分解。肝臟有 葡萄糖 -6- 磷酸酶 使肝糖原分解， 肌肉 組織缺乏 該酶。第 2 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導5. 糖異生（ 1）概念 ：由非糖物質轉變?yōu)槠咸烟堑倪^程稱為糖異生（ 2）肝臟 是糖異生的主要器官。（ 3）原料：乳酸，甘油、生糖氨基酸。（ 4）生理意義：補充血糖，維持血糖水平 恒定。防止乳酸中毒。協助氨基酸代謝。6. 糖醛酸途徑生理意義：生成有活性的 葡萄糖醛酸 ，它是生物轉化中重要的結合劑。葡萄糖醛酸是蛋白聚糖的重要組成成分。糖代謝途徑葡萄糖在肌肉內的代謝如下，但除外的是A. 糖酵解產

5、生大量乳酸B. 糖酵解主要在肌肉內進行C. 糖酵解是氧供應不足情況下的一種供能方式D. 乳酸可以直接變成 6- 磷酸葡萄糖以維持血糖恒定E. 肌肉收縮做功主要靠肌糖原氧化供能正確答案D答案解析：葡萄糖在有氧條件下徹底氧化成水和二氧化碳稱為有氧氧化，有氧氧化是糖氧化的主要方式。絕大多數細胞都通過有氧氧化獲得能量。肌肉進行糖酵解生成的乳酸，最終仍需要在有氧時徹底氧化為水及二氧化碳。肌糖原可供肌肉收縮的需要，肝糖原則是血糖的重要來源。對葡萄糖的代謝敘述錯誤的是A. 有氧氧化是葡萄糖在體內供能的主要方式B. 磷酸戊糖途徑可生成 NADPHC. 糖原分子中主要的化學鍵是 -1,4 糖苷鍵D. 肌糖原分解

6、可直接補充血糖E. 糖異生可以調節(jié)血糖正確答案D答案解析：肌肉中缺少葡萄糖-6- 磷酸酶，不可以直接分解補充血糖。第 3 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導考綱 紅細胞 ABO血型系統 紅細胞 Rh 血型系統 新生兒溶血病檢查 自動化血型分析儀 人類白細胞抗原檢查 血小板血型系統檢查 血液保存液 輸血與輸血反應紅細胞 ABO血型系統（一） ABO血型系統的抗原及抗體血型：指紅細胞表面抗原的差異，血小板和白細胞表面抗原也存在差異，因此，血型是抗原抗體系統的遺傳特征。Karl Landsteiner1.ABO 血型抗原（ 1）ABO抗原的遺傳：第9 號染色體的長臂3 區(qū) 4 帶，顯性基因A、 B，隱性基因

7、O。第 4 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導六個基因型：O0、 AA、 A0、 BB、 B0、 AB。四種表現型：A、 B、 O、 AB。（ 2） ABO抗原的發(fā)生（ 3） ABO分泌型ABH血型特異物質存在于唾液（含量最豐富）、尿、淚液、胃液、膽汁、羊水、血清、精液、汗液、乳汁等體液中，但不存在于腦脊液。 這些可溶性抗原又被稱為血型物質。血型物質意義測定唾液血型物質，可輔助鑒定血型。中和 ABO血型系統中的“天然抗體”，有助于檢查免疫性抗體，鑒別抗體的性質。檢查羊水，可預測胎兒ABO血型等。2.AB0 系統抗體（ 1）天然抗體與免疫性抗體天然抗體：在沒有可覺察的抗原刺激下而產生的抗體，以IgM 為

8、主，又稱完全抗體或鹽水抗體；也可能是由一種無覺察的免疫刺激產生而得。免疫性抗體：有IgM、IgG、IgA ，但主要是IgG ?？?A 和抗 B 可以是 IgM 與 IgG ，甚至是 IgM、IgG 、IgA的混合物，但主要是IgM，而 O型血清中以IgG 為主。（ 2）天然抗體和免疫抗體的主要區(qū)別見下表。特性天然抗體（ IgM）免疫抗體（ IgG ）抗原刺激無察覺有（妊娠、輸血）相對分子質量100 萬16 萬與紅細胞反應最適溫度42537第 5 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導被血型物質中和能不能溶血素效價較低較高耐熱性不耐熱（冷抗體）耐熱（溫抗體）在鹽水中與相應紅細胞發(fā)生肉眼可見凝集能不能對酶處理

9、紅細胞的反應變化不大能反應通過胎盤不能能與巰基乙醇或二硫蘇糖醇的反應滅活不被滅活（二） AB0 血型系統的亞型亞型是指屬同一血型抗原，但抗原結構和性能或抗原位點數有一定差異。A 亞型：最多見， A 亞型主要有A1 和 A2 ，占全部 A 型血的 99.9%，其他 A 亞型（ A3、 AX、 AM）為少數；作AB0血型鑒定時，應加O型血清，以防對A 亞型誤定型。B 亞型：（ B3、 BM、 BX）比 A 亞型少見，臨床意義不大。1.A 1、 A2 亞型基本特征A1 亞型：紅細胞上具有A1 和 A 抗原，血清中含有抗B 抗體。A2 亞型：紅細胞上只有A 抗原，血清中除含抗B 抗體外，還有少量抗A1

10、 抗體。2.A 1、 A2 亞型的鑒定方法A1 和 A2 表型鑒別3.A 1、 A2 亞型鑒定的意義目的是防止誤定血型。盡管我國A2、A2B 型在 A 與 AB型中所占比例少于1%，但定型時易將弱A 亞型誤定為 O型，如果給其輸入0 型血，不會有太大問題，但是如果把弱A 亞型誤定為0 型，并輸給O型人，則受血者的抗A 抗體就可能與輸入的弱A 亞型的紅細胞起反應，引起血管內溶血性輸血反應。（三） AB0 血型鑒定1. 原理 常用鹽水凝集法檢測紅細胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據抗原抗體存在的情況判定血型。常規(guī)的方法有：正向定型：用已知抗體的標準血清檢查紅細胞上未知的抗原。第 6

11、 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導反向定型：用已知血型的標準紅細胞檢查血清中未知的抗體。結果判定：凡紅細胞出現凝集者為陽性，呈散在游離狀態(tài)為陰性。紅細胞的常規(guī)AB0定型正向定型反向定型血型抗 -A抗 -B抗-ABA 細胞B細胞O細胞-+-O+-+-+-A-+-B+-AB2. 鑒定方法（ 1）生理鹽水凝集法 玻片法操作簡單， 適于大量標本檢查 ，但反應時間長； 被檢查者如血清抗體效價低， 則不易引起紅細胞凝集，因此，不適于反向定型。試管法由于離心作用可加速凝集反應，故反應時間短， 借助于離心力可以使紅細胞接觸緊密，促進凝集作用，第 7 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導適于急診檢查。玻片法凝集結果判斷呈一片或

12、幾片凝塊，僅有少數單個游離紅細胞呈數個大顆粒狀凝塊，有少數單個游離紅細胞數個小凝集顆粒和一部分微細凝集顆粒，游離紅細胞約占1/2肉眼可見無數細沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團中有58 個以上紅細胞凝集可見數個紅細胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細胞±可見極少數紅細胞凝集，而大多數紅細胞仍呈分散分布混合凝集外觀鏡下未見細胞凝集，紅細胞均勻分布（ 2）凝膠微柱法是紅細胞抗原與相應抗體在凝膠微柱介質中發(fā)生凝集反應的免疫學方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、 標本，用專用離心機離心后可直接用肉眼觀察結果或用血型儀分析。此法操作標準化，定量加樣，確保結果準確性。3. 抗 A、抗 B 和抗

13、 AB標準血清標準血清均采自健康人，并應符合下述條件：特異性：只能與相應的紅細胞抗原發(fā)生凝集，無非特異性凝集。效價：我國標準抗 A 和抗 B 血清效價均在 1:128 以上 。親和力：我國標準要求抗A 對 A 、A 及 A B 發(fā)生反應開始出現凝集的時間分別是15s 、30s 和 45s；122抗 B 對 B 型紅細胞開始出現凝集的時間為215s 。凝集強度為 3min 時，凝塊不小于 1mm。冷凝集素效價：在 1:4以下。無菌。滅活補體。（四）交叉配血法最重要的AB0 血型配合試驗之一。必須在AB0血型相同，且交叉配血無凝集時才能輸血。1. 目的：檢查受血者與供血者是否存在血型抗原與抗體不合

14、的情況。2. 原則：第 8 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導主側加受血者血清與供血者紅細胞；次側加受血者紅細胞與供血者血清，觀察兩者是否出現凝集。3. 方法（ 1）鹽水配血法：簡便快速。主要缺點是只能檢出不相配合的完全抗體，而不能檢出不完全抗體。（ 2）抗球蛋白法配血法：又稱 Coombs試驗。是最可靠的確定不完全抗體的方法，但操作繁瑣?？骨虻鞍追ㄅ溲ㄊ亲钤缬糜跈z查不完全抗體的方法。直接抗球蛋白法：可檢查受檢者紅細胞是否已被不完全抗體致敏。間接抗球蛋白法： 可用于鑒定 Rh 血型及血清中是否存在不完全抗體。 本法雖較靈敏， 但也有一定限度，且操作復雜，不利于急診檢查和血庫的大批量工作。（ 3）聚凝

15、胺法配血法：可以檢出 IgM 與 IgG 兩種性質的抗體 ，能發(fā)現可引起溶血性輸血反應的幾乎所有規(guī)則與不規(guī)則抗體，故本法已逐漸推廣使用。配血原理聚凝膠分子是帶有高價陽離子多聚季銨鹽，溶解后帶有很多正電荷，可以中和紅細胞表面負電荷，有第 9 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導利于紅細胞凝集，低離子強度溶液也能減低紅細胞Zeta 電位，可進一步增加抗原抗體間的吸引力。（ 4）凝膠配血法：又稱微管（板）凝膠抗球蛋白試驗，此法在凝膠中進行，保持了傳統抗球蛋白試驗的準確性、同時具有簡便、可靠的特點，全自動血型分析儀進行交叉配血，也是利用凝膠配血。其他可檢出不完全抗體的方法有蛋白酶法、膠體介質法等。4. 質量控制

16、（ 1）血液標本：交叉配血的血液標本，受血者標本應為新鮮血，供血者標本應為血袋兩端剛剪下小管中的血液。（ 2）選用方法：用試管法做交叉配血。（ 3）溶血現象：配血管出現溶血現象，為配血不合。（五） AB0 血型鑒定及交叉配血中常見錯誤1. 分型血清方面的原因（ 1）自制分型血清抗體：效價太低、親和力不強，造成定型不準確。（ 2）患者纖維蛋白原增高或為異常蛋白血癥：如多發(fā)性骨髓瘤，巨球蛋白血癥等，可產生緡錢狀假凝集。（ 3）患者輸入了高分子血漿代用品或靜脈注射造影劑等藥物：可引起紅細胞聚集，易誤認為凝集。（ 4）血清中可能存在的不規(guī)則抗體：如A2 和 A2B 型患者血清內有抗 A1 抗體，能凝集

17、 A1 紅細胞。有些癌癥患者（如胃癌、胰腺癌等）血中含有大量可溶性A 或 B 物質，這些物質可中和抗血清的抗體，從而抑制反應，造成假性不凝集?？朔霓k法是紅細胞先洗滌后再試驗。（ 5）嬰兒尚未產生自己的抗體或有從母親獲得的血型抗體：新生兒不宜用血清作反定型。（ 6）老年人血型抗體水平下降：某些免疫缺陷的人或慢性淋巴細胞白血病，遺傳性無丙種球蛋白血癥以及有些用了免疫抑制劑的患者， 由于免疫球蛋白下降， 血型抗體也下降甚至缺如。 可出現反向定型錯誤。2. 紅細胞方面的原因（ 1）用近期內輸過血的患者血液做對照紅細胞：此時，患者血液中紅細胞為混合型細胞。（ 2）患者紅細胞被大量抗體包被：例如某些自身

18、免疫疾病或新生兒溶血病患者的紅細胞，或紅細胞懸浮于高濃度蛋白的介質中，紅細胞都會自發(fā)地發(fā)生凝集。（ 3）紅細胞膜有遺傳性或獲得性異常。（ 4）抗原變異： A 或 B的弱抗原易判為不凝集（假陰性），而由細菌引起的獲得性類B 抗原易誤判為陽性。有些細菌含有乙?；福苁固禺愋訟 型物質末端的N- 乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖，從而使A 型獲得類 B 抗原后易誤定為AB型。由于患白血病或某些惡性腫瘤（如Hodgkin ?。┦?A 或 B 抗原變弱。嬰兒及老年人的紅細胞抗原也較青壯年為弱。（ 5）血清中有高濃度血型物質：當用血清配制紅細胞懸液時，血型物質則會中和分型血清中的抗體，而不再與紅細胞抗原起反應

19、。（ 6）紅細胞被細菌污染：細菌的酶消化了紅細胞表面的唾液酸，暴露了人人都有的T 抗原，被具有抗T 活性的 IgM 凝集。（ 7）嵌合體現象：混合細胞群見于異卵雙生子。如：有98%O型紅細胞， 2%B型紅細胞會定為O型，但血清中只有抗A 抗體。第 10 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導3. 操作方面的原因：是最常見原因。（ 1）操作器材：玻璃器皿不潔或使用了嚴重污染的血清、紅細胞，可出現假陽性。試管污染洗滌劑會造成假陰性。（ 2）紅細胞與血清比例和離心： 紅細胞與血清比例不當、 過度離心或離心不足可引起假陽性或假陰性。（ 3）溶血現象：誤認為溶血現象為陰性結果。（ 4）試驗溫度：溫度過高會造成假陰性

20、。 AB0 血型系統的 IgM 抗體最適溫度為 4 22 ，如達 37凝集力即下降。（ 5）信息記錄差錯：標本、試劑、標簽、加樣弄錯，或出現記錄錯誤。大批標本檢查時搞錯標本號，張冠李戴最易造成錯誤。（六） AB0 血型系統主要臨床意義1. 輸血 是治療與搶救生命的重要措施。輸血前必須檢查血型，選擇血型相同的供血者，進行交叉配血，結果完全相合才能輸血。2. 新生兒溶血病母嬰 AB0血型不合引起的新生兒溶血?。ǔ榈? 胎溶血），主要依靠血型血清學檢查作出診斷。3. 器官移植 受者與供者必須 AB0血型相符才能移植。第一節(jié) 免疫原的制備免疫原指能誘導機體產生抗體或致敏淋巴細胞，并能在體內外與抗體或

21、致敏淋巴細胞發(fā)生特異性反應的物質。一、顆粒性抗原的制備細胞、細菌、寄生蟲等皆為顆粒性抗原。細胞抗原（如綿羊紅細胞）一般情況下經生理鹽水或其他溶液洗凈，配制一定濃度即可。細菌抗原多用液體或固體培養(yǎng)物，經集菌后處理。顆粒性抗原大多用靜脈內注射免疫法。二、可溶性抗原的制備和純化（一）組織和可溶性抗原的粗提蛋白質、糖蛋白、脂蛋白、酶、補體、細菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆為良好的可溶性抗原。1. 組織勻漿的制備（ 1）高速組織搗碎機法；（ 2）研磨法：組織勻漿液要離心沉淀，沉淀物為組織和細胞碎片，上清液為提取可溶性抗原的材料。2. 細胞的破碎（ 1）反復凍融法： -20 冷凍， 30 37融化。（

22、2）超聲破碎法（ 3）自溶法（ 4）酶處理法：胃蛋白酶或胰酶。（ 5）表面活性劑處理法：十二烷基硫酸鈉。3. 免疫球蛋白片段的制備（ 1）非共價鍵解離法：改變 pH 環(huán)境或用變性劑。（ 2）共價鍵解離法：還原法或氧化法解離二硫鍵。（ 3）溴化氰裂解法：溴化氰裂解蛋白質肽鏈。第 11 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導（ 4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶。（二）可溶性抗原的提純和純化1. 超速離心法：適用于少數大分子抗原或比重較輕的抗原，不適用于大多數中小分子抗原。2. 選擇性沉淀法：（ 1）核酸去除法：核糖核酸降解法更簡便。（ 2）鹽析法：常采用硫酸銨使蛋白抗原進行粗篩、提取丙種球蛋白及抗原

23、濃縮。（ 3）有機溶劑沉淀法：常采用乙醇或丙酮。（ 4）聚合物沉淀法：常用非離子型聚合物，如聚乙二醇（PEG）。3. 凝膠過濾法：根據分子大小進行分離純化。4. 離子交換層析法：利用一些帶電離子基團的凝膠或纖維素，吸附帶有相反電荷的蛋白質抗原。5. 親和層析法： 與生物分子間不同的親和性進行分離。如抗原和抗體、 酶和酶抑制物、 酶蛋白和輔酶、激素和受體等。6. 電泳法：蛋白質在同一 pH環(huán)境中，分子量和電荷不同，在電場中遷移速率不同進行分離。（三）純化抗原的鑒定1.蛋白質含量測定：常用的是紫外光吸收法，該法測定280nm 和 260nm的吸光度（ A）值。2.分子量測定：采用聚丙烯酰胺凝膠電泳

24、（SDS-PAGE）法、凝膠過濾法等。3.純度鑒定：采用醋酸纖維膜電泳、SDS-PAGE、毛細管電泳、等電聚焦、高效液相層析法等。4.免疫活性鑒定：雙向免疫擴散法、ELISA 法等。三、半抗原性免疫原的制備半抗原指只具有抗原性而無免疫原性的物質。多見于分子量小于4000 的有機物質。 半抗原與載體相結合具有免疫原性。（一）載體1. 蛋白質：以牛血白蛋白最常見。2. 多肽聚合物：常用多聚賴氨酸。3. 大分子聚合物和某些顆粒。第 12 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導（二）半抗原與載體的連接方法1. 物理方法：通過電荷和微孔吸附半抗原。2. 化學方法：通過功能基團將半抗原與載體連接。（ 1）帶有游離氨基

25、或游離羧基的半抗原，腦啡肽、促胃液素、前列腺素等多肽激素，可直接與載體連接。（ 2）無羧基和氨基的半抗原，如醇、酚、糖、多糖、核苷以及甾族激素等，需要用化學方法使其轉變?yōu)閹в杏坞x氨基或游離羧基的衍生物后才能與載體連接。（三）半抗原性免疫原的鑒定20 個以上半抗原連接在一個載體分子上，才能有效刺激免疫動物產生抗體。方法有：1. 吸收光譜分析法2. 放射性核素標記半抗原滲入法第二節(jié)免疫佐劑一、佐劑的種類1. 化合物：包括氫氧化鋁、礦物油、吐溫-80 、弗氏不完全佐劑（羊毛脂與液狀石蠟的混合物）以及人工合成的多聚肌苷酸：胞苷酸、脂質體等。2. 生物制劑：經處理改造的細菌及其代謝產物，如卡介苗、脂多糖

26、（LPS）和類脂A、源于分枝桿菌的胞壁酰二肽等；細胞因子及熱休克蛋白等。最常用于免疫動物的佐劑是弗氏佐劑，弗氏佐劑分為弗氏完全佐劑（弗氏不完全佐劑加卡介苗）和弗氏不完全佐劑兩種。 使用時加入水溶性抗原并充分乳化，使抗原與佐劑形成油包水乳劑。佐劑和抗原的比例為 1:1 。乳化的方法有兩種：研磨法。攪拌混合法：本法優(yōu)點是無菌操作，節(jié)省抗原或佐劑，且可用此注射器直接注射。缺點是不易乳化完全。二、佐劑的作用機制1. 改變抗原的物理性狀，延緩抗原降解和排除，從而更有效地刺激免疫系統；2. 刺激單核 - 巨噬細胞系統，增強其處理和提呈抗原的能力；3. 刺激淋巴細胞增殖和分化；4. 改變抗體的產生類型和誘導

27、遲發(fā)型超敏反應。第三節(jié)抗血清的制備抗血清的制備是將制備好的免疫原按照一定的免疫程序接種給所選擇的動物，該動物在含有多種抗原表位的抗原刺激下，體內多個 B細胞克隆被激活并產生針對某一抗原多種不同表位的抗體，其混合物為多克隆抗體。采集動物血液，分離含有抗體的血清，即為抗血清。一、免疫動物的選擇常用的有家兔、綿羊、豚鼠、雞、山羊和馬。1. 抗原來源與動物種屬差異越大，免疫原性越強，免疫效果越好。2. 抗體需求量大時， 可選用馬、 綿羊等大動物。 抗血清需求量少時， 可選用家兔、 豚鼠和雞等小動物。3. 抗血清分為 R型和 H 型抗血清來源合適范圍用途R 型家兔等小動物較寬診斷試劑H 型馬等大動物較窄

28、免疫治療第 13 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導4. 抗原的性質： 對于蛋白質抗原大部分動物皆適合，常用的是山羊和家兔。在某些動物體內有類似物質時，蛋白質抗原對這些動物免疫原性極差，如IgE 對綿羊、胰島素對家兔、多種酶類對山羊，免疫后均不易產生抗體。二、免疫程序1. 免疫原的劑量：免疫原劑量過大或過小都可使動物產生免疫耐受，在一定劑量范圍內，免疫原劑量越大，產生的抗體效價越高。2. 免疫途徑：有皮內、皮下、肌內、靜脈、腹腔、淋巴結等途徑。皮內或皮下免疫時一般采用多點注射。 初次免疫一般選擇皮內接種，加強免疫和顆粒性抗原一般選擇靜脈注射。寶貴抗原可選擇淋巴結內微量注射法。3. 免疫間隔時間： 間隔

29、時間過短， 極易造成免疫抑制。 若間隔時間太長，則刺激減弱，抗體效價不高。第 1 次與第 2 次免疫間隔時間以10 20 天為好，第3 次及以后的間隔一般為710 天。三、動物采血法動物經免疫3 5 次后，如抗血清鑒定合格，應在末次免疫后5 7 天及時采血。1. 頸動脈采血法： 該法最常用 ，適用于家兔、 綿羊、山羊等動物。 最多可獲 70 80ml，般 50ml 左右。2. 心臟采血法：家兔、豚鼠、大鼠和雞等動物。3. 靜脈采血法：家兔可用耳中心靜脈采血，山羊和綿羊可用頸靜脈采血。動物采血后，應盡快分離血清，分離血清的方法常采用室溫自然凝固，然后置37或 4使血塊收縮后，收集血清。第四節(jié)抗血

30、清的鑒定和保存一、抗血清的鑒定1. 抗體特異性的鑒定常用雙向免疫擴散法。（ 1）粗抗原及純抗原之間皆有一條沉淀線，且兩者互相融合，則已產生單價特異性抗體；（ 2）若純化抗原出現一條， 而粗抗原出現多條線， 且一條沉淀線與純抗原沉淀線相連接，需去除雜抗。（ 3）若不出現沉淀線，表示免疫失敗。2. 抗體效價的測定 顆粒性抗原采用凝集試驗， 可溶性抗原采用雙向免疫擴散試驗 （棋盤滴定） 、ELISA等方法。3. 抗體純度的鑒定 采用 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDS-PAGE）、雙向免疫擴散試驗、免疫電泳等。若只出現一條蛋白電泳區(qū)帶說明抗體純化已達到要求。4. 抗體親和力的鑒定 以親和常數表示。

31、二、抗血清的保存1.2 8保存：用于短期保存；2. 冷凍保存：是常用的抗體保存方法。將抗體分為小包裝，在-80 -20 保存，一般可保存5 年，但應避免反復凍融；3. 真空干燥保存：用真空凍干機進行干燥，封裝后可長期保存，一般在冰箱中可保存5 10 年。第五節(jié)抗血清的純化抗血清純化的目的是除去不相關成分，防止抗血清中的其他雜抗體干擾試驗結果。最常見的是提取抗血清中的特異性 IgG 或單價抗體。一、特異性IgG 抗體第 14 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導1. 鹽析法 多采用硫酸銨鹽析法或硫酸鈉鹽析法。2. 凝膠過濾法 蛋白質分子量不同， 通過凝膠介質時的洗脫速度不同。 血清蛋白的分級分離常用該法。

32、按分子大小可分為 3 組：第 1 組：IgM 和一些脂蛋白； 第 2 組：IgG 和較少量的 IgA 、IgD 、IgE 等；第 3 組：白蛋白、血清黏蛋白、轉鐵蛋白等。該法過濾條件溫和，不影響IgG 活性。常結合鹽析法提取 IgG。3.離子交換層析法 常用的離子交換劑是 DEAE纖維素。該法可獲得較純的IgG，且不影響抗體活性。4.親和層析法 將純化抗原制成親和層析柱，抗血清通過層析柱時，IgG 被層析柱吸附。然后改變洗脫條件，使IgG 從層析柱上解離。二、單價特異性抗血清單價特異性是指血清只與其特異性抗原發(fā)生反應。免疫得到的抗血清總是有抗白蛋白等雜抗體存在。雜抗體的去除有兩種方法：1. 親

33、和層析法2. 吸附劑方法制備蛋白質抗原時破碎組織細胞最簡便的是A. 反復凍融法B. 超聲破碎法C. 表面活性劑處理法D. 自溶法E. 酶處理法正確答案 A答案解析制備蛋白質抗原時破碎組織細胞最簡便的是反復凍融法。需制備 10ml 抗血清，應選擇何種動物A. 家兔B. 小白鼠C. 馬D. 綿羊E. 猴正確答案 A答案解析抗體需求量大時，可選用馬、綿羊等大動物。抗血清需求量少時，可選用家兔、豚鼠和雞等小動物。下列佐劑中具有免疫原性的是A. 脂多糖B. 氫氧化鋁C. 石蠟油D. 羊毛脂E. 多聚核苷酸正確答案 A答案解析生物制劑具有免疫原性，所以具有免疫原性的是脂多糖。廠家生產的抗IgG 制劑一般的

34、保存方法為A. 液體 4保存B. 液體 -10 保存C. 真空干燥保存D.25 保存第 15 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導E. 加疊氮鈉保存正確答案 C答案解析抗血清的保存： 2 8保存：用于短期保存；冷凍保存：是常用的抗體保存方法。將抗體分為小包裝，在 -80 -20 保存，一般可保存 5 年，效價不會明顯下降，但應避免反復凍融；真空干燥保存：用真空凍干機進行干燥，封裝后可長期保存，一般在冰箱中可保存5 10 年。最常用的半抗原載體是A. 牛血清白蛋白B. 牛甲狀腺球蛋白C. 人血清白蛋白D. 人甲狀腺球蛋白E. 球蛋白正確答案 A答案解析半抗原載體常用的有人血白蛋白、牛血白蛋白、血藍蛋白、牛

35、甲狀腺球蛋白等。以牛血白蛋白最常用。A. 鹽析沉淀法B. 有機溶劑沉淀法C. 凝膠過濾D. 離子交換層析E. 親和層析1. 經典的蛋白質抗原純化分離方法為正確答案 A答案解析經典的蛋白質抗原純化分離方法為鹽析沉淀法。2. 根據抗原分子大小進行純化分離的方法為正確答案 C答案解析凝膠過濾法：根據分子大小進行分離純化。3. 根據抗原所帶電荷不同進行純化分離的方法為正確答案 D答案解析離子交換層析法：根據所帶電荷不同進行純化分離。本章內容一、培養(yǎng)基的組成成分二、培養(yǎng)基種類三、分離培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基人工配制專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品。組成成分：1. 營養(yǎng)物質2. 凝固物質3. 抑制劑或指示

36、劑培養(yǎng)基的組成成分營養(yǎng)物質：應含有氮源、碳源、無機鹽類和生長因子等。（ 1）蛋白胨提供氮源。第 16 頁臨床醫(yī)學檢驗技師考試輔導（ 2）肉浸液可提供氮源和碳源。（ 3）牛肉膏營養(yǎng)價值低于肉浸液，但因無糖可用作腸道桿菌鑒別培養(yǎng)基的基礎成分。（ 4）糖類除葡萄糖、蔗糖主要作為碳源和能源的基本成分外，其他糖類和醇類主要用于鑒定細菌所做的發(fā)酵反應。（ 5）血液 既含有營養(yǎng)物質，又能提供生長因子，所以用于培養(yǎng)營養(yǎng)要求較高的細菌。另外，還可根據細菌在血液培養(yǎng)基中的溶血現象而進行鑒定。（ 6）無機鹽類提供各種元素，如：鉀、鈉、鐵、鎂、鈣、磷、硫等。（ 7）雞蛋和動物血清 僅用于制備一些特殊的培養(yǎng)基。如培養(yǎng)結

37、核分枝桿菌的雞蛋培養(yǎng)基和培養(yǎng)白喉桿菌的呂氏血清培養(yǎng)基等。（ 8）生長因子常在培養(yǎng)基中加入維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等生長因子。凝固物質最常用的凝固物質為瓊脂，特殊情況下也可用明膠、卵白蛋白、血清等。抑制劑和指示劑：用于選擇、鑒定及判斷結果。1. 抑制劑：必須具有選擇抑制作用。目的在于抑制非檢出菌（非目的菌）的生長，以利于檢出菌（目的菌）的生長。常用膽鹽、煌綠、亞硫酸鈉、亞硒酸鈉及一些染料和某些抗生素等。2. 指示劑： 在培養(yǎng)基中加入一定種類的指示劑，是為了觀察細菌是否利用和分解培養(yǎng)基中的糖、醇類。常用的有酚紅、中性紅、甲基紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍、中國藍等酸堿指示劑。亞甲藍常用作氧化還原指示

38、劑。培養(yǎng)基種類1. 基礎培養(yǎng)基：肉湯。 含牛肉浸液和蛋白胨。廣泛用于細菌的增菌、檢驗，也是制備其他培養(yǎng)基的基礎成分。2. 營養(yǎng)培養(yǎng)基： 基礎培養(yǎng)基中加入特殊成分， 供營養(yǎng)要求較高的細菌和需要特殊生長因子的細菌生長。如血瓊脂平板、巧克力血平板。3.鑒別培養(yǎng)基：觀察細菌生長過程中分解底物所釋放的不同產物通過指示劑顯示來鑒別細菌。如糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂（ KIA）、伊紅 - 亞甲藍瓊脂和動力 - 吲哚 - 尿素（ MIU）培養(yǎng)基等。4.選擇培養(yǎng)基： 加入抑制劑抑制標本中雜菌生長，有助于所選擇的細菌種類生長（ SS瓊脂）。5.特殊培養(yǎng)基：厭氧培養(yǎng)基和細菌L 型培養(yǎng)基 （皰肉培養(yǎng)基、巰基乙醇酸鈉培養(yǎng)基、高滲培養(yǎng)基）等。分離培養(yǎng)基的選擇根據標本來源、培養(yǎng)目的