1、會計(jì)學(xué)1細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)n掌握細(xì)胞化學(xué)染色臨床應(yīng)用掌握細(xì)胞化學(xué)染色臨床應(yīng)用n掌握各種細(xì)胞化學(xué)染色的原理及臨床意義掌握各種細(xì)胞化學(xué)染色的原理及臨床意義n熟悉各種細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果判斷及正常血熟悉各種細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果判斷及正常血細(xì)胞染色反應(yīng)細(xì)胞染色反應(yīng)n了解細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟了解細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟 1. 輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型 2. 輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別 診斷診斷 3. 觀察疾病的療效和預(yù)后觀察疾病的療效和預(yù)后疾病疾病形態(tài)學(xué)分型：進(jìn)行初步的診斷形態(tài)學(xué)分型：進(jìn)行初步的診斷免疫學(xué)分型：明確細(xì)胞種

2、類免疫學(xué)分型：明確細(xì)胞種類細(xì)胞遺傳學(xué)分型：與疾病預(yù)后有關(guān)細(xì)胞遺傳學(xué)分型：與疾病預(yù)后有關(guān)分子生物學(xué)分型：提高到分子水平分子生物學(xué)分型：提高到分子水平1. 固定固定2. 顯示：有色沉淀反應(yīng)顯示：有色沉淀反應(yīng)3. 復(fù)染：使各種細(xì)胞能顯示出來復(fù)染：使各種細(xì)胞能顯示出來核：中性紅、甲基綠、沙黃等。核：中性紅、甲基綠、沙黃等。漿：伊紅、剛果紅、光綠等。漿：伊紅、剛果紅、光綠等。 第二部分第二部分 具體細(xì)胞化學(xué)染色方法具體細(xì)胞化學(xué)染色方法 鐵染色鐵染色(Ferric stain) 骨髓中的貯存鐵主要存在于骨髓小粒骨髓中的貯存鐵主要存在于骨髓小粒(外鐵外鐵)和幼紅細(xì)胞和幼紅細(xì)胞(內(nèi)鐵內(nèi)鐵)中；檢測中；檢測采用

3、普魯氏藍(lán)反應(yīng)。采用普魯氏藍(lán)反應(yīng)。一、原一、原 理理 4Fe3+ + 3K4Fe(CN)6 Fe4Fe(CN)63 + 12K+ 含鐵物質(zhì)含鐵物質(zhì) 亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鉀 亞鐵氰化鐵亞鐵氰化鐵酸性酸性二、結(jié)果判斷二、結(jié)果判斷+（1）分級）分級(按鐵顆粒數(shù)量的多少及大小按鐵顆粒數(shù)量的多少及大小) 細(xì)小顆粒：細(xì)沙樣鐵小粒，不易看清細(xì)小顆粒：細(xì)沙樣鐵小粒，不易看清。 粗大顆粒：很容易看清的顆粒。粗大顆粒：很容易看清的顆粒。（2）陽性率）陽性率 觀察觀察100個(gè)中個(gè)中晚幼紅細(xì)胞，計(jì)算出鐵晚幼紅細(xì)胞，計(jì)算出鐵 粒幼紅細(xì)胞的百分比。粒幼紅細(xì)胞的百分比。 環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞(ringed side

4、roblast) 幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)鐵顆粒幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)鐵顆粒6個(gè)，圍繞個(gè)，圍繞 核周核周1/2以上者。以上者。 鐵粒幼紅細(xì)胞鐵粒幼紅細(xì)胞(sideroblast)： 胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞。胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞。 鐵粒紅細(xì)胞鐵粒紅細(xì)胞(siderocyte)： 胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的成熟紅細(xì)胞。胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的成熟紅細(xì)胞。綠色箭頭示：環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞；藍(lán)色箭頭示：鐵粒紅細(xì)胞綠色箭頭示：環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞；藍(lán)色箭頭示：鐵粒紅細(xì)胞三、參考范圍三、參考范圍3. MDS-RAS：內(nèi)外鐵內(nèi)外鐵增多增多，環(huán)形鐵粒幼，環(huán)形鐵粒幼 紅細(xì)胞紅細(xì)胞15%。4. 非缺鐵性貧血：非缺鐵性貧血：溶貧

5、、巨幼貧、再障、溶貧、巨幼貧、再障、 白血病等，內(nèi)外鐵常增多。白血病等，內(nèi)外鐵常增多。5. 感染、肝硬化、慢性腎炎、血色病等：感染、肝硬化、慢性腎炎、血色病等： 外鐵外鐵增多增多。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色neutrophilic alkaline phosphatase （NAP）-磷酸萘酚鈉磷酸萘酚鈉-萘酚萘酚+ +磷酸鈉磷酸鈉NAPPH9.6-萘酚萘酚+重氮鹽重氮鹽不溶性沉淀定位不溶性沉淀定位于胞質(zhì)于胞質(zhì) 1. 結(jié)果判斷：出現(xiàn)深褐色顆粒的量及密度結(jié)果判斷：出現(xiàn)深褐色顆粒的量及密度+EOS 鈣鈣 鈷鈷 法法 2. ： 3. 參考范圍：參考范圍： 中性粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞N

6、AP陽性率：陽性率：40% NAP積分為：積分為： 30130分分NAP染色結(jié)果既報(bào)陽性率又報(bào)積分值。染色結(jié)果既報(bào)陽性率又報(bào)積分值。1.生理性變化：應(yīng)激狀態(tài)、妊娠、新生兒等。生理性變化：應(yīng)激狀態(tài)、妊娠、新生兒等。 2.病理性變化：病理性變化： (1)NAP ：細(xì)菌性感染、慢粒細(xì)菌性感染、慢粒(加、急加、急)、急、急 淋、慢淋、惡性淋巴瘤、轉(zhuǎn)移癌、淋、慢淋、惡性淋巴瘤、轉(zhuǎn)移癌、 骨纖、真紅、再障、原發(fā)性血小骨纖、真紅、再障、原發(fā)性血小 板增多癥、使用糖皮質(zhì)激素等。板增多癥、使用糖皮質(zhì)激素等。 (1) 類白與慢粒類白與慢粒: 前者前者 后者后者 (2) 慢粒慢性期與慢粒慢性期與慢性中性粒細(xì)胞白血病

7、：慢性中性粒細(xì)胞白血病： 前者前者 后者后者 (3) 細(xì)菌性感染與病毒性感染細(xì)菌性感染與病毒性感染/寄生蟲感染：寄生蟲感染： 前者前者 后兩者正?；蚝髢烧哒；?(2)NAP ：慢粒慢粒(慢慢)、PNH、MDS、惡組等。、惡組等。(6) 惡組與反應(yīng)性組織細(xì)胞增多癥惡組與反應(yīng)性組織細(xì)胞增多癥： 前者前者 后者常后者常 (7) 急性白血病類型：急性白血病類型： 急性髓細(xì)胞急性髓細(xì)胞 急淋急淋 (4) 慢粒病情觀察：慢粒病情觀察： (5) 再障與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿：再障與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿： 前者前者 后者后者 CML類白類白 過氧化物酶染色過氧化物酶染色 (peroxidase，POX)

8、在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)金黃色顆粒為陽性反應(yīng)。在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)金黃色顆粒為陽性反應(yīng)。2. 單核細(xì)胞系統(tǒng)：單核細(xì)胞系統(tǒng)：或弱（或弱（+ +），陽性顆粒少而細(xì)小。），陽性顆粒少而細(xì)小。3. 其它系統(tǒng)細(xì)胞：其它系統(tǒng)細(xì)胞： 淋巴細(xì)胞系統(tǒng)、紅細(xì)胞系統(tǒng)、巨核淋巴細(xì)胞系統(tǒng)、紅細(xì)胞系統(tǒng)、巨核細(xì)胞系統(tǒng)、漿細(xì)胞、組織細(xì)胞細(xì)胞系統(tǒng)、漿細(xì)胞、組織細(xì)胞 急淋和急性髓細(xì)胞系的鑒別：急淋和急性髓細(xì)胞系的鑒別：ALLALL原粒陰性原粒陰性原粒弱陽性原粒弱陽性原粒陽性原粒陽性 早幼粒早幼粒 強(qiáng)陽性強(qiáng)陽性 蘇丹黑染色蘇丹黑染色（Sudan black B，SBB）1. POX特異性高于特異性高于SBB，而敏感性，而敏感性 低于低于SBB；2

9、. SBB步驟較繁瑣。步驟較繁瑣。過碘酸過碘酸-雪夫反應(yīng)雪夫反應(yīng)( (糖原染色糖原染色) ) periodic acid-Schiff reaction(PAS) 過碘酸是氧化劑，使含有過碘酸是氧化劑，使含有乙二醇基乙二醇基的的多糖類物質(zhì)多糖類物質(zhì)(糖原、糖蛋白、糖脂、粘多糖原、糖蛋白、糖脂、粘多糖糖等等)氧化，氧化，形成形成雙醛基雙醛基。醛基與。醛基與Schiff s液中的無色品紅結(jié)合，使無色品紅變成紫液中的無色品紅結(jié)合，使無色品紅變成紫紅色化合物，定位于紅色化合物，定位于含多糖類含多糖類的細(xì)胞內(nèi)。的細(xì)胞內(nèi)。一、原理一、原理 二、正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)二、正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)a 粒細(xì)胞、粒細(xì)胞

10、、b 巨核細(xì)胞、巨核細(xì)胞、c 單核細(xì)胞、單核細(xì)胞、d 幼紅細(xì)胞幼紅細(xì)胞三、結(jié)果判斷三、結(jié)果判斷1. 粒細(xì)胞系統(tǒng)：粒細(xì)胞系統(tǒng)： 紅色、彌散狀。紅色、彌散狀。各種細(xì)胞陽性反應(yīng)強(qiáng)弱不同各種細(xì)胞陽性反應(yīng)強(qiáng)弱不同 2. 淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：淋巴細(xì)胞系統(tǒng)： 粗顆粒狀、小塊狀、大塊狀紅色。粗顆粒狀、小塊狀、大塊狀紅色。1、+ 2、+ 3、+ 4、+ 5、3. 紅細(xì)胞系統(tǒng)：紅細(xì)胞系統(tǒng)： 均勻紅色或塊狀均勻紅色或塊狀 4. 單核細(xì)胞系統(tǒng)：單核細(xì)胞系統(tǒng)： 細(xì)顆粒狀細(xì)顆粒狀 5. 巨核細(xì)胞和血小板：巨核細(xì)胞和血小板： 顆粒狀、塊狀。顆粒狀、塊狀。1.巨核細(xì)胞和血小板陽性巨核細(xì)胞和血小板陽性四、臨床意義四、臨床意義 A 紅

11、白血病紅白血病(+) B 巨幼細(xì)胞性貧血巨幼細(xì)胞性貧血() 3. 其他細(xì)胞：其他細(xì)胞： 急慢性淋巴細(xì)胞白血病和急慢性淋巴細(xì)胞白血病和 淋巴瘤細(xì)胞多呈強(qiáng)陽性淋巴瘤細(xì)胞多呈強(qiáng)陽性 戈謝細(xì)胞呈強(qiáng)陽性戈謝細(xì)胞呈強(qiáng)陽性 尼曼尼曼- -皮克細(xì)胞多呈陰性皮克細(xì)胞多呈陰性CLLALL （一）（一）氯乙酸氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色萘酚酯酶染色 Naphthol AS-D chloroacetate esterase 1. 原理原理 氯乙酸氯乙酸AS-D萘酚萘酚 AS-D萘酚萘酚 不溶性的有色不溶性的有色(紅紅)沉淀。沉淀。 NAS-DCE幾乎僅出現(xiàn)在粒細(xì)胞，其特異性高，幾乎僅出現(xiàn)在粒細(xì)胞，其特異性高， 因此又稱

12、為因此又稱為“粒細(xì)胞酯酶粒細(xì)胞酯酶” NAS-DCE 重氮鹽重氮鹽(堅(jiān)牢藍(lán)紫醬堅(jiān)牢藍(lán)紫醬) 氯氯乙酸乙酸AS-D萘酚酯酶染色萘酚酯酶染色單核細(xì)胞系統(tǒng)：單核細(xì)胞系統(tǒng)： 肥大細(xì)胞：肥大細(xì)胞：（淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、幼紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、幼紅細(xì)胞、 巨核細(xì)胞、血小板：巨核細(xì)胞、血小板： 1. 原原 理理 非特異性脂酶在相應(yīng)的非特異性脂酶在相應(yīng)的pH環(huán)境中，環(huán)境中， 將基質(zhì)液中相應(yīng)底物水解，產(chǎn)生含萘酚將基質(zhì)液中相應(yīng)底物水解，產(chǎn)生含萘酚 的物質(zhì)，后者與重氮鹽發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)，的物質(zhì)，后者與重氮鹽發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)， 形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì) 內(nèi)酶所在的部位。內(nèi)酶所在的

13、部位。 名稱名稱pHpH底物底物生成物生成物重氮鹽重氮鹽( (產(chǎn)物顏色產(chǎn)物顏色) )-醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶(-NAE)中中-醋酸萘酚醋酸萘酚-萘酚萘酚堅(jiān)牢藍(lán)堅(jiān)牢藍(lán)B棕黑棕黑,灰黑灰黑醋酸醋酸AS-D萘酚酯萘酚酯酶酶 (AS-D NAE)中中醋酸醋酸AS-D萘萘酚酚AS-D萘萘酚酚堅(jiān)牢藍(lán)堅(jiān)牢藍(lán)BB藍(lán)藍(lán)-丁酸萘酚酯酶丁酸萘酚酯酶(-NBE)堿堿-丁酸萘酚丁酸萘酚-萘酚萘酚堅(jiān)牢紫醬堅(jiān)牢紫醬GBC紅紅酸性酸性-醋酸萘酚醋酸萘酚酯酶酯酶(ANAE)酸酸-醋酸萘酚醋酸萘酚-萘萘酚酚六偶氮六偶氮付品紅付品紅紅紅-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色(灰黑色、棕黑色灰黑色、棕黑色)-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯

14、酶染色a:單核單核 b:BPC c:巨核巨核 d:LC(+) e:幼紅幼紅(-)NaF抑制抑制率率= = 抑制抑制前前陽性率陽性率 抑制抑制后后陽性率陽性率 抑制抑制前前陽性率陽性率( (或陽性積分或陽性積分) ) 100%-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色M5NaFM1NaF酸性酸性-醋酸萘酚酯酶染色（彌漫性棕紅色）醋酸萘酚酯酶染色（彌漫性棕紅色）-M5 3. 酯酶雙染色酯酶雙染色 在同一張涂片上進(jìn)行兩種酯酶染色在同一張涂片上進(jìn)行兩種酯酶染色特異性酯酶特異性酯酶 + + 非特異性酯酶非特異性酯酶對診斷急性粒對診斷急性粒- -單細(xì)胞白血病有獨(dú)特價(jià)值單細(xì)胞白血病有獨(dú)特價(jià)值-NAE 與與NAS-D

15、CE 紅色紅色(單單)-NBE 與與 NAS-DCE 蘭色蘭色(粒粒)酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色(acid phosphatase，ACP)白色()(3)3(24234POPbNOPbPOPbSSNHPOPb24243)(）（棕黑色34 POACP甘油磷酸鈉甘油pH5.0ACPPh5.0重氮鹽重氮鹽3. 抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一組同工酶）抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一組同工酶）兩張相同標(biāo)本涂片兩張相同標(biāo)本涂片+ +兩份基質(zhì)液兩份基質(zhì)液( (加加L-L-酒石酸，不加酒石酸，不加 L-L-酒石酸酒石酸) ) ACP染色染色耐耐L-酒石酸酒石酸兩份（兩份（+）不耐不耐L-酒石酸酒石酸不加不加 L-酒

16、石酸（酒石酸（+）加加L-酒石酸（）酒石酸（）多毛細(xì)胞白血病多毛細(xì)胞白血病慢性淋巴細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病白血病抗酒石酸酸性磷抗酒石酸酸性磷酸酶染色酸酶染色酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色多毛細(xì)胞白血病多毛細(xì)胞白血病 抗抗L-酒石酸酒石酸ACP陽性陽性2.鑒別戈謝鑒別戈謝(Gaucher)細(xì)胞和尼曼細(xì)胞和尼曼-匹匹 克克(Niemann-Picks)細(xì)胞：細(xì)胞：前者（前者（+） 后者（）后者（）3.鑒別鑒別T淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞：前者（前者（+） 后者（）后者（） s cell四種常見急性白血病的細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果四種常見急性白血病的細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果項(xiàng)目項(xiàng)目 M3 M1/M2 M5

17、 ALLPOX 強(qiáng)陽性強(qiáng)陽性 陽性陽性/陰性陰性 弱陽性弱陽性/陰性陰性 陰性陰性 NAS-DCE 強(qiáng)陽性強(qiáng)陽性 陽性陽性/陰性陰性 多陰性多陰性 陰性陰性-NAE 強(qiáng)陽性強(qiáng)陽性 陰性陰性/弱陽性弱陽性 陽至強(qiáng)陽性陽至強(qiáng)陽性 陰性陰性/陽性陽性-NAE+NaF 不抑制不抑制 不抑制不抑制 抑制抑制 不抑制不抑制-NBE 陰性陰性 陰性陰性 陽性陽性 陰性陰性-NBE+NaF 抑制抑制 急非淋急非淋 脂酶染色脂酶染色NAP：類白與慢粒、感染類型、再障與類白與慢粒、感染類型、再障與 PNH、慢粒分期；、慢粒分期；ACP：毛白、毛白、T細(xì)胞細(xì)胞/B細(xì)胞、脂代謝障礙；細(xì)胞、脂代謝障礙；PAS：巨幼貧與巨幼貧與MDS-RA、紅白血?。?、紅白血?。昏F染色：鐵染色：缺鐵貧、鐵粒幼貧、缺鐵貧、鐵粒幼貧、MDS-RAS。急淋急淋POX急性白血病急性白血病n掌握細(xì)胞化學(xué)染色臨床應(yīng)用掌握細(xì)胞化學(xué)染色臨床應(yīng)用n掌握各種細(xì)胞化學(xué)染色的原理及臨床