1、Th物素酶檢測(cè)在新Th兒 及兒童保健中的應(yīng)用婦幼醫(yī)院管理案例主要內(nèi)容疾病簡(jiǎn)介發(fā)病機(jī)制流行病學(xué)臨床診查方法治療與預(yù)后篩查和保健意義疾病簡(jiǎn)介發(fā)病機(jī)制 流行病學(xué)臨床診查方法治療與預(yù)后 篩查和保健意義疾病簡(jiǎn)介什么是Th物素酶缺乏癥生物素酶缺乏癥（Biotinidase deficiency）是一種常染色體隱性遺傳 代謝病，是由于機(jī)體內(nèi)起 到釋放蛋白結(jié)合型生物素 的酶缺乏，從而體內(nèi)生物 素吸收與利用障礙，導(dǎo)致 患者體內(nèi)生物素水平顯著 下降。生物素缺乏會(huì)導(dǎo)致以皮膚、 黏膜和神經(jīng)系統(tǒng)損害為主 的癥狀。神經(jīng) 系統(tǒng)食欲 減退 疲乏免疫 降低黏膜皮膚威脅 生命生物素缺 乏癥狀常見(jiàn)臨床癥狀發(fā)育 遲緩皮疹脫發(fā)癲癇共濟(jì)

2、 失調(diào)結(jié)膜炎昏迷死亡生物素（Biotin）：又稱維生素H，是一種 水溶性的維生素。來(lái)源：大部分食物中攝取，少數(shù)在機(jī)體腸道 中的細(xì)菌體內(nèi)合成。功能：作為多種羧化酶的輔酶部分，參與體 內(nèi)糖類(lèi)、脂肪、蛋白質(zhì)的正常代謝過(guò)程。Th物素是一種維Th素發(fā)病機(jī)制Th物素酶缺陷的致病機(jī)理Th物素循環(huán)中結(jié)合型Th物素的釋放生物素 又稱維 生素H生物胞素蛋白水解 降解羧化酶全酶糖類(lèi) 糖異生賴氨酸 或肽羧化全酶 合成酶羧化酶類(lèi)蛋白結(jié)合型 生物素游離型生物素生物素酶生物素酶蛋白質(zhì)脂類(lèi)氨基酸代謝脂肪酸代謝Th物素酶功能缺乏 或缺陷，將導(dǎo)致游 離Th物素缺乏，出 現(xiàn)Th物素酶缺陷癥（Biotinidase deficien

3、cy，BTD 或BD，也稱遲發(fā)型 多羧化酶缺陷癥，late onset MCD）。多羧化酶缺陷癥（MCD）人體內(nèi)有5種依賴Th物素的羧化酶，即線粒體丙酮酸羧 化酶、乙酰輔酶A羧化酶、丙酰輔酶A羧化酶、-甲基 巴豆酰輔酶A羧化酶和Th物素酶。前4種羧化酶的合成是由羧化全酶合成酶催化的，因此 羧化全酶合成酶功能缺陷也會(huì)導(dǎo)致Th物素利用障礙，稱 為羧化全酶合成酶缺乏癥（也稱為早發(fā)型多羧化酶缺 陷癥，early onset MCD）。多數(shù)出Th后數(shù)天即發(fā)病。特征生物素酶缺乏癥羧化全酶合成酶缺乏癥病因不能水解及再利用生物素，以生 物胞素的形式從尿液流失羧化全酶合成酶對(duì)生物素的親和 力降低，影響羧化酶全酶

4、的合成發(fā)病年齡晚（青少年期，通常晚于3個(gè)月） 也有少數(shù)在新生兒期早（新生兒）皮膚癥狀全禿，小的全身性紅色皮疹斑禿，腸病性肢端皮炎， 魚(yú)鱗癬樣病變代謝紊亂代謝性酸中毒代謝性酸中毒尿有機(jī)酸3-羥基異戊酸及3-羥基丙酸升高3-羥基異戊酸、3-羥基丙酸及3-甲基巴豆酰甘氨酸顯著升高串聯(lián)質(zhì)譜分析異戊酰肉堿升高異戊酰肉堿升高生物素經(jīng)腎臟流失不存在存在酶活分析血漿中生物素酶活性白細(xì)胞中羧化酶酶活性基因驗(yàn)證突變分析突變分析區(qū)別于羧化全酶合成酶缺乏癥臨床診斷與篩查基因-蛋白質(zhì)-代謝物遺傳代謝病檢測(cè)方法基因突變蛋白功能缺陷代謝異常代謝物分析LC-MS/MS蛋白質(zhì)功能（酶學(xué)） 分析單基因檢測(cè)高通量基因捕獲測(cè)序氨基酸

5、、有機(jī) 酸、脂肪酸等基因-蛋白質(zhì)-代謝物基因，DNA蛋白質(zhì)代謝物實(shí)驗(yàn)室檢查代謝物分析酶學(xué)分析基因分析其他輔助檢查：酶學(xué)檢測(cè)是BTD早期篩查的金標(biāo)準(zhǔn) 目前，生物素酶缺乏癥新生兒篩 查項(xiàng)目已經(jīng)在美國(guó)和全球的其他 30多個(gè)國(guó)家（如德國(guó)、加拿大、 澳大利亞、日本、新西蘭。） 開(kāi)展，所用篩查方法都是干血濾 紙片的生物素酶學(xué)比色法，而且 該項(xiàng)方法在美國(guó)已經(jīng)建立了干血 濾紙片的生物素酶學(xué)比色法的診 斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。篩查診斷國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)（2010）流行病學(xué)調(diào)查生物素酶缺陷癥是一種常染 色體隱性遺傳病，以右圖為 例，當(dāng)父母均為攜帶致病基 因（雜合子，表型正常）時(shí)， 其子女有25%的可能性是 BTD患者，有50% 的可能

6、性 是攜帶者，25%的可能性是 純合正常個(gè)體。Th物素酶缺乏癥是常染色體隱性遺傳攜帶率 1:120發(fā)病率差異很大流行病學(xué)數(shù)據(jù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀最早出現(xiàn)70%出現(xiàn)癲癇等神癥狀50%發(fā)育滯后、視力衰退等2-5個(gè)月開(kāi)始出現(xiàn)癥狀1-10周歲發(fā)病少數(shù)可至青少年期/成年期30多個(gè)國(guó)家進(jìn)行新生兒篩查 診斷為生物素酶缺乏癥1: 6843基因突變攜帶率 1:123 （from NIH） 新篩項(xiàng)目排名第五位（美國(guó)）由文獻(xiàn)的結(jié)果可知，生物素補(bǔ)充能快速 的清除患者癥狀，具有較好的治療效果； 但涉及神經(jīng)病變的一些癥狀恢復(fù)較困難， 因此對(duì)生物素酶缺乏癥應(yīng)盡早進(jìn)行篩查； 從發(fā)病年齡范圍廣泛角度看，多數(shù)患者 在新生兒時(shí)期并無(wú)異

7、常，因此用色譜分 析的方法進(jìn)行新生兒代謝物篩查是不準(zhǔn) 確也是不科學(xué)的。此外，發(fā)病年齡跨度很大，潛在危害大BTD發(fā)病年齡跨度大國(guó)內(nèi)外的篩查現(xiàn)狀美 國(guó)加拿大澳大利亞歐洲日本臺(tái)灣墨西哥巴 西印 度中國(guó)？國(guó)際流行病學(xué)調(diào)查（1991年）1983年Wolf等報(bào)告了 首例生物素酶缺乏癥，1991年的統(tǒng)計(jì)結(jié)果 表明，在123個(gè)人中有1個(gè)是該病的雜合子個(gè) 體（攜帶者） 。2004年歐洲9個(gè)國(guó)家篩查結(jié)果統(tǒng)計(jì)BTD的發(fā)病率為1/47,486歐洲流行病學(xué)調(diào)查（2004）！均采用 酶學(xué)方法篩查美國(guó)流行病學(xué)調(diào)查（2009）美國(guó)流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示完 全缺乏型發(fā)病率是1/80,000，部 分缺乏型的發(fā)病率是1/30,000

8、;2009年美國(guó)明尼蘇達(dá)州統(tǒng)計(jì)2004-2008年期間新生兒生物素 酶缺乏癥的篩查結(jié)果，顯示發(fā) 病率為 1/8,540。結(jié)果均較早期 公布的全球的發(fā)病率高。且篩 查方法是酶學(xué)比色法。國(guó)內(nèi)尚無(wú)流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)目前我國(guó)尚未進(jìn)行生物素酶缺 乏癥的篩查，尚無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)報(bào)告， 只有一些臨床病例報(bào)告。治療與預(yù)后治療簡(jiǎn)單、便宜；預(yù)后明顯口服生物素：根據(jù)病因 及病情選擇劑量控制原發(fā)病，對(duì)癥治療補(bǔ)充多 種維生 素產(chǎn)前診斷糾正代 謝紊亂推薦劑量5-10 mg/d（也有5-40 mg/d之 說(shuō)），終生服用。針對(duì)未有癥狀表現(xiàn)的檢出者治療方案。生物素補(bǔ)充治療能有效的阻止生物素酶缺乏癥患者癥狀的出現(xiàn)，并改善已有部分癥狀 。完

9、全生物素酶缺乏癥患兒：口服生物素治療推薦劑量為510mg/d（國(guó)內(nèi)報(bào)道540mg/d2），青 春期及其后增加劑量至1015mg/d（因一些完全生物素酶缺乏癥患者女孩在以510mg/d的劑量 治療時(shí)，至青春期后出現(xiàn)脫發(fā)），并終生服用，未出現(xiàn)癥狀的完全生物素酶缺乏癥患兒：也需進(jìn)行生物素治療。部分生物素酶缺乏癥患者：推薦劑量為15mg/d和/或僅于出現(xiàn)代謝壓力時(shí)用藥。對(duì)已出現(xiàn)癥狀的患者，通過(guò)生物素治療后，生化異常及癲癇癥狀會(huì)繼皮膚異常得到改善后很快 得到改善。視神經(jīng)萎縮則無(wú)法恢復(fù)，特別是在癥狀出現(xiàn)至開(kāi)始用藥之間間隔時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)。對(duì)于重癥生物素酶缺乏癥患兒，如合并代謝性酸中毒或高氨血癥，尚需限制蛋白質(zhì)，

10、補(bǔ)充葡萄 糖，糾正酸中毒。Th物素酶缺乏癥基因+酶學(xué)篩查中科檢驗(yàn)為新Th兒及兒童健康保駕護(hù)航，本篩查適 用于新Th兒，也適用于12歲以下兒童。Th物素酶缺乏癥在新Th兒篩查中的重要性Wolf B., Mol Genet Metab, 2015酶學(xué)檢測(cè)是早期篩查的金標(biāo)準(zhǔn)樣本采集：抗凝血或 干血片檢測(cè)內(nèi)容：生物素酶 酶活性分析酶活力缺乏患者與健康人 差異顯著；攜帶者（雜合子）酶活力 是正常者的一半水平； 完全缺乏型與部分缺乏型 差異顯著。陽(yáng)性案例分析案例一：生物素酶缺乏癥完全缺乏型患者男，3歲5個(gè)月。皮膚持續(xù)性出現(xiàn)濕疹樣皮炎，外用 藥物療效欠佳；且患兒長(zhǎng)期頭發(fā)黃稀。并伴有逐步的脫發(fā)， 毛發(fā)生長(zhǎng)極為

11、緩慢。尿有機(jī)酸分析陰性，腦電圖異常.對(duì)其血液進(jìn)行生物素酶活力檢測(cè)，以及基因驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)BTD基因p.Q456H和 p.D444H突變，診斷患兒為生物素酶缺 乏癥。后期進(jìn)行生物素的補(bǔ)充治療，6個(gè)月后癥狀明顯改善。皮 疹消退，頭發(fā)生長(zhǎng)增多，體格發(fā)育正常。案例二：生物素酶缺乏癥完全缺乏型患者女，2歲3個(gè)月。出生后即出現(xiàn)反復(fù)的呼吸道系統(tǒng)感 染，且喂養(yǎng)困難，肌張力低下，頭發(fā)稀黃，逐漸出現(xiàn)斑禿， 尿有機(jī)酸分析異常（陽(yáng)性），腦電圖異常， 。對(duì)其血液進(jìn)行生物素酶活力檢測(cè)，以及基因驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)BTD基因p.E64K和和p.D444H突變，診斷患兒為生物素酶缺 乏癥。后期進(jìn)行生物素的補(bǔ)充治療，4個(gè)月后癥狀明顯改善。呼 吸

12、系統(tǒng)感染痊愈。隨訪一年尿液GC/MS分析正常，患兒右側(cè) 肢體仍有乏力，其他生化及體檢指標(biāo)均正常。案例三：生物素酶缺乏癥完全缺乏型，合并先天性眼發(fā)育不全 患者男，2月24天。毛發(fā)生長(zhǎng)極為緩慢，發(fā)育遲緩，伴有機(jī)張力增高，合并先天性眼發(fā)育不全，尿有機(jī)酸分析陽(yáng)性，腦電 圖異常，頭顱影像學(xué)異常。對(duì)其血液進(jìn)行生物素酶活力檢測(cè)，以及基因驗(yàn)證未發(fā)現(xiàn)BTD基因異常，診斷患兒為生物素酶缺乏癥。后期進(jìn)行生物素的補(bǔ)充治療，對(duì)癥治療和飲食指導(dǎo)。案例四：生物素酶缺乏癥完全缺乏型，合并甲基丙二酸血癥伴 同型半胱氨酸血癥患者男，5月16天。皮膚呈現(xiàn)濕疹樣皮炎，毛發(fā)生長(zhǎng)極為 緩慢，發(fā)育遲緩，并出現(xiàn)肌張力低下。合并甲基丙二酸血癥伴 同型半胱氨酸血癥