1、基本技能訓(xùn)練第一節(jié)常用儀器的使用方法技能訓(xùn)練分光光度計的使用1.標(biāo)準(zhǔn)色階的準(zhǔn)備1)分別準(zhǔn)備六只50mL比色管，洗滌、編號。2)分別向六只比色管中準(zhǔn)確移取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL 0.1mol/L的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液。3)定容。2.測定吸光度1)預(yù)熱儀器。第一節(jié)常用儀器的使用方法2)儀器調(diào)零。3)分別測定六只比色管中溶液的吸光度并記錄數(shù)據(jù)。3.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線1)以高錳酸鉀含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，構(gòu)建坐標(biāo)系。2)根據(jù)各個比色管的高錳酸鉀含量和測得的對應(yīng)吸光度描點。3)過原點畫一條直線，即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。第二節(jié)食品中細(xì)菌總數(shù)與大腸菌群的測定技能訓(xùn)練.eps1)掌握食品中細(xì)菌總數(shù)

2、與大腸菌群測定的規(guī)范操作。2)依據(jù)相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)，獨立、規(guī)范、熟練地完成全部相關(guān)檢測項目；能夠獨立計算試驗結(jié)果，在相關(guān)人員幫助下準(zhǔn)確描述試驗結(jié)果并編寫合格的試驗報告。儀器和試劑2.eps第二節(jié)食品中細(xì)菌總數(shù)與大腸菌群的測定表2-2-1序號技能訓(xùn)練項目名稱國家標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)1細(xì)菌總數(shù)的測定GB 4789220102大腸菌群的測定（大腸菌群MPN 計數(shù)法）GB 478932010第二節(jié)食品中細(xì)菌總數(shù)與大腸菌群的測定圖2-2-1菌落總數(shù)的檢驗程序技能訓(xùn)練1細(xì)菌總數(shù)的測定1.檢驗程序2.樣品的稀釋第二節(jié)食品中細(xì)菌總數(shù)與大腸菌群的測定1)固體和半固體樣品：稱取25g樣品置于盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水

3、的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，以800010000r/min轉(zhuǎn)速均質(zhì)12min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打12min，制成110的樣品勻液。2)液體樣品：用無菌吸管吸取25mL樣品置于盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成110的樣品勻液。3)用1mL無菌吸管或微量移液器吸取110樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注入盛有9mL稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面)，振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1100的樣品勻液。4)按上述操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。第二節(jié)食品中細(xì)菌總數(shù)

4、與大腸菌群的測定5)根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇2個或3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)，在進(jìn)行10倍遞增稀釋時，吸取1mL樣品勻液置于無菌平面皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平面皿。6)及時將1520mL冷卻至46的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于461恒溫水浴箱中保溫)傾注平面皿，并轉(zhuǎn)動平面皿使其混合均勻。3.培養(yǎng)4.菌落計數(shù)5.結(jié)果與報告(1)菌落總數(shù)的計算方法第二節(jié)食品中細(xì)菌總數(shù)與大腸菌群的測定1)若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，則計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，作為每克(毫升)樣品中的菌落總數(shù)。2)若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍

5、內(nèi)，則按式(2-2-1)計算。3)若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。4)若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。5)若所有稀釋度(包括液體樣品原液)的平板均無菌落生長，則以小于1 乘以最低稀釋倍數(shù)計算。第二節(jié)食品中細(xì)菌總數(shù)與大腸菌群的測定6)若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30300CFU之間，且其中一部分小于30CFU或大于300CFU，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。(2)菌落總數(shù)的報告1)當(dāng)菌落數(shù)小于100

6、CFU時，按“四舍五入”的原則修約，以整數(shù)報告。2)當(dāng)菌落數(shù)大于或等于100CFU時，第3 位數(shù)字采用“四舍五入”的原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面用0 代替位數(shù)；也可用10 的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”的原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。3)若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。4)若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。5)稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。第二節(jié)食品中細(xì)菌總數(shù)與大腸菌群的測定圖2-2-2大腸菌群MPN計數(shù)法檢驗程序1.檢驗程序2.樣品的稀釋第二節(jié)食品中細(xì)菌總數(shù)與大腸菌群的測定1)固體和半固體樣品：稱取25g樣品,放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，以800010000r/min的轉(zhuǎn)速均質(zhì)12min；或放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打12min，制成110的樣品勻液。2)液體樣品：用無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成110的樣品勻液。3)用1mL無菌吸管或微量移液器吸取110 樣品勻液1mL，沿管壁緩緩注入盛有9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面)，振搖試管或換用1 支1mL無菌吸管反復(fù)吹打，