1、脂聯(lián)素基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化關系的研究紹興文理學院：XXX指導老師：XXXXXXX第1頁，共21頁。一、研究背景二、研究目的三、研究方法四、可行性分析五、技術路線六、準備工作七、時間進度安排第2頁，共21頁。一、研究背景（1）1995 年 Scherer PE和Hu E分別獨立地在小鼠脂肪組織中發(fā)現(xiàn)了一種新的蛋白質，分別命名Acrp30和AdipoQ；1996 年 在人血漿內分離獲得人脂聯(lián)素（adiponectin），即明膠結合蛋白28（GBP28）；1999 年命名為脂聯(lián)素。第3頁，共21頁。 目前已有許多有關脂聯(lián)素基因的單核苷酸多態(tài)性 (single nucleotide polymor

2、phism, SNP)與動脈粥樣硬化的報道，但結果不盡一致。研究背景（2）第4頁，共21頁。Filippi等研究發(fā)現(xiàn)：脂聯(lián)素基因與早發(fā)冠心病顯著相關，在年輕的冠心病患者（50歲），脂聯(lián)素基因的單核苷酸多態(tài)性（+276GT）與冠心病有顯著的相關性 ,且攜帶有SNP+276GT的患者脂聯(lián)素水平明顯降低。Kim SH等研究發(fā)現(xiàn)：攜帶SNP+276GT與動脈粥樣硬化沒有明顯相關性，而攜帶SNP+45 T G基因型的患者有更高的動脈粥樣硬化風險。第5頁，共21頁。 脂聯(lián)素與胰島素抵抗的相關性 Menzaghi 等發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素基因45位和276位SNP 都與胰島素抵抗的一些特性有明顯的相關性 ，而由 兩個S

3、NP 組成的單倍體與胰島素抵抗的許多特性有 顯著的相關性：純合子個體表現(xiàn)為體重增加，收縮 壓和舒張壓升高，胰島素和空腹血糖水平上調而血 漿脂聯(lián)素水平則降低； 第6頁，共21頁。 而在意大利高加索人中也發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素基因SNP + 276 位G T 與高BMI 和高胰島素抵抗指數(shù)相關，也與血漿脂聯(lián)素水平有關，未發(fā)現(xiàn)SNP+45 TG與胰島素抵抗的相關性； 在法國高加索人中,則未發(fā)現(xiàn)這兩個SNPs 與2 型糖尿病和胰島素抵抗的相關性。第7頁，共21頁。研究背景（3）第8頁，共21頁。 這些研究表明脂聯(lián)素是動脈粥樣硬化的保護因素，但其抑制動脈粥樣硬化的具體機理仍有待進一步研究。研究背景（4）第9頁，共2

4、1頁。二、研究目的1）了解臺州地區(qū)脂聯(lián)素基因的多態(tài)性情況；2）研究脂聯(lián)素基因的不同多態(tài)性位點與動脈粥樣硬化的關系；3）尋找與動脈粥樣硬化密切相關的脂聯(lián)素基因多態(tài)性位點。第10頁，共21頁。三、研究方法 （1）研究對象 病患組：100例確診動脈粥樣硬化的患者，整理詳細病史資料（包括患者年齡，性別，身高，體重，是否吸煙，血壓以及臨床表現(xiàn)等） 對照組：100例健康對照組人群，排除肝、腎、甲狀腺病變和糖尿病等（年齡、性別等與動脈粥樣硬化患者匹配）第11頁，共21頁。 （2）冠狀動脈狹窄程度以及頸動脈狹窄程度評估 應用數(shù)字血管造影機（DSA）對動脈粥樣硬化患者進行冠狀動脈造影，觀測血管病變的數(shù)量、部位，

5、病變的程度、性質等，判斷患者冠狀動脈粥樣硬化狹窄程度；應用彩色多普勒超聲對頸動脈粥樣硬化狹窄程度進行評估。第12頁，共21頁。 （3）血清血脂水平、血糖水平、心肌酶水平測定 1）對所有研究對象采集其促凝血4ml； 2）高速離心促凝血標本，分離血清； 3）用雅培全自動生化分析儀及其配套試劑測定血脂水平、血糖以及心肌酶水平；第13頁，共21頁。 （4）脂聯(lián)素基因多態(tài)性的判讀 1）采集所有研究對象的EDTA-K2抗凝血5ml； 2）對EDTA-K2抗凝血，利用DNA提取試劑盒，提取全血DNA； 3）利用設計的引物進行PCR擴增，再針對特異位點如SNP45位點、SNP276位點、SNP11377位點和

6、SNP11391位點進行酶切，分析脂聯(lián)素基因的多態(tài)性。第14頁，共21頁。 （5）統(tǒng)計學分析 采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件，結合患者臨床資料，影像學資料、超聲資料以及脂聯(lián)素基因不同多態(tài)性位點情況綜合分析脂聯(lián)素基因多態(tài)性與動脈粥樣硬化的關系，并尋找與動脈粥樣硬化密切相關的脂聯(lián)素基因多態(tài)性位點。第15頁，共21頁。四、可行性分析我們與臨床科室有密切聯(lián)系，可收集確診動脈粥樣硬化病人的詳細病史資料我院有優(yōu)秀的心血管內科醫(yī)生以及影像科醫(yī)生、超聲科醫(yī)生，可通過DSA、彩色多普勒超聲對動脈粥樣硬化患者的冠狀動脈狹窄程度以及頸動脈的狹窄程度進行評估檢驗科有充足的實驗設備與優(yōu)秀的人才資源第16頁，共21頁。五、

7、技術路線確診AS患者對照組臨床資料收集外周血采集冠狀動脈造影彩色多普勒超聲統(tǒng)計學分析促凝血4ml高速離心留取血清生化指標測定EDTA-K2抗凝血5ml提取外周血DNAPCR擴增PCR產(chǎn)物純化酶切脂聯(lián)素基因多態(tài)性分析第17頁，共21頁。六、準備工作收集了80例動脈粥樣硬化病人EDTA-K2抗凝血和促凝血（-80冷藏），且已經(jīng)整理其一部分病史資料，包括患者的年齡、性別、肝腎功能檢查、心肌酶檢查、血脂檢查等各項生化檢測資料；給患者做了DSA造影，彩色多普勒超聲檢測，根據(jù)這些檢測結果可判斷患者冠狀動脈粥樣硬化和頸動脈粥樣硬化狹窄程度。第18頁，共21頁。七、時間進度安排 2009.9-2009.11 完成標本收集工作，并收集整理動脈粥樣硬化患者的詳細病史資料完成血清血糖、血脂、心肌酶等的測定提取全血DNA，完成引物設計第19頁，共21頁。 2009.12-2