1、關(guān)于實驗四細(xì)菌質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移第一張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月一：目的要求了解在自然條件下微生物遺傳信息傳遞的方式；掌握細(xì)菌質(zhì)粒轉(zhuǎn)移的原理和流程。 第二張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月二：基本原理在質(zhì)粒轉(zhuǎn)移過程中，供體菌與受體菌細(xì)胞通過結(jié)合作用緊密接觸，質(zhì)粒從供體細(xì)胞向受體轉(zhuǎn)移，同時進(jìn)行質(zhì)粒復(fù)制，這就是結(jié)合轉(zhuǎn)移的過程。按能否自主轉(zhuǎn)移，將天然存在的質(zhì)粒分為兩大類。 第三張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第四張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月1轉(zhuǎn)移型質(zhì)粒：多為低拷貝的大質(zhì)粒，含有完整的轉(zhuǎn)移操縱子基因（tra）和轉(zhuǎn)移起始位點。能在同種或親緣關(guān)系近的菌體細(xì)胞間進(jìn)行轉(zhuǎn)移。例

2、如： 大腸桿菌：F因子、R1、R100、R6K、RP4 天藍(lán)色鏈霉菌：致育性因子pSCP1、pSCP22非轉(zhuǎn)移型質(zhì)粒：多為高拷貝的小質(zhì)粒，如大腸桿菌的ColE1、RSF1010等。由于缺少轉(zhuǎn)移基因（tra），不能自主轉(zhuǎn)移，但由于含有與F質(zhì)粒類似的bom（或nic）位點或誘動基因mob（mobilization），因而能被帶有tra基因的轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒誘動而發(fā)生轉(zhuǎn)移。 第五張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第六張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月第七張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月轉(zhuǎn)移子的篩選篩選培養(yǎng)基為：基本培養(yǎng)基+抗生素； 供體和輔助大腸桿菌均營養(yǎng)缺陷型，不能在基本培養(yǎng)基上生長

3、； 未轉(zhuǎn)化成功的受體菌不能在有抗生素的平板上生長。第八張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月三：實驗菌株供體菌：E.coli DH5(pTR102) (TcR)，含有 mob基因 ；受體菌: 紫云英根瘤菌 ( TcS) ；輔助菌: E. coli MM294 (pPK2073)（SpeR），含有tra基因。 第九張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月四：實驗內(nèi)容 準(zhǔn)備將受體、供體、輔助菌分別培養(yǎng)到對數(shù)期： 供體菌：E.coli DH5(pTR102) (TcR)，LB + Tc 20g /ml，37震蕩培養(yǎng)1夜； 受體菌: Sinorhizobium fredii ( TcS)， TY,

4、28震蕩培養(yǎng)2天； 輔助菌: E. coli MM294 (pPK2073)（SpeR），LB + Spe 50 g/ml 37震蕩培養(yǎng)1夜第十張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月用可調(diào)定量移液器吸取供體、輔助菌各 0.4ml，吸受體菌0.6ml，都加入同一eppdorf管內(nèi)（每個同學(xué)做1管），放入離心機(jī)內(nèi)，10000轉(zhuǎn)/min 離心1分鐘。倒上清，向沉淀加 1ml 的 TY液體，用 tip上下抽吸，洗滌菌體，再10000轉(zhuǎn)/min離心1分鐘，倒上清，留100l左右用于懸浮菌體。倒TY平板，然后用鑷子取滅菌濾紙片貼于已準(zhǔn)備好的TY平板上（每2個同學(xué)1片，2-3片/平板）。用200l的 ti

5、p 抽吸eppdorf管內(nèi)沉淀的菌體，打散成濃菌液，將之加到濾紙片中央（切勿傾斜平板，以免菌液流出濾紙片以外）,吹干。28培養(yǎng)2天。 操作步驟（第一天） 第十一張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月倒SM平板將基本培養(yǎng)基（SM）溶化，加千分之一的維生素混合液，然后加相應(yīng)量的四環(huán)素（15U/ml），每2人1皿。另準(zhǔn)備1瓶基本培養(yǎng)基，不加抗生素，用于對照。將倒好的平板用報紙包好后放入4冰箱，備用。（注：四環(huán)素在強(qiáng)光下易分解）第十二張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月向滅菌青霉素瓶中加3ml無菌水，將已培養(yǎng)的TY平板上的濾紙片用無菌鑷子放入水中，在震蕩混勻器上洗菌體，充分打散。向1ml的ep管加 0.9mL無菌水，取0.1ml菌液，混勻。 吸取 200L涂皿。少數(shù)同學(xué)另取稀釋液，涂1板不加Tc的SM做對照 。 平板放28 培養(yǎng)4-6天后看結(jié)果。操作步驟（第三天） 第十三張，PPT共十五頁，創(chuàng)作于2022年6月五：實驗報告內(nèi)容轉(zhuǎn)移頻率=SM+Tc平板的單菌落數(shù)/純SM