1、石家莊農(nóng)業(yè)學(xué)校 張占峰 圓環(huán)病毒病 斷奶仔豬多系統(tǒng)消耗綜合征(postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)是一種新的豬傳染病,主要侵害6-8周齡仔豬，引起淋巴系統(tǒng)疾病、漸進(jìn)性體重下降、呼吸道癥狀及黃疸，造成患豬免疫機(jī)能下降、生產(chǎn)性能降低，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了很大的經(jīng)濟(jì)損失。該病1991年首次報(bào)道于加拿大，而后美國(guó)、法國(guó)、西班牙、意大利及墨西哥等美洲和歐洲國(guó)家相繼報(bào)道此病的發(fā)生。我國(guó)中監(jiān)所郎洪武等證實(shí)國(guó)內(nèi)存在此病。最近研究表明PMWS的發(fā)生與一種豬圓環(huán)病毒（porcine circovirus，PCV）的感染有關(guān)。 （一） 概況斷奶仔豬多系統(tǒng)消耗綜合

2、癥（二 ）多病原疾病PCV-2是PMWS的主要病因，但并不是唯一的病原。PMWS很可能是PCV和PPV、PRRSV等病原混合感染的結(jié)果。Alian等（1999）、Kennedy等（2000）、Krakowka等（2000）利用PPV和PCV-2共同感染未經(jīng)母乳哺育的仔豬或悉生仔豬，成功復(fù)制出典型的PMWS癥狀及病變，但單獨(dú)使用PCV-2實(shí)驗(yàn)感染，只能產(chǎn)生輕微的癥狀。同時(shí)也有學(xué)者將PMWS病死豬組織懸液感染仔豬，仔豬出現(xiàn)典型PMWS癥狀，而且可從病變組織中分享出PCV-2和PPV，血清中可檢測(cè)到兩者的抗體。因此可以認(rèn)為PPV在PMWS疾病發(fā)生中起著重要作用，或者說(shuō)PMWS就是兩者共同感染的結(jié)果。

3、另外，PRRSV可以從一些已感染或正在感染PMWS的豬體內(nèi)分離到。因此，有人認(rèn)為PMWS是多病原疾病，可能是PCV與PRRSV、PPV等多種病原混合感染的結(jié)果。 （三）PCV致病性及危害1、PCV可在豬源細(xì)胞培養(yǎng)物上繁殖，不產(chǎn)生CPE，易被忽視，因此對(duì)豬源細(xì)胞疫苗或診斷抗原生產(chǎn)造成潛在的危害。2、PCV-2多數(shù)情況下引起亞臨床感染，但如與其他病原如PPV等混合感染或環(huán)境應(yīng)激情況下則可直接發(fā)生PMWS。3、PCV-2的靶細(xì)胞 為淋巴細(xì)胞，主要是巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞，病毒感染后引起細(xì)胞凋亡，使機(jī)體免疫抵抗力下降，從而繼發(fā)感染其他病原體，包括PRRSV、PPV、PRV和豬鏈球菌等，引起更嚴(yán)重的疾病。（四

4、）該病主要表現(xiàn)：侵害：淋巴系統(tǒng)、呼吸道、黃疸 日齡：6-8周齡仔豬 影響：免疫機(jī)能下降、生產(chǎn)性能降低、 漸進(jìn)性體重下降 （五）病原體豬圓環(huán)病毒 2型（PCV-2） 圓環(huán)病毒有兩種血清型:PCV-1和PCV-2 PCV-1基因組全長(zhǎng)1759bp；PCV-2為1768bp。兩者的基因組核苷酸序序列同源性僅為6875%。 PCV-1、PCV-2都主要包含ORF1、ORF2兩個(gè)閱讀框。ORF1編碼與病毒復(fù)制相關(guān)的Rep蛋白，ORF編碼病毒的核衣殼蛋白，具有良好的免疫原性。PCV-1無(wú)致病性，廣泛存在豬源細(xì)胞及正常豬體內(nèi)各組織；PCV-2現(xiàn)證明與斷奶仔豬多系統(tǒng)消耗綜合癥（PMWS）、豬皮炎腎病綜合癥（P

5、DNS）及A2型先天性綜合征相關(guān)。PCV-2基因組及編碼蛋白示意圖 PCV-1與PCV-2PCV-1：最初是從豬腎傳代細(xì)胞系PK-15分離到，動(dòng)物感染試驗(yàn)表明此PCV無(wú)致病性。該病毒可長(zhǎng)期持續(xù)污染PK-15，不產(chǎn)生細(xì)胞病變 。PCV-2：PCV-2是PMWS的主要病因（但不是唯一的病原）。二、PCV-2毒株的分離鑒定病料處理（將PCR擴(kuò)增陽(yáng)性的組織病料用氯仿抽提去除有曩膜的病毒，如PRRSV）接種細(xì)胞PK-15盲傳10代（300mmol/L的D-氨基葡萄糖處理）間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)及電鏡觀察病毒顆粒接種病料的PK-15的IIF結(jié)果未接種病料的PK-15的IIF結(jié)果病毒粒子電鏡照片本實(shí)驗(yàn)室共分離了5

6、株P(guān)CV-2，根據(jù)其分離地將其分別命名為shanghai PCV、jiangsu PCV、dengta PCV、qingdao PCV及xiaosan PCV。 超薄切片觀察結(jié)果（30，000 ）三 復(fù)合PCR方法的建立1、引物設(shè)計(jì)引物1（為PCV-1、2共同序列）： 5-CCGCGGTGGCTGAACTT-3（PCV-1 nt478-496；PCV-2 nt491-519）； 引物2（PCV-1特異序列）： 5-CTCGGCTATGCGCTCCAAAATG-3（PCV-1 nt1108-1129）； 引物3（PCV-2特異序列）： 5-ACCCCCGCCACGTACC-3（PCV-2 nt1

7、627-1644） 引物1、2擴(kuò)增的片段長(zhǎng)度為652bp（ PCV-1 ），引物1、3之間的跨幅為1154bp（PCV-2）。 2、復(fù)合PCR方法的初步用 1）對(duì)多株豬源傳代細(xì)胞（包括4株P(guān)K-15及1株ST細(xì)胞）進(jìn)行了PCV檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)所有細(xì)胞均污染有PCV-1，其中一株還擴(kuò)增出了PCV-2基因片段；M：DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) DL-20001：PK-15（a）2：PK-15（b）3：PK-15(c)4：PK-15(d)5：ST1 2 3 4 5 M 1000bp 750bp2000bp 500bp1 2 3 4 5 6 7 8 M9 10 11 12 13 14 15 16 M2)對(duì)38個(gè)病例(病

8、豬表現(xiàn)為消瘦、呼吸困難及淋巴結(jié)腫大等)的組織（取肺組織）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，9個(gè)病例同時(shí)存在PCV兩種血清型病毒感染，23個(gè)病例感染有PCV-2。部分電泳結(jié)果見下圖。圖中樣品1，3-8，10，11，13，15，16均為PCV-2陽(yáng)性。2，9，14樣品PCV-1、PCV2均為陽(yáng)性。12為PCV-1陽(yáng)性。Table1.1 The PCR results of tissue samplesNumber of positive tissue samplesPositive rate of tissue samples(%)Origin of tissuesamplesNumber of tiss

9、uesamples (case)PCV2+PCV1+PCV1、2+PCV2+PCV1+PCV1、2+上海1132227.318.118.1江蘇2031415520山東2660223.107.7福建43000000浙江27133548.111.119.2總計(jì)1272561319.64.710 上海、江蘇、山東及浙江四個(gè)省市豬群中普遍存在PCV感染，其中PCV2感染最為普遍，感染率分別達(dá)27.3%、15%、23.1%和48.1%。另外也存在一定程度的PCV1和PCV2的混合感染，感染率分別為18.1%、20%、7.7%及19.2%。3）病料檢測(cè)結(jié)果四 分離PCV毒株全基因組序列分析 測(cè)序結(jié)果表明，

10、5個(gè)PCV2分離株基因組全長(zhǎng)均為1768bp，與以往資料報(bào)道的完全一致。 DNAstar軟件分析顯示， 本實(shí)驗(yàn)的5個(gè)毒株內(nèi)部同源性為95.5%100%，其中ShanghaiPCV及Zhejiang1PCV基因組序列完全相同，而JiangsuPCV與ShandongPCV、Zhejiang2PCV兩毒株差異相對(duì)較大，同源性僅為95.5%。所選用的2株P(guān)CV-1毒株AF012107、AF071879之間同源性很高，但它們與PCV-2毒株的同源性僅為 76.5-78.3%4、PCV毒株的系統(tǒng)發(fā)生進(jìn)化樹ShanghaiPCV、Zhejiang1PCV及JiangsuPCV與美國(guó)分離株AF264039親

11、緣關(guān)系很近。ShandongPCV、Zhejiang2PCV與德國(guó)分離株AF201311親緣關(guān)系密切。由此說(shuō)明，我國(guó)的PCV2分離株來(lái)源廣泛。percentldentityPCV毒株全基因組的同源性比較 國(guó)內(nèi)不同PCV2毒株基因組序列存在明顯差異，從而為我國(guó)建立更有針對(duì)性的分子生物學(xué)診斷檢測(cè)方法提供了依據(jù)。 華東地區(qū)PCV2分離株來(lái)源較為廣泛。 ORF2核苷酸序列變異顯著。隨著PCV2 ORF2的不斷變異可能會(huì)出現(xiàn)新的PCV致病型和血清型。 PCV2 ORF2編碼蛋白存在2個(gè)特異的抗原區(qū)域，這為建立PCV2特異的檢測(cè)方法提供了理論依據(jù)。 結(jié) 論P(yáng)CV的體外培養(yǎng)PCV體外培養(yǎng)特性與豬細(xì)小病毒（P

12、PV）相似，適于在具有旺盛增殖能力并處于有絲分裂過(guò)程中的細(xì)胞上復(fù)制，并且PCV的復(fù)制依賴細(xì)胞周期S期表達(dá)的細(xì)胞蛋白。Tischer等對(duì)豬腎傳代細(xì)胞系PK-15 PCV培養(yǎng)物用a-氨基葡萄糖處理后可以促進(jìn)病毒DNA進(jìn)入細(xì)胞核，從而提高病毒復(fù)制，試驗(yàn)證明可使PCV抗原陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)增加30%。Alian等證明PCV在源于豬骨髓、外周血液、肺洗出物和淋巴結(jié)的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中復(fù)制。牛外周血液來(lái)源的單核細(xì)胞也對(duì)PCV感染敏感。另有報(bào)道，PCV也可在豬睪丸傳代細(xì)胞系（ST）及vero 細(xì)胞上生長(zhǎng)。但遺憾的是，迄今為止，PCV在所有細(xì)胞上培養(yǎng)時(shí)均不產(chǎn)生細(xì)胞病變，病毒檢測(cè)需借助于免疫熒光試驗(yàn)、免疫組化試驗(yàn)、

13、核酸探針及PCR等方法，比較麻煩。PCV流行病學(xué)PMWS主要侵害6-8周齡的仔豬，一般4-10%的豬發(fā)病，這些病豬散在于正常的健康豬中，病死率高達(dá)50-100%。成年豬一般為隱性感染，不表現(xiàn)任何癥狀和病變。此病的一個(gè)主要特點(diǎn)是仔豬淋巴系統(tǒng)受損，出現(xiàn)免疫缺隱，因此常常繼發(fā)感染一些別的疾病，如地方性豬肺疫、多殺性巴氏桿菌及鏈球菌感染，從而使疾病癥狀復(fù)雜化，難以確定疾病的真正病原。另一特點(diǎn)是發(fā)展緩慢，豬群的一次發(fā)病可持續(xù)12-18月之久，所以豬場(chǎng)所受的經(jīng)濟(jì)損失是很明顯的。PCV感染普遍血清學(xué)調(diào)查表明,北美和歐洲的豬群中PCV抗體非常普遍,且抗體主要是針對(duì)PCV-2.如在德國(guó)屠宰場(chǎng)面豬血清中,85%有

14、PCV抗體；在美國(guó)進(jìn)行的一次調(diào)查中53%的樣品有抗體；在英國(guó)隨機(jī)采集的豬血清樣品中86%有PCV抗體；在德國(guó)的一次調(diào)查中，用ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)幾乎所有豬群都感染PCV。但令人費(fèi)解的是，PCV感染如此普遍，廁真正導(dǎo)致PMWS或其他不關(guān)疾病的不多，大多為隱性感染或亞臨床感染。這部分原因可能是因?yàn)樽胸i需感染一定數(shù)量的PCV-2才能出現(xiàn)臨床癥狀及病變。環(huán)境因素十分重要現(xiàn)已清楚，PMWS病豬可通過(guò)糞便和鼻分泌物排出PCV，引起病毒在不同豬個(gè)體之間進(jìn)行傳播。這種病毒在不同豬群之間的傳播方式則尚不為所知；豬在不同豬群之間的移動(dòng)很可能是主要的傳播途徑。由于這一病毒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，非常能耐受不良環(huán)境，所以也可能通過(guò)衣

15、服和設(shè)備進(jìn)行傳播。鳥類、嚙齒動(dòng)物如鼠等帶毒，可能會(huì)引起傳播。有試驗(yàn)表明，外觀正常的公豬精液中可檢測(cè)到PCV，因此可能存在PMWS病的垂直傳播?；烊骸?yīng)激、高密度飼養(yǎng)等因素可誘發(fā)仔豬發(fā)病。臨床癥狀和病理變化該病的主要癥狀為進(jìn)行性消瘦、呼吸困難、皮膚蒼白或黃疸、共濟(jì)失調(diào)及突然死亡。剖檢后可見，病豬主要發(fā)年淋巴結(jié)病、間質(zhì)性肺炎，其它大部分組織也存在病變，包括肝、腎、胰、皮膚和大腦。淋巴結(jié)（包括腹股溝、氣管支氣管及腸系膜等處）明顯腫大，嚴(yán)重時(shí)體積可為正常的3倍，縱切面呈均勻白色；肺臟無(wú)塌陷，呈橡皮樣水腫；其他組織都有不同程度的炎癥。顯微病變，肺部明顯多灶性閉塞性支氣管肺炎，肺細(xì)胞增生明顯，肺泡內(nèi)含有中

16、性白細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及纖維性環(huán)死碎屑；在集合淋巴結(jié)、扁桃體及脾臟等組織淋巴濾泡壞死，淋巴細(xì)胞減少及巨噬細(xì)胞、多核巨細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞內(nèi)有多個(gè)球形嗜堿性或兩染性胞漿內(nèi)包涵體，電鏡觀察可見到包涵體由許多直徑約為20nm的電子致密顆粒組成，呈晶格狀排列。腸道病變主要是單核細(xì)胞浸潤(rùn)和小腸固有層形成合胞體。發(fā)病機(jī)理PMWS的發(fā)病機(jī)理至今尚不清楚。Rosell等從2個(gè)慢性病例的病變發(fā)現(xiàn)，PCV2從豬的鼻、口、侵入體內(nèi)，在扁桃體、局部淋巴結(jié)增殖后，向其它淋巴組織、肺、肝、腎擴(kuò)散。受慢性感染的影響，誘發(fā)免疫抑制、腸炎、間質(zhì)性腎炎及肝損傷。Shibahara等研究表明PCV感染可誘導(dǎo)B細(xì)胞凋亡，從而導(dǎo)致機(jī)

17、體免疫功能下降。從這些結(jié)果可以看出PCV感染可能干擾正常的免疫功能，從而致使機(jī)體抵抗力下降，導(dǎo)致繼發(fā)感染產(chǎn)生PMWS。Krakowka等將PCV2感染悉生仔豬后，注射弗氏不完全佐劑乳化的鑰孔戚血藍(lán)蛋白，可使PCV感染仔豬出現(xiàn)明顯的PMWS癥及病變，而未鑰孔戚血藍(lán)蛋白注射的對(duì)照組不發(fā)生PMWS。因此，目前認(rèn)為免疫刺激在PMWS的發(fā)病過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用。綜上所述，PMWS的發(fā)生原因比較復(fù)雜，不僅與感染PCV2有直接關(guān)系，而且可能與其它病原如PPV、PRRSV及豬鏈球菌等的感染或免疫應(yīng)激密切相關(guān)。防 制此病沒有特異性的控制措施，也無(wú)有效的治療方法。目前無(wú)理想的疫苗（主要是病毒滴度低），加上此病程持久對(duì)仔豬造成免疫缺陷。因此，要采取對(duì)癥治療。抗生注射和良好的管理，有助于解決繼發(fā)感染或并發(fā)感染的問題，但對(duì)此病本身無(wú)效。本病的疫苗正處于試驗(yàn)階段。所以目前要控制此病只能依靠加強(qiáng)日常管理，目標(biāo)是減輕疾病的壓力以及此病的