1、選修一背默知識點大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1.大腸桿菌的擴大培養(yǎng)用LB液體培養(yǎng)液擴大培養(yǎng)，再用LB固體培基分離，形成一個個單獨的菌落。LB液體培養(yǎng)基是細菌通用培養(yǎng)液；MS培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)通用培養(yǎng)基2.細菌分離方法比較劃線分離法-方法簡單；涂布分離法單菌落易分離，操作復雜3.滅菌操作滅菌操作的首要條件是各種器皿必須是無菌的各種培養(yǎng)基必須是無菌4.培養(yǎng)和分離步驟培養(yǎng)基滅菌倒平板培養(yǎng)液培養(yǎng)劃線分離培養(yǎng)保存5.滅菌與消毒滅菌消毒常用方法高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌、紫外燈酒精、氯氣、煮沸消毒條件使用強烈的理化因素使用較溫和的理化方法結(jié)果殺死物體內(nèi)外所有的微生物殺死物體表面或內(nèi)部部分微生物適用范圍培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基

2、、接種環(huán)、玻璃刮刀外植體、操作空間、實驗者的手等分離以尿素為唯一氮源的微生物1.實驗原理（1）利用尿素的細菌含有脲酶，通過降解尿素作為其生長的氮源，其反應式如下：（NH2）2C=O+H2O-脲酶2NH3+CO2（2）利用指示劑（酚紅）顏色變化檢驗脲酶所催化的反應，若酚紅由紅黃色變?yōu)榧t色，證明尿素以被脲酶水解產(chǎn)生NH32實驗步驟制備LB全素培養(yǎng)基和以尿素為唯一氮源固體培養(yǎng)基制備細菌土壤懸液，并稀釋至10-3、10-4、10-5、10-6涂布法分離培養(yǎng)保存注意：在恒溫箱中培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿要倒置防止凝結(jié)的蒸餾水滴到培養(yǎng)基上3預測結(jié)果：LB全素固體培養(yǎng)基上菌落多而雜；以尿素為唯一氮源固體培養(yǎng)基菌落少而純

3、；一定時間內(nèi)，菌落周圍出現(xiàn)紅色區(qū)域；用濃度為10-4和10-5土壤稀釋液接種，10-5土壤稀釋液更容易形成單菌落。果汁中的果膠和果膠酶1.果膠是植物細胞壁的主要成分之一，由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲脂組成。果膠主要作用是將細胞粘合在一起，去掉果膠，植物組織會變松散。2.果膠不溶于乙醇，這是鑒別果膠的一種簡易方法。3.果膠酶和果膠甲脂酶可水解果膠，與制取果汁有關。4.黑曲霉、蘋果青霉等微生物可用于生產(chǎn)果膠。果膠酶將果膠分解成可溶性分子，是渾濁的果汁變沉請，是出汁率提高。5.實驗步驟：第一步制作山楂勻漿第二步A燒杯+5g勻漿+10ml黑曲霉提取液B燒杯+5g勻漿+10ml無菌水間歇攪拌20-30mi

4、n第三步試管1試管2試管3試管44mlA燒杯混合液4mlA燒杯混合液4mlB燒杯混合液4mlB燒杯混合液沸水浴不加熱沸水浴不加熱上清夜上清夜上清夜上清夜現(xiàn)象最澄清澄清較渾濁渾濁第四步加入4ml95%乙醇現(xiàn)象沉淀物最少沉淀物較少沉淀物較多沉淀物最多四、a-淀粉酶的固化及淀粉水解作用的檢測1.固定化酶：形成：將水溶性的酶用物理或化學的方法固定在某種介質(zhì)上，使之為不溶于水而又有酶活性的制劑；固化方法：吸附法、吸附法、交聯(lián)法、包埋法、共價偶連法等固定化酶方法a-淀粉酶固化2. a-淀粉酶水解作用的檢測a-淀粉酶水解作用的檢測原理：將a-淀粉酶固定在石英砂上，一定濃度的淀粉溶液流經(jīng)固定化酶柱，可使水解成

5、糊精。用淀粉指示劑KI-I2液測試，流出物呈紅色，表明水解產(chǎn)物有糊精生成。淀粉-a-淀粉酶-糊精-淀粉酶-麥芽糖-a-淀粉酶-葡萄糖遇I2顯藍色 遇I2顯紅色 遇I2不顯藍色將使用過的固定化酶柱用蒸餾水洗滌干凈，放置在4度冰箱中保存，可重復使用。五、果酒及果醋的制作1.實驗原料：葡萄或其他果汁2.實驗原理果酒：葡萄糖酒是酵母菌利用葡萄糖進行酒精發(fā)酵的產(chǎn)物。酵母菌只有在無氧條件才能進行酒精發(fā)酵，即將葡萄糖氧化成酒精，而且當培養(yǎng)液中酒精濃度超過16%時，酵母菌就會死亡。酒精發(fā)酵反應式：C6H12O62C2H5OH+2CO2+少量能量。用葡萄制作的葡萄酒不含糖，酒精含量也低。用果汁制作的果酒含糖量高

6、，酒精含量也較高。果醋：醋化醋桿菌在有氧條件下才能將酒精氧化為醋酸，醋桿菌所產(chǎn)生的醋酸可使培養(yǎng)液中醋酸的含量高達13%。醋酸發(fā)酵反應式：C2H5OH +O2CH3COOH+H5O+少量能量果酒制作果醋制作裝置圖呼吸方式無氧呼吸有氧呼吸菌種酵母菌醋化醋桿菌用瓶簡易制作時要加蓋，定時擰松不加蓋，瓶口蓋紗布六、泡菜的腌制和亞硝酸鹽的測定1.菌種：作用泡菜的腌制起主要的是假絲酵母和乳酸菌。2.實驗原理：在無氧條件下，微生物利用菜中的糖和其他營養(yǎng)物質(zhì)進行發(fā)酵，乳酸菌將糖類轉(zhuǎn)化為乳酸，這時需氧菌被殺死；當有機酸增加到一定程度時乳酸菌被殺死，出現(xiàn)酵母和霉菌，并逐漸產(chǎn)生亞硝酸。加白酒的作用是抑制雜菌生長，也是

7、一種調(diào)味劑，增加香醇感。 泡菜壇好壞是關鍵實驗步驟（1）各種菜洗凈并切成34cm長的小塊（2）將泡菜壇洗凈，并用熱水洗壇內(nèi)壁兩次。（3）將各種蔬菜、鹽水、糖及調(diào)味品放入壇，混合均勻。如果希望發(fā)酵快些，可將蔬菜在開水中浸1分鐘后入壇，再加上一些白酒。（4）將壇口用水封好，防止外界空氣進入。（5）泡菜發(fā)酵3. 亞硝酸鹽的測定危害：亞硝酸胺致癌測定原理：亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮反應，這一產(chǎn)物與N-1萘基乙二胺偶聯(lián)形成紫紅產(chǎn)物，可用光電比色法定量。流程：樣品處理測定標準曲線的繪制計算七、植物組織培養(yǎng)1.植物組織培養(yǎng)過程植物組織培養(yǎng)過程胡蘿卜植物組織培養(yǎng)過程菊花植物組織培養(yǎng)過程：帶一片葉的莖段插入

8、MS培養(yǎng)基愈傷組織生芽培養(yǎng)叢狀苗生根培養(yǎng)練苗培養(yǎng)（移至草木灰或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持80%以上的濕度，2-3天后打開玻璃罩逐漸降低濕度，直到將罩完全打開處于自然濕度為止）移栽外植體消毒：選擇的菊花莖段要進行三次消毒：第一次用70%酒精浸泡10分鐘；第二次用5%次氯酸鈉浸泡5分鐘；第二次再用另一5%次氯酸鈉浸泡5分鐘 2.植物組織培養(yǎng)原理：細胞全能性3.植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基有：MS培養(yǎng)基、生芽培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基含：大量元素、 微量元素、有機物（甘氨酸、維生素、蔗糖等）； 植物激素（生長素、細胞分裂素、赤霉素等）4.植物激素用量及比例對細胞分裂分化的影響：細胞分裂素/生長素比值高，促

9、進芽分化，抑制根生成細胞分裂素/生長素比值低，促進根分化，抑制芽生成細胞分裂素/生長素比值適中，促進愈傷組織生長選修三背默知識點一基因工程1.工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程誕生a基因工程：把一種生物的遺傳物質(zhì)DNA（目的基因）移到另一種生物的細胞中去，并使這種遺傳物質(zhì)所帶的遺傳信息在受體細胞中表達。 基因工程的核心是：構(gòu)建重組DNA分子 基因工程原理：基因重組基因工程操作水平：DNA分子水平基因工程的理論基礎：1.DNA是生物的遺傳物質(zhì)2.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)3.遺傳信息傳遞方式2基因工程的三大工具:限制性核酸內(nèi)切酶（有專一性）-作用部位：磷酸二酯鍵-作用結(jié)果形成：粘性末端DNA連接酶（無專一性）-連接部

10、位：-作用結(jié)果形成：磷酸二酯鍵載體（常用質(zhì)粒、病毒）-載體不是工具酶限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶質(zhì)粒（環(huán)狀DNA）3.有關DNA的酶酶種類酶的作用DNA（水解）酶將DNA水解成四種脫氧核苷酸，徹底水解時生成磷酸、脫氧核糖和含氮堿基。 DNA解旋酶使DNA解旋成單鏈，作用部位是堿基與堿基之間的氫鍵。限制性核酸內(nèi)切酶將DNA切成片斷，作用部位是磷酸二酯鍵。 DNA聚合酶以一條DNA鏈為模板，將單個脫氧核苷酸通過磷酸二酯鍵連接成互補DNA鏈。 DNA連接酶將兩個DNA片段通過磷酸二酯鍵連接。4. 基因工程的原理和技術b: （一）基因工程的基本原理基本原理：讓人們感興趣的基因(目的基因)在受體細胞中穩(wěn)

11、定和高效表達?；蚬こ痰幕疽兀憾喾N工具酶、載體、目的基因和宿主細胞等。二、基因工程的基本操作步驟第一步：獲得目的基因目的基因：人們所感興趣的基因常用mRNA通過逆轉(zhuǎn)錄生產(chǎn)DNA（即目的基因），再通過PCR技術快速擴增第二步：形成重組DNA分子用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體DNA(如質(zhì)粒)，使其產(chǎn)生相同的粘性末端，然后用DNA連接酶將兩者連接在一起，形成重組DNA。第三步：將重組DNA分子導入受體細胞用細菌作受體細胞時，導入時要用氯化鈣處理，增加細胞壁通透性第四步：篩選含有目的基因的受體細胞由于質(zhì)粒上有抗生素如四環(huán)素的抗性基因，所以含有這種重組質(zhì)粒的受體細胞能夠在有四環(huán)素的培

12、養(yǎng)基中生長，而沒有接納重組DNA分子的細胞則不能在這種培養(yǎng)基上生長。第五步：目的基因的表達產(chǎn)生人們需要的功能物質(zhì)。如抗蟲棉的抗蟲基因是否表達，可用棉鈴蟲去吃棉花的葉片，若吃后死亡，說明抗蟲基因以表達導入不同受體細胞比較生物種類植物細胞動物細胞微生物細胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法氯化鈣處理受體細胞體細胞受精卵原核細胞轉(zhuǎn)化過程目的基因插入Ti質(zhì)粒環(huán)狀DNA上導入農(nóng)桿菌侵染植物體細胞目的基因穩(wěn)定維持和表達將重組DNA分子提純?nèi)∈芫扬@微注射法受精卵發(fā)育獲得具有新性狀的動物氯化鈣處理細菌細胞細菌細胞壁通透性增加重組DNA進入細菌細胞內(nèi)目的基因表達不同時期檢測比較目的基因是否插入是否轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA

13、是否翻譯產(chǎn)生蛋白質(zhì)個體檢測方法DNA分子雜交DNA-RNA分子雜交抗體-抗原雜交抗病、抗蟲接種實驗現(xiàn)象是否出現(xiàn)雜交帶是否出現(xiàn)雜交帶是否出現(xiàn)雜交帶是否出現(xiàn)抗病、抗蟲所屬水平分子水平檢測個體水平檢測5.基因工程的應用a在遺傳育種是的應用：培育基因植物：抗蟲棉、藍玫瑰、抗病毒煙草；培育基因動物生長快的轉(zhuǎn)基因鼠、抗病的轉(zhuǎn)基因雞。利用基因工程生產(chǎn)藥物：通過轉(zhuǎn)基因大腸桿菌生產(chǎn)胰島素；通過轉(zhuǎn)基因酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗；進行基因治療和基因診斷，1990年，美國首例重度免疫缺陷癥基因治療成功。1991年，我國首例B型血友病基因治療也獲基因工程在環(huán)保上的應用：利用細菌發(fā)酵和轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)聚羥基烷酯，用于合成可降解的新

14、型塑料；改造分解石油的細菌，提高其分解石油的能力；利用轉(zhuǎn)基因微生物吸收環(huán)境中的重金屬，降解有毒化合物和處理工業(yè)廢水。4. 活動：提出生活中的疑難問題，提出用基因工程技術的解決方案c二、克隆技術植物克隆b：依據(jù)原理：細胞全能性克隆即無性生殖植物克隆主要利用植物組織培養(yǎng)技術，包括原生質(zhì)體培養(yǎng)和植物體細胞融合技術。與植物組織培養(yǎng)相關的幾個名詞：植物組織培養(yǎng)流程圖：外植體-脫分化愈傷組織-再分化根、芽或胚狀體-植株外植體：從活植物體上切下進行培養(yǎng)的那部分離體細胞、組織或器官。脫分化：已經(jīng)分化的細胞，經(jīng)過誘導后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而變成未分化的細胞。愈傷組織：細胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的

15、、無定形狀態(tài)的具有分生能力薄壁細胞。再分化：脫分化生產(chǎn)的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官的過程。： 原生質(zhì)體培養(yǎng)和植物體細胞融合技術原生質(zhì)體培養(yǎng)技術植物體細胞融合技術又稱植物體細胞雜交技術由于植物細胞壁的存在，植物的組織培養(yǎng)和克隆有一定的困難，所以我們可利用纖維素酶和果膠酶處理植物細胞，得到無細胞壁的原生質(zhì)體，原生質(zhì)體放入含較高濃度的甘露醇溶液中培養(yǎng)可再生出細胞壁。用較高濃度的甘露醇溶液是防止過度吸水脹破。植物細胞融合完成的標志是：經(jīng)培養(yǎng)后再生出細胞壁。動物克隆a：依據(jù)原理：細胞增殖動物細胞培養(yǎng)技術動物細胞融合技術單克隆抗體技術克隆羊技術動物細胞培養(yǎng)目前只能得到細胞、組織或器

16、官動物細胞培養(yǎng)時加飼養(yǎng)層（含成纖維細胞）作用：促進細胞分裂，抑制細胞分化能無限增值的細胞稱細胞系，如癌細胞就是細胞系。三、胚胎工程從受精卵談起a受精：精子與卵細胞融合稱為受精；受精過程包括精卵識別、精子附著于卵膜、精卵質(zhì)膜融合、精卵細胞核融合；受精的實質(zhì)：精卵細胞核融合；精卵識別的基礎：同種生物的精、卵細胞表面的特異性蛋白能相互識別；受精場所：輸卵管。胚胎發(fā)育過程：受精卵卵裂球囊胚原腸胚受精卵受精卵是動物個體發(fā)育的起點卵裂球卵裂球由2細胞4細胞8細胞32細胞卵裂球細胞數(shù)目逐漸增多，單細胞體積逐漸減小囊胚外層細胞稱滋養(yǎng)層內(nèi)層細胞稱內(nèi)細胞團即胚胎干細胞囊胚期細胞開始分化原腸胚原腸胚由內(nèi)、中、外三胚

17、層組成，具有囊胚腔和原腸腔原腸胚時期細胞分化程度最高胚胎工程a胚胎工程指各種胚胎操作技術胚胎工程包括體外受精、胚胎體外培養(yǎng)、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干細胞培養(yǎng)等技術。體外受精技術：采集雌性動物的卵細胞和雄性動物的精子，使其在試管中受精。 采集精子要進行獲能培養(yǎng)，獲能的精子不是指精子獲得能量，而是指獲得受精的能力；采集卵細胞要用超數(shù)排卵法；獲能精子與卵細胞在試管中受精并發(fā)育成早期胚胎胚胎體外培養(yǎng)技術：指在一系列含有不同成分的培養(yǎng)液，對獲取的早期胚胎進行體外培養(yǎng)胚胎移植技術：指將經(jīng)濟價值較高、遺傳性狀優(yōu)秀的母畜，經(jīng)激素處理，使其超數(shù)排卵后受精，然后將發(fā)育的早期胚胎分別移植到同步發(fā)情期的代孕母的子宮內(nèi)，通過代孕母妊娠產(chǎn)仔的技術胚胎分割技術：指借助顯微操作技術將早期胚胎切割成幾等份，再移植到代孕母子宮中發(fā)育，產(chǎn)生同卵多仔后代的技術。胚胎干細胞培養(yǎng)技術:四、生態(tài)工程1.生態(tài)工程原理：整體、協(xié)調(diào)、循環(huán)、再生2.生態(tài)工程研究對象：社會經(jīng)濟自然復合生態(tài)系統(tǒng)3.生態(tài)工程的主要類型a: 物質(zhì)循環(huán)利用生態(tài)工程：城市生活垃圾進行減量化、無害化、資源化處理；農(nóng)村發(fā)展養(yǎng)殖業(yè)