1、血液分析儀原理及應(yīng)用2一、血液分析儀檢驗(yàn)原理二、參數(shù)分析三、圖形分析四、血液分析儀的評(píng)價(jià)五、血液分析儀全面質(zhì)量控制六、全自動(dòng)血液分析儀的可靠性問題七、常見的旗標(biāo)和代碼3 血液分析儀是在現(xiàn)代電子、光學(xué)和理化技術(shù)上建立和發(fā)展的儀器，用于測定血液有形成分和細(xì)胞內(nèi)容物。自上世紀(jì)50年代以來，發(fā)展迅速，可供檢驗(yàn)和研究的項(xiàng)目已達(dá)幾十個(gè)，近年隨著流式細(xì)胞技術(shù)、激光技術(shù)、免疫技術(shù)等的應(yīng)用，性能大為提高。4 48年，美國的庫爾特(W.H.Coulter)發(fā)明了電阻抗法粒子計(jì)數(shù)技術(shù)的設(shè)計(jì)專利。 53年，庫爾特推出了第一代血細(xì)胞分析儀，僅計(jì)數(shù)RBC、WBC。 60年代，在原基礎(chǔ)上增加一個(gè)比色系統(tǒng),可測定血紅蛋白。發(fā)

2、展及特點(diǎn)5 70年代，隨著電子技術(shù)及計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展，血細(xì)胞分析儀可得到HCT、MCV、MCH、MCHC等參數(shù)。同時(shí)血小板計(jì)數(shù)儀問世，可對(duì)血小板進(jìn)行計(jì)數(shù)。 80年代初，推出了雙通道儀器：計(jì)數(shù)RBC、WBC、Plat。 80年代中期，已能對(duì)細(xì)胞進(jìn)行粗篩分類。 90年代，研制出的多功能、多參數(shù)、多分類全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀。67【發(fā)展及特點(diǎn)】1.自動(dòng)化程度越來越高2.提供參數(shù)越來越多3.精密度越來越高4.速度越來越快5.更注重環(huán)保6.質(zhì)控功能得到加強(qiáng)7.智能化8 血細(xì)胞分析儀的類型 （一）按自動(dòng)化程度分類半自動(dòng)：手工稀釋血液標(biāo)本 測試全自動(dòng)：直接用抗凝血測試1.半自動(dòng)化血細(xì)胞分析儀主機(jī)外需匹配稀釋器，

3、采血后血液經(jīng)預(yù)稀釋后再上機(jī)檢測缺點(diǎn)：誤差大、繁瑣、吸樣不準(zhǔn)，不易質(zhì)控，易發(fā)生堵孔 現(xiàn)象優(yōu)點(diǎn)：便宜2.全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀抗凝血液直接檢測，在儀器內(nèi)自動(dòng)稀釋優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、方便缺點(diǎn)：價(jià)格昂貴主要區(qū)別：上機(jī)前是否經(jīng)預(yù)稀釋9（二）按對(duì)白細(xì)胞分析程度二分群：小細(xì)胞、大細(xì)胞三分群：小細(xì)胞、中等大小細(xì)胞、大細(xì)胞五分群：NE、EO、BA 、LY 、MO 10（三）按檢測原理可分類1.電容型：2.光電型：3.激光型：4.電阻抗型：5.聯(lián)合檢測型：11一、 血液分析儀檢驗(yàn)原理（一)、細(xì)胞計(jì)數(shù)原理 1、電阻抗型：庫爾特原理 基本原理：血細(xì)胞具有相對(duì)非導(dǎo)電的性質(zhì)，在浸入電解質(zhì)的微孔管內(nèi)外各有一個(gè)電極，電流接通后，兩電極間

4、形成電流，當(dāng)血細(xì)胞通過微孔的一瞬間，可引起電阻及電壓的變化，出現(xiàn)脈沖信號(hào)，脈沖的數(shù)量代表細(xì)胞的數(shù)量，脈沖的大小代表細(xì)胞的大小，從而對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和體積測定。121314紅細(xì)胞和血小板體積有明顯的差異，可用一個(gè)限定閾值將兩者同時(shí)測得的光電信號(hào)區(qū)分。因此，血小板和紅細(xì)胞共用一個(gè)分析系統(tǒng)。根據(jù)不同的閾值，計(jì)算機(jī)分別給出紅細(xì)胞和血小板數(shù)量。15掃流裝置：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)微孔旁有一股持續(xù)的稀釋液流，流向與計(jì)數(shù)微孔呈直角，使計(jì)數(shù)后的液體流走，可防止計(jì)數(shù)后顆粒重新 進(jìn)入循環(huán)而再次計(jì)數(shù)。鞘流技術(shù)：利用流體動(dòng)力學(xué)原理，即可保證細(xì)胞位于鞘液中心并排成一列通過檢測孔中心或通過激光束中心，又保證它不會(huì)返回敏感區(qū)。浮動(dòng)界標(biāo)

5、：通過調(diào)節(jié)紅細(xì)胞及血小板的閾值，避免干擾。 162.激光型血液細(xì)胞分析儀原理流式細(xì)胞術(shù)172.激光型血液細(xì)胞分析儀原理血液經(jīng)稀釋和處理后形成一股極細(xì)的液流穿過激光束，每個(gè)血細(xì)胞被激光照射后產(chǎn)生光散射并被光電接收系統(tǒng)接受，細(xì)胞數(shù)量與細(xì)胞通過激光束時(shí)光散射的脈沖次數(shù)相同，細(xì)胞大小與所產(chǎn)生的脈沖電壓大小呈正相關(guān)。18激光型血液細(xì)胞分析儀原理19（1）.白細(xì)胞計(jì)數(shù)原理 利用流式細(xì)胞術(shù)，單個(gè)細(xì)胞隨著流體動(dòng)力聚焦的鞘流液通過激光照射的檢測區(qū)時(shí)，使光束發(fā)生折射、衍射和散射，散射光由光檢測器接受后產(chǎn)生脈沖，脈沖大小與細(xì)胞的大小成正比，脈沖的數(shù)量代表細(xì)胞的數(shù)量。 優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞單個(gè)通過檢測區(qū)，避免了細(xì)胞重疊 利用高

6、角、低角等前向光可獲得細(xì)胞的各種數(shù)據(jù)，經(jīng)綜合分析可提高鑒別細(xì)胞的能力。20（2）.紅細(xì)胞計(jì)數(shù)原理 以氫氖激光燈為光源，670nm激光束以低角度光散射（20-30，測量單個(gè)紅細(xì)胞體積與總數(shù)）和高角度光散射（50 - 150，測量單個(gè)紅細(xì)胞血紅蛋白濃度）同時(shí)測量一個(gè)紅細(xì)胞，繪出紅細(xì)胞直方圖、散點(diǎn)圖，得出MCV、MCH、MCHC、RDW、HDW等參數(shù)。（3）.血小板計(jì)數(shù)原理 當(dāng)球形化的血小板單個(gè)通過激光照射區(qū)時(shí)，高角度（50 - 150）主要檢測細(xì)胞折射指數(shù)（refractive index,RI),此與細(xì)胞密度有；低角度光散射（20-30）主要測量細(xì)胞大小。21（二）、白細(xì)胞分類（群）計(jì)數(shù)原理1.

7、 二、三分群計(jì)數(shù)原理即把外周白細(xì)胞分為大中小三群在標(biāo)本測定過程中，加入特殊溶血?jiǎng)?，一方面破壞紅細(xì)胞，一方面作用于白細(xì)胞使其膜表面產(chǎn)小孔，使細(xì)胞失水而皺縮。22白細(xì)胞三分群原理失水皺縮后的細(xì)胞體積大小實(shí)際上是細(xì)胞核與細(xì)胞漿中顆粒成分的總和，與自然體積無關(guān)，并使各類型白細(xì)胞間的體積差異增大，中性粒細(xì)胞單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞。未皺縮狀態(tài)直徑（um)： N:1015，E:1116，B:1012 L：615，M：102023白細(xì)胞三分群原理皺縮后使正常人白細(xì)胞從體積上分出三個(gè)群體（亞群），直方圖出現(xiàn)三個(gè)峰（區(qū)）。24白細(xì)胞三分群原理第一亞群即小細(xì)胞區(qū)（SCR或LYM）：包括成熟淋巴、異型淋巴、不典型淋巴細(xì)胞、

8、個(gè)別嗜堿粒細(xì)胞。體積在35 90fl之間。25白細(xì)胞三分群原理第二亞群即中等大小細(xì)胞區(qū)（MCR或MID）：包括單核細(xì)胞、幼稚細(xì)胞、原始細(xì)胞、異型淋巴、漿細(xì)胞和部分嗜酸、嗜堿粒細(xì)胞。體積在90 160fl26白細(xì)胞三分群原理第三亞群即大細(xì)胞區(qū)（LCR或GRAN）：包括中性分葉核粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞、桿狀核粒細(xì)胞和部分嗜酸、嗜堿粒細(xì)胞。體積160fl2728292.白細(xì)胞五分類把外周白細(xì)胞分為中性粒細(xì)胞(桿狀核和分葉核分不開)、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞五類。對(duì)異常細(xì)胞和幼稚細(xì)胞能報(bào)警和提示。30外周血白細(xì)胞312.五分類的原理五分類分析儀除采用電阻抗原理外，還增加了電導(dǎo)率測定，多角

9、度激光散射技術(shù)，有的儀器還應(yīng)用了射頻技術(shù)，細(xì)胞化學(xué)（POX）染色技術(shù)，多角度偏振光散射技術(shù)，對(duì)各類細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分。321）Coulter公司：VCS法（Volume，Conductivity，Light scatter）-GENS、750血液加入溶血?jiǎng)?，再加入穩(wěn)定劑，保持白細(xì)胞表面、胞漿及細(xì)胞大小等特征與體內(nèi)相同。鞘流技術(shù)使細(xì)胞單個(gè)通過檢測器并接受VCS的同時(shí)檢測。33VCS法（Volume，Conductivity，Light scatter）V：測體積，但淋巴和嗜堿粒細(xì)胞體積相似。C：根據(jù)細(xì)胞壁能傳導(dǎo)高頻電流的性能采用高頻電磁探針測量細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu)，測核漿比及細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成份，可將同體積而性質(zhì)

10、不同的細(xì)胞區(qū)別開。S：單色激光掃描光散射可了解細(xì)胞內(nèi)核分葉、核形態(tài)，細(xì)胞內(nèi)顆粒構(gòu)型和質(zhì)量。34V、C、S示意35V、C、S技術(shù)示意圖36 2)多角度激光法 采用半導(dǎo)體激光及流式原理兩個(gè)角度分析WBC 每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生3個(gè)信號(hào) 前向散射光反映細(xì)胞體積（WBC/BASO通道） 側(cè)向散射光反映細(xì)胞內(nèi)涵物（DIFF及WBC/BASO通道） 側(cè)向熒光反映細(xì)胞DNA及RNA含量（DIFF）37多角度散射光原理38激光流式細(xì)胞檢測原理與五分類39雙角度散射光40低角度散射光檢測原理41高角度散射光檢測原理圖42熒光信號(hào)分析的特異性激光束 (=633nm)側(cè)向熒光：DNA/RNA信息側(cè)向散射光：細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)信息前向

11、散射光：細(xì)胞體積信息43 (1)白細(xì)胞分類通道（DIFF通道） 此通道應(yīng)用熒光和側(cè)向散射光信號(hào) 表面活性劑作用：溶解破壞RBC和PLAT在WBC膜上打孔 聚次甲基熒光染料：與核酸、細(xì)胞器結(jié)合 試劑中的有機(jī)酸：與嗜酸性顆粒結(jié)合，依據(jù)側(cè)向散射光強(qiáng)度，提高EO與NE的區(qū)分能力得到4個(gè)亞群：LY、MO、EO、NE+BA44DIFF通道 側(cè)向散射光熒光45(2)WBC/BASO通道 此通道應(yīng)用前向和側(cè)向散射光信號(hào) 表面活性劑作用：引起除BA外的RBC、PLAT、 WBC溶解和皺縮，形成影RBC、影PLAT和除BA外的裸核WBC 前向散射光強(qiáng)度代表細(xì)胞體積，側(cè)向散射光強(qiáng)度代表細(xì)胞殘余物復(fù)雜性，依據(jù)二者可將

12、BA與其它細(xì)胞區(qū)分46前向散射光WBC/BASO通道 側(cè)向散射光473).Sysmex公司：阻抗與射頻技術(shù)聯(lián)合檢測（1）嗜酸性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)：PH值特殊的溶血?jiǎng)┦钩鼸O外的所有細(xì)胞溶解或萎縮，因而通過計(jì)數(shù)小孔的只有EO。（2）嗜堿性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)：在特殊溶血?jiǎng)┑淖饔孟拢挥?jì)數(shù)的只有BA。（3）淋巴、單核、粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)：采用直流電檢測細(xì)胞大小，射頻測量胞核的大小及顆粒的多少。 （4）幼稚細(xì)胞檢測系統(tǒng)：在細(xì)胞懸液中加入硫化氨基酸，幼稚細(xì)胞膜上脂質(zhì)較成熟細(xì)胞多，結(jié)合的氨基酸多于較成熟細(xì)胞，且抵抗溶血?jiǎng)┑淖饔?，加入溶血?jiǎng)┖?，成熟?xì)胞被溶解，幼稚細(xì)胞完整，可通過電阻抗法檢測出來。4849504).Ab

13、bott公司（雅培）：多角度偏振光散射白細(xì)胞分類技術(shù)（MAPSS）CD3200,CD3500,CD3700,CD4000標(biāo)本被集中為直徑30um的液流，單個(gè)通過激光束，從四個(gè)角度測定散射光的密度。0度：前角光散射，粗略測細(xì)胞大小。7度：狹角光散射，測細(xì)胞結(jié)構(gòu)及復(fù)雜性的相對(duì)特征。90度：垂直光散射，測細(xì)胞內(nèi)部顆粒和細(xì)胞分葉情況。90度消偏振光：基于顆?？梢詫⒋怪苯嵌鹊钠窦す庀奶匦?，嗜酸性粒細(xì)胞顆粒豐富，可將其從中性粒細(xì)胞和其他細(xì)胞中分離出來。51525).Technicon拜耳公司：光散射與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用 （1）激光與過氧化物酶檢測通道 過氧化物酶染色：ENM；L、B 酶反應(yīng)強(qiáng)度及細(xì)

14、胞體積不同，激光照到細(xì)胞時(shí)散射光的強(qiáng)度就不同，得到4個(gè)亞群EO、NE、MO、LY+BA。 （2）嗜堿性/分葉核細(xì)胞檢測通道 血液與酸性表面活性劑反應(yīng)，RBC被溶解，除BA外其它白細(xì)胞膜被破壞，胞質(zhì)溢出，僅剩裸核，激光照射后，產(chǎn)生散射光的變化，BA呈高角度散射，位于上部，裸核位于下部。5354五分類血液分析儀結(jié)果五分類分析儀得到的是散點(diǎn)圖從圖上可對(duì)細(xì)胞分類和定位 55 白細(xì)胞散點(diǎn)圖正常，無報(bào)警；鏡檢白細(xì)胞分類比率正常。56五分類血液分析儀結(jié)果57（三）.網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類原理58（1）流式細(xì)胞儀（flowcytometry ,FCM） 原理：在FCM測量時(shí)通過某些染料與網(wǎng)織紅細(xì)胞中的RNA結(jié)合

15、，發(fā)出特定顏色的熒光，進(jìn)行RNA定量可精確計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞占成熟紅細(xì)胞的比值（RET）。59（2）網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測 原理 以氬激光束為光源，堿性槐黃O為染料，與網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)RNA結(jié)合后，通過波長488nm的激光束時(shí)，儀器可同時(shí)測量前向角光散射強(qiáng)度和測量熒光強(qiáng)度，將它們分別作為Y和X兩個(gè)變量就構(gòu)成了一個(gè)二維圖象，并由此劃分PLT、RBC和RET的分布。根據(jù)熒光強(qiáng)度可將RET分成LTR、MTR和HTR三部分。 60網(wǎng)織紅細(xì)胞的分型IRF:未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞比率有效監(jiān)控紅細(xì)胞生成狀態(tài)骨髓抑制紅細(xì)胞生成恢復(fù)期*IRF：Immature Reticulacyte Fraction熒光體積61（3 ）全自

16、動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測原理兩種類型：采用兩種試劑：一種是新亞甲藍(lán)， 著染紅細(xì)胞內(nèi)的RNA：另一種是透明劑，使紅細(xì)胞內(nèi)Hb溢出，應(yīng)用VCS的原理進(jìn)行RET測定。 另一種方法是先將3l血液加入已標(biāo)準(zhǔn)化的染液，孵育15min，將儀器轉(zhuǎn)換至網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)程序，即可得到網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)62(四) NRBC計(jì)數(shù)原理專用檢測通道和專用試劑兩步處理，NRBC和WBC分界清晰1.NRLyse溶血素對(duì)細(xì)胞作用WBC細(xì)胞膜打孔，使活的和死亡WBC染色程度相同NRBC裸核，體積與小淋巴可以區(qū)別RBC無DNA、RNA2.NRDye核酸染色：polymethine染料63根據(jù)前向散射光和熒光強(qiáng)度將NRBC、WBC和影細(xì)胞區(qū)分出

17、來64（五）.血紅蛋白測定原理血液標(biāo)本在檢測過程中加入一種特殊的細(xì)胞化學(xué)性溶血?jiǎng)?，它可以快速溶解紅細(xì)胞，并將釋放出的血紅蛋白全部轉(zhuǎn)變成血紅蛋白衍生物，其對(duì)特定波長光波的吸光度與血紅蛋白濃度成正比。65總 結(jié)一、細(xì)胞計(jì)數(shù)原理（一）電阻抗型：庫爾特原理（二）流式細(xì)胞術(shù)與光散射法檢測原理二、白細(xì)胞分類（群）計(jì)數(shù)原理（一）白細(xì)胞二、三分群計(jì)數(shù)原理-電阻抗原理（二）白細(xì)胞五分類計(jì)數(shù)原理 1.容量、電導(dǎo)、光散射 2.激光與細(xì)胞化學(xué)法 3.電阻抗與射頻法 4.多角度激光法 5.多角度偏振光法三、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)原理四、有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)原理五、血紅蛋白檢測原理66二.參數(shù)分析WBC：白細(xì)胞總數(shù) RBC：紅細(xì)胞總數(shù)

18、LYM：淋巴細(xì)胞數(shù) Hb：血紅蛋白測定LYM%：淋巴細(xì)胞百分比 HCT：紅細(xì)胞比積NEU：中性粒細(xì)胞數(shù) MCV：平均紅細(xì)胞體積NEU%：中性粒細(xì)胞百分比 MCH：平均RBC、Hb含量MONO：單核細(xì)胞數(shù)目 RDW：RBC體積分布寬度MONO%：單核細(xì)胞百分比 PLT：血小板總數(shù)EOS：嗜酸性粒細(xì)胞數(shù) MPV：平均血小板體積BASO：嗜酸性粒細(xì)胞數(shù) PDW：Plat體積分布寬度 PCT：血小板比積67（一）紅細(xì)胞參數(shù)RBC：紅細(xì)胞數(shù)量，正常參考男性為4.0-5.5 1012/L 正常參考女性為3.5-5.0 1012/LHgb：外周血中血紅蛋白濃度，正常參考為110-160 g/LHct：血細(xì)胞

19、壓積，也可指紅細(xì)胞壓積，正常參考為0.35-0.50MCV：平均紅細(xì)胞體積，正常參考為80-100 fLMCH：平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量，指平均每個(gè)紅細(xì)胞含的血紅蛋白量，正常參考為27-34 pgMCHC：平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度，指紅細(xì)胞中血紅蛋白濃度，正常參考為320-360 g/LRDW：紅細(xì)胞分布寬度，正常參考為11.5% - 15%HDW:血紅蛋白分布寬度，反應(yīng)紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量異質(zhì)性68 利用MCV、MCH、MCHC對(duì)貧血進(jìn)行形態(tài)學(xué)分類(Wintrobe法) 類型 MCV（fl） MCH（pg） MCHC（g/L） 大細(xì)胞性貧血 94 32 320360 正細(xì)胞性貧血 8094 26

20、32 320360 單純小細(xì)胞性貧血 80 26 320360 小細(xì)胞低色素性貧血 80 26 320 69正細(xì)胞性貧血（CAA）70大紅細(xì)胞性貧血71單純小細(xì)胞性貧血72小細(xì)胞低色素紅細(xì)胞73 貧血的RDW和MCV分類MCVRDW分類意義減低正常小細(xì)胞均一性輕型珠蛋白生成障礙性貧血減低升高小細(xì)胞不均一性IDA、鐵粒幼細(xì)胞貧血正常正常正細(xì)胞均一性慢性貧血、AA、白血病正常升高正細(xì)胞不均一性MF升高正常大細(xì)胞均一性MDS、AA升高升高大細(xì)胞不均一性MA、惡性貧血74（二）.白細(xì)胞參數(shù)WBC：白細(xì)胞數(shù)量，正常人參考為4-10 109/LNE%：中性粒細(xì)胞百分比，正常參考為50%-75%NE#：中性

21、粒細(xì)胞絕對(duì)值LY%：淋巴細(xì)胞百分比，正常參考為20%-40%LY#： 淋巴細(xì)胞絕對(duì)值MO%：單核細(xì)胞百分比，正常參考為3%-10%MO#：單核細(xì)胞絕對(duì)值EO%：嗜酸細(xì)胞百分比，正常參考為0.5%-5%EO#：嗜酸細(xì)胞絕對(duì)值BA%：嗜堿細(xì)胞百分比，正常參考為0-2%BA#：嗜堿細(xì)胞絕對(duì)值75（三）.血小板參數(shù) 1、PLT：血小板數(shù)量 2、MPV (Mean platelet volume)：平均血小板體積，MPV大小與PLT數(shù)量多少呈非線性負(fù)相關(guān)，其正常值要結(jié)合PLT數(shù)量來考慮，即不同數(shù)量血小板有不同的MPV參考值。參考值跨度為6.813.5fl。76瑞-吉染色所見血小板7778MPV的臨床價(jià)值

22、鑒別血小板減少癥的病因：當(dāng)骨髓損傷導(dǎo)致血小板減少時(shí)，MPV下降當(dāng)血小板在外周血中破壞增多導(dǎo)致血小板減少時(shí)，MPV增大當(dāng)血小板分布異常導(dǎo)致血小板減少時(shí)，MPV正常MPV增高可作為骨髓功能恢復(fù)的較早期指標(biāo)。當(dāng)骨髓功能衰竭時(shí)，MPV減低早于PLT減少，骨髓抑制越嚴(yán)重，MPV越小。當(dāng)骨髓功能恢復(fù)時(shí)，MPV值的增大先于PLT數(shù)值的增高。血栓前狀態(tài)或血栓性疾病時(shí)MPV常增高。79 3、PCT (Platecrit)：血小板壓積，是血小板占全血體積的百分比，正常參考值也是一個(gè)不恒定的參數(shù)，隨血小板數(shù)量而參考值變化。男性：0.108%0.272%女性：0.114%0.282%80 4、PDW (Platele

23、t volume distribution width)：血小板分布寬度，是反映血小板體積異質(zhì)性的參數(shù)。以血小板體積的變異系數(shù)表示。 參考值：（CV）l5.5%18.1% （SD）14.7517.25fl 5、IPF：未成熟血小板比率，反應(yīng)骨髓增生狀態(tài)、血小板更新速度。其與IRF意義相近。81（四）. 網(wǎng)織紅細(xì)胞系列參數(shù)RET%：網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比，正常參考為0.5%-2.5%RET#：網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值MRV：平均網(wǎng)織紅細(xì)胞體積，正常參考為100-125fLIRF：未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞指數(shù)，IRF=M+H/M+H+ICHr:網(wǎng)織紅細(xì)胞平均血紅蛋白量，反映鐵蛋白代謝最新動(dòng)態(tài)。RET-He:網(wǎng)織紅細(xì)胞血

24、紅蛋白含量，其在IDA治療過程中意義重大。MSCV和MRV：平均球形細(xì)胞（成熟紅和網(wǎng)織紅）體積、平均網(wǎng)織紅細(xì)胞體積，MSCVMCV診斷遺傳球。82三、圖形分析（一）、血細(xì)胞直方圖及臨床應(yīng)用 1、 紅細(xì)胞直方圖（1）正常紅細(xì)胞直方圖：在36-360fl范圍內(nèi)分析紅細(xì)胞。正常紅細(xì)胞主要分布在50-200fl范圍內(nèi)，在直方圖上可見2個(gè)細(xì)胞群83虛線圖形為正常標(biāo)本的擬合曲線，虛線直線為界標(biāo)）1.50125fl區(qū)域有一幾乎兩側(cè)對(duì)稱、較狹窄的正態(tài)分布曲線為主峰，頂點(diǎn)較高，與橫坐標(biāo)相交處即為MCV值 2. 125200fl區(qū)域很平坦的次峰 84分析異常紅細(xì)胞直方圖分析紅細(xì)胞直方圖時(shí)，注意觀察峰的位置、峰底開

25、口寬度、峰頂形狀、有無雙峰852、紅細(xì)胞直方圖在貧血中的應(yīng)用1）小細(xì)胞性貧血RDW正常86RDW輕度增高 RDW明顯增高872）大細(xì)胞性貧血RDW正常88RDW輕度增高 RDW明顯增高893）正常細(xì)胞性貧血RDW正常90RDW輕度增高 RDW明顯增高912、白細(xì)胞直方圖 (1).正常白細(xì)胞直方圖：在35-450fl范圍內(nèi)將血 細(xì)胞分為3群。92 (2)、白細(xì)胞直方圖的意義圖形變化決定進(jìn)一步檢查的內(nèi)容白細(xì)胞直方圖變化無特異性反映某些人為或病理因素干擾WBC計(jì)數(shù)或分類計(jì)數(shù)93中性粒細(xì)胞比例增高或淋巴細(xì)胞比例減低94中性粒細(xì)胞比例減低或淋巴細(xì)胞比例增高 95單核細(xì)胞比例增高 96嗜酸性粒細(xì)胞比例增高

26、97急性淋巴細(xì)胞白血病 98急性非淋巴細(xì)胞性白血病99慢性淋巴細(xì)胞性白血病100慢性粒細(xì)胞白血病101（3）白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)及直方圖注意問題 三分群結(jié)果僅供工作人員參考，不是真正的白細(xì)胞分類，無法與實(shí)際的白細(xì)胞分布相吻合，因此不能替代顯微鏡鏡下分類，但對(duì)白細(xì)胞分布異常有一定的篩選作用。五分類結(jié)果可信度高，非血液病病人血象指標(biāo)無異常同時(shí)未指定需觀察細(xì)胞形態(tài)和血液寄生蟲、不要求區(qū)分中性粒細(xì)胞的桿狀核分葉核數(shù)量時(shí)可作為最終結(jié)果。102儀器分類的方法學(xué)和傳統(tǒng)的顯微鏡分類有根本的區(qū)別，兩者目前還沒有一個(gè)很好的對(duì)應(yīng)關(guān)系。所有自動(dòng)化血液分析儀均不能完全代替血涂片顯微鏡下的血細(xì)胞形態(tài)觀察，它的最大意義在于篩選。

27、103重要提示五分類的分析儀目前也不能分辨桿狀核與分葉核，更不能分辨異常和幼稚細(xì)胞類型，但對(duì)異常細(xì)胞會(huì)有簡單的提示。104篩選的規(guī)則 篩選規(guī)則(Rule Systems)達(dá)85項(xiàng)：來自經(jīng)驗(yàn)的積累和各方面專家的意見，凡通過規(guī)則的標(biāo)本可以不需要顯微鏡檢查，這樣的標(biāo)本占70%以上，而未通過規(guī)則的標(biāo)本占24%30%，經(jīng)過人工顯微鏡檢查，基本上無假陰性問題。1053、血小板分布直方圖： 正常血小板直方圖： 在2-20fl范圍內(nèi)分析血小板，正常血小板直方圖呈 左偏態(tài)分布在血小板的直方圖上可見兩條曲線：一條是 2fl-20fl 的原始數(shù)據(jù)曲線;另一條是 0fl-70fl 的擬合曲線.106擬合曲線血小板計(jì)數(shù)

28、的干擾主要來自:2 fl以下：噪音、電磁波的干擾20 fl以上：裂紅細(xì)胞;小紅細(xì)胞;白細(xì)胞的干擾107擬合曲線作用儀器根據(jù)測量得到的220 fL范圍內(nèi)血小板分布情況，按照對(duì)數(shù)正態(tài)分布規(guī)律得到070 fL范圍血小板分布情況（正常人血小板絕大多數(shù)分布在220 fL 范圍內(nèi)）如果擬合成功，血小板數(shù)量由擬合曲線下的面積換算得到，即070 fL范圍的血小板數(shù)量；如果擬合不成功，沒有擬合曲線，血小板結(jié)果只報(bào)告220fL范圍的血小板數(shù)量。通常情況下是低于實(shí)際數(shù)量的108血小板曲線不擬合的原因1.血小板原始計(jì)數(shù)小于20 109/L；2.血小板曲線不呈現(xiàn)對(duì)數(shù)正態(tài)分布；3. 血小板曲線的波峰不在3fL-15fL之

29、間；4.血小板PDW大于20%5.三次計(jì)數(shù)中任何一次沒有符合上述4點(diǎn)擬合條件109大血小板 峰頂點(diǎn)右移，在35fl處與橫坐標(biāo)重合110巨大血小板的檢測111血小板凝集 112小紅細(xì)胞干擾113(二)、血細(xì)胞散點(diǎn)圖及臨床應(yīng)用1白細(xì)胞散點(diǎn)圖114 白細(xì)胞散點(diǎn)圖正常，無報(bào)警；鏡檢白細(xì)胞分類比率正常。115 紫紅色的區(qū)域散點(diǎn)增多范圍擴(kuò)大，并顯示未成熟粒細(xì)胞1報(bào)警；鏡檢中性粒細(xì)胞分葉核和桿核比率增高。116 紫紅色的區(qū)域散點(diǎn)增多范圍擴(kuò)大，并顯示未成熟粒細(xì)胞1、未成熟粒細(xì)胞1和低透光性淋巴細(xì)胞報(bào)警；鏡檢中性粒細(xì)胞分葉核和桿核比率增高，可見5%的中幼粒和晚幼粒。117 在散點(diǎn)圖的左下角可見較多紅色散點(diǎn)，提示

30、可能存在NRBC。本例為新生兒標(biāo)本，鏡檢有6%NRBC。118 紫紅色的區(qū)域散點(diǎn)增多范圍擴(kuò)大、橘紅色的散點(diǎn)也增多，并顯示未成熟粒細(xì)胞1、未成熟粒細(xì)胞1和嗜酸性粒細(xì)胞增多報(bào)警；鏡檢可見3%的晚幼粒和14%的嗜酸性粒細(xì)胞。119 綠色的區(qū)域散點(diǎn)增多范圍擴(kuò)大，并顯示單核細(xì)胞增多、原始單核細(xì)胞和原始粒細(xì)胞等多項(xiàng)報(bào)警；鏡檢可見79%原幼單核細(xì)胞和少量巨大血小板。120解放軍總醫(yī)院 臨床檢驗(yàn)科八一 綠色的區(qū)域散點(diǎn)增多，并顯示紅細(xì)胞和血小板多項(xiàng)報(bào)警；鏡檢可見30%單核細(xì)胞和少量巨大血小板。1212、紅細(xì)胞散點(diǎn)圖 紅細(xì)胞散點(diǎn)圖反映了光散射與細(xì)胞體積、血紅蛋白濃度的關(guān)系，反映細(xì)胞體積在30-180fl、血紅蛋白

31、濃度在190-490g/L的紅細(xì)胞。1221233.常見血液病直方圖展示124IDA血象125治療后126鐵粒幼細(xì)胞性貧血 曲線峰左移，并呈“雙峰”形，峰底明顯變寬?！半p峰” 說明有大小兩種紅細(xì)胞存在127128129治療后130131132治療后133134135136137138139140141142143四.血液分析儀的評(píng)價(jià)新儀器安裝后，或每次維修后，必須對(duì)儀器的技術(shù)性能進(jìn)行測試和評(píng)價(jià)。ICSH專門公布有對(duì)血液分析儀的評(píng)價(jià)方案?？杀刃?、準(zhǔn)確性、總重復(fù)性、精密度、線性范圍和攜帶污染率。144評(píng)價(jià)項(xiàng)目1.可比性：儀器與常規(guī)方法所測結(jié)果相比較有無顯著性差異。2.準(zhǔn)確性：測定結(jié)果與真值一致性的

32、程度。3.總重復(fù)性：同一份標(biāo)本多次測量的結(jié)果接近程度。4.精密度：同一批樣本或兩批以上樣本重復(fù)測定結(jié)果的變異情況。5.線性范圍（稀釋效果）：測定值與稀釋倍數(shù)是否成比例關(guān)系。6.攜帶污染率：前一個(gè)高值樣本對(duì)下一個(gè)低值樣本結(jié)果的影響。7.白細(xì)胞分類：（1）重復(fù)性：觀察同一份標(biāo)本多次測定能否得到非常接近的結(jié)果。（2）準(zhǔn)確性：即與顯微鏡檢查結(jié)果的相關(guān)程度。（3）對(duì)病理細(xì)胞的測定。145五、血液分析儀質(zhì)量控制及復(fù)檢規(guī)則分析前質(zhì)量控制分析中質(zhì)量控制分析后質(zhì)量控制146（一）分析前質(zhì)量控制1人員素質(zhì)的質(zhì)量保證文化素質(zhì)：計(jì)算機(jī)及英語水平、醫(yī)用電子知識(shí)；技術(shù)素質(zhì)：熟練操作能力；思想素質(zhì)：良好職業(yè)道德及獻(xiàn)身精神2

33、儀器安裝的質(zhì)量保證室內(nèi)溫度：1525，最適：20稀釋液溫度：1822，如30有影響相對(duì)濕度：80%防塵：由于檢測微孔R(shí)BC、PLT：80um，WBC：100um，應(yīng)防止灰塵的影響（1）環(huán)境的溫度、濕度和塵度（2）通風(fēng)好、防潮、防陽光直射、避開有水濺和潮濕 的場所（3）儀器安裝在遠(yuǎn)離電磁干擾源、熱源、震源的地方，不能和空調(diào)、電冰箱等共用一個(gè)電源插座，盡量避免2m3m，不要以電源插頭的插撥開關(guān)儀器（4）應(yīng)放在不振動(dòng)、水平、結(jié)實(shí)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，儀器上面不要放置樣品杯或其它物品總之：環(huán)境清潔、電壓穩(wěn)定、接好地線是安裝、使用血cell分析儀的三個(gè)主要質(zhì)量要素147血常規(guī)樣本的制備靜脈采血、并立即和抗凝劑充分

34、混勻抗凝劑濃度必須適宜試管必須潔凈，最好為一次性真空采血管通常樣本采集后24小時(shí)內(nèi)完成常規(guī)檢測做網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測必須在8小時(shí)內(nèi)完成樣本必須室溫下放置148抗凝劑的使用問題抗凝劑推薦使用EDTA-K2或Na2抗凝劑濃度為15g/dL，取20ul可抗凝1.5-2.0ml靜脈血血細(xì)胞遇到抗凝劑會(huì)出現(xiàn)短時(shí)間的收縮，再逐漸平衡，恢復(fù)原來大小，通常這一時(shí)間為幾分鐘，極少數(shù)樣本需要幾十分鐘如果抗凝劑濃度過高，將使平衡時(shí)間延長，影響檢測149樣本長期靜置對(duì)分類的影響 標(biāo)本靜立34小時(shí)以上標(biāo)本靜立導(dǎo)致細(xì)胞分層，產(chǎn)生特殊微環(huán)境重新混合后細(xì)胞需重建平衡，通常需要30分鐘 糾正的方法：間隔性混勻30分鐘后再測150（二

35、）分析中質(zhì)量控制1每天開機(jī)前檢查2試劑最好使用原裝儀器的配套試劑；溫度：1822；半自動(dòng)血細(xì)胞儀嚴(yán)格掌握使用溶血?jiǎng)┯昧考叭苎獣r(shí)間4操作規(guī)程5受檢者生理狀態(tài)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響6注意儀器的報(bào)警、提示7注意病理因素對(duì)血液分析儀使用的影響3標(biāo)本要求：無溶血；充分混勻151（1）某些疾?。杭t細(xì)胞冷凝: RBC低，Hb高，Hct、MCV無數(shù)字，37水浴或新鮮血立即上機(jī)可消除。（2）白細(xì)胞增高：低色素性貧血或RBC內(nèi)含有大量HbS或HbCo； MM時(shí)M蛋白增高；（3）小紅細(xì)胞引起血小板增高：（4）血小板過多、血小板聚集：（5）血小板遇抗凝劑凝固: Plat低，MPV、Pct無數(shù)字（6）高脂血癥使Hb假性升高:（

36、7）各種白血病直方圖、散點(diǎn)圖有變化152 8、人為因素對(duì)分析儀使用的影響（1）低血量的結(jié)果判斷：某些項(xiàng)目結(jié)果異常減低（2）沒有混勻的判斷:RBC、Hb異常增高，WBC、PLAT下降（3）其他操作失誤：如有凝塊153樣本本身的干擾問題（I）一.細(xì)胞聚集紅細(xì)胞聚集：常見于溫度低時(shí)患者血樣發(fā)生自身冷凝集，通常將血樣37攝氏度溫育15分鐘后再檢測，可消除血小板聚集：常見于采血不順利、抗凝不充分、試管質(zhì)量差二.低能量白細(xì)胞 指衰老或生理異常白細(xì)胞，這些白細(xì)胞在經(jīng)歷E-lyse和S-lyse作用后通常不能或不能很快恢復(fù)到原態(tài)，影響分類154樣本本身的干擾問題（II）三.藥物、激素影響的樣本如長期化學(xué)藥物治

37、療、孕婦等四.一些特殊的不分類的樣本如肝病、慢性腎病、黃疸、新生兒等血樣本，將不分類，并報(bào)警PC2原因可能是紅細(xì)胞表面負(fù)電荷增多，對(duì)S-lyse溶血?jiǎng)┚哂械挚棺饔?，?dǎo)致不分類并報(bào)PC2處理方法：稀釋后重新檢測，取分類結(jié)果155檢測溫度的影響低于20攝氏度時(shí)，儀器出現(xiàn)不分類原因?yàn)榈蜏赜绊懭苎獎(jiǎng)┑淖饔?處理方法：提前開機(jī)預(yù)熱加熱Pak試劑包156（三）分析后質(zhì)量控制保留標(biāo)本備查重視室內(nèi)質(zhì)控加強(qiáng)質(zhì)控小組的責(zé)任分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果各參數(shù)間關(guān)系加強(qiáng)與臨床聯(lián)系積極參加室間質(zhì)量控制1571.根據(jù)儀器對(duì)細(xì)胞形態(tài)識(shí)別能力，決定篩選標(biāo)準(zhǔn)的寬嚴(yán)程度;識(shí)別越差，標(biāo)準(zhǔn)越嚴(yán)；2.篩選范圍要涵蓋所有人工鏡檢范圍；3.在保證篩選質(zhì)量

38、基礎(chǔ)上，盡量使復(fù)檢率低；4.假陰性率是關(guān)鍵參數(shù)，具有診斷意義的重要參數(shù)不能出現(xiàn)假陰性，其他參數(shù)假陰率也要盡可能最低；5.在低假陰性率前提下,調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)降低假陽性6.不同型號(hào)儀器篩選標(biāo)準(zhǔn)不同；同一型號(hào)儀器，由于醫(yī)院規(guī)模、病種差異和實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理要求不同，標(biāo)準(zhǔn)也不同。復(fù)檢規(guī)則制定原則1581.白血病患者(無論初診還是復(fù)診)不能篩選；2.臨床醫(yī)生提出閱片者，必須鏡檢；3.篩選復(fù)檢率取決于實(shí)驗(yàn)室對(duì)篩選的需要，患者病種及臨床的要求，復(fù)檢率沒有固定的要求。4.制定的篩選標(biāo)準(zhǔn)必須經(jīng)過驗(yàn)證后方可使用。當(dāng)任何原因?qū)е聶z測系統(tǒng)改變時(shí)，要經(jīng)驗(yàn)證后才可繼續(xù)使用。篩選標(biāo)準(zhǔn)使用原則159160六.全自動(dòng)血液分析儀的可靠性問

39、題1.結(jié)論（1）計(jì)數(shù)結(jié)果和血紅蛋白是準(zhǔn)確可靠的，這是不容置疑的。（2）白細(xì)胞分類結(jié)果具有篩檢異常標(biāo)本的功能，具有參考價(jià)值。（3）三分群結(jié)果不能作為最終報(bào)告發(fā)出，五分類有限度的可作為最終結(jié)果發(fā)出。（4）直方圖可作為個(gè)體標(biāo)本質(zhì)控和工作人員判斷該標(biāo)本數(shù)據(jù)是否可靠的工具。（5）數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠的前提是機(jī)器性能維護(hù)在最佳狀態(tài)。1612.計(jì)數(shù)可靠性的保障（1）多種技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用為了保證血細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，儀器采用了計(jì)數(shù)周期控制技術(shù)，樣品進(jìn)樣和防堵孔技術(shù)，燃燒電路，掃流技術(shù)，鞘流技術(shù)，防返流裝置Von Behrens感應(yīng)器，延遲計(jì)數(shù)，浮動(dòng)界標(biāo)和擬合曲線等措施。162（2）無人為因素的干擾全自動(dòng)采樣、進(jìn)樣、稀釋、

40、分配、計(jì)數(shù)，液體定量方面有國外嚴(yán)格的認(rèn)證，不存在個(gè)人因素對(duì)液體量、稀釋倍數(shù)、計(jì)數(shù)形成的主觀干擾，也不存在計(jì)數(shù)區(qū)域誤差，所有標(biāo)本的測試條件都是相同的。163（3）采用靜脈血，反映全身狀況更有代表性。（4）全封閉式采血，避免灰塵顆粒進(jìn)入血樣標(biāo)本造成計(jì)數(shù)結(jié)果假性增高，同時(shí)防止水分蒸發(fā)。（5）所用稀釋液、溶血?jiǎng)┤抗S化生產(chǎn)，有質(zhì)量認(rèn)證，沒有自配試劑，全封閉使用，內(nèi)有防腐劑，無霉菌生長。（6）嚴(yán)格的室內(nèi)、室間質(zhì)量控制保證體系。（7）異常結(jié)果直方圖上會(huì)有反映，如血凝、紅細(xì)胞碎片。1643.手工計(jì)數(shù)和自動(dòng)血液分析儀計(jì)數(shù)的比較手工計(jì)數(shù)全自動(dòng)計(jì)數(shù)末梢采血靜脈采血開放式采血、輸送、測定封閉式采血、輸送、測定，無

41、灰塵進(jìn)入、霉菌生長標(biāo)本用量小，抽樣誤差大標(biāo)本用量大，抽樣誤差小存在計(jì)數(shù)域誤差不存在計(jì)數(shù)域誤差存在主觀因素干擾無主觀因素干擾人為因素誤差會(huì)放大不存在不容易質(zhì)控、監(jiān)控不易標(biāo)準(zhǔn)化容易質(zhì)控、監(jiān)控，異常顆粒直方圖有反映，易標(biāo)準(zhǔn)化1654.機(jī)器計(jì)數(shù)的缺陷（1）對(duì)過分異常、過大過小的顆粒會(huì)誤計(jì)數(shù)。（2）機(jī)器計(jì)數(shù)往往是整批誤差，損失大。（3）低值結(jié)果變異系數(shù)（CV）增大，手工計(jì)數(shù)也存在此問題。1665.不正確的觀念（1）非標(biāo)準(zhǔn)手工計(jì)數(shù)結(jié)果去校正全自動(dòng)的血球計(jì)數(shù)設(shè)備必須用標(biāo)準(zhǔn)物去校正，定值質(zhì)控物嚴(yán)格說也不行。緊急情況下可采取多人、多次按標(biāo)準(zhǔn)手法手工計(jì)數(shù)取均值，前提是吸管、微量吸管、計(jì)數(shù)池、稀釋液、混勻方法、充液

42、方法必須標(biāo)準(zhǔn)化。167（2）認(rèn)為手工計(jì)數(shù)比儀器計(jì)數(shù)準(zhǔn)確情況要具體分析，兩種計(jì)數(shù)的方法學(xué)不一樣，本身就存在方法學(xué)的差異。儀器準(zhǔn)的前提是機(jī)器質(zhì)量好、性能維護(hù)在最佳狀態(tài)。手工準(zhǔn)的前提手法和所用物品需標(biāo)準(zhǔn)化。兩者相比儀器計(jì)數(shù)由于容易標(biāo)準(zhǔn)化，因此可靠性概率要高于手工計(jì)數(shù)，且機(jī)器計(jì)數(shù)出錯(cuò)時(shí)易被發(fā)現(xiàn)和監(jiān)控到。168七、HMX常見的旗標(biāo)和代碼旗標(biāo)(數(shù)值后):R 結(jié)果需復(fù)核*R 計(jì)數(shù)受干擾H 結(jié)果高于參考范 圍上限L 結(jié)果低于參考 范圍下限代碼(替代數(shù)值):- 三次計(jì)數(shù)比統(tǒng)一. 不完全計(jì)算+ 結(jié)果超出操作范圍: 流式通道堵塞? 數(shù)據(jù)無效169白細(xì)胞計(jì)數(shù)值后出現(xiàn) *R的臨床意義說明白細(xì)胞在35fl處的檢測受到干擾

43、.在白細(xì)胞計(jì)數(shù)孔有35fl大小的顆粒通過并被當(dāng)作白細(xì)胞計(jì)數(shù),且超過一定數(shù)量,觸發(fā)報(bào)警在白細(xì)胞直方圖上看,曲線在35fl處上抬170正常情況異常情況171導(dǎo)致 *R出現(xiàn)的可能原因小白細(xì)胞有核紅細(xì)胞、抗溶紅細(xì)胞紅細(xì)胞聚集,大血小板,血小板聚集溶血?jiǎng)┹斔拖到y(tǒng)故障172RDW后出現(xiàn) R 的臨床意義紅細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)儀器計(jì)數(shù) 24fl 360fl的顆粒,繪出直方圖,正常紅細(xì)胞直方圖應(yīng)為兩端封閉、單峰、呈高斯分布的曲線.RDW反應(yīng)紅細(xì)胞大小分布的偏離情況,其意義相當(dāng)于 CV%(變異系數(shù)).導(dǎo)致的原因：輸血紅細(xì)胞凝集紅細(xì)胞碎片大血小板血小板凝集成塊處理方法：涂片鏡檢紅細(xì)胞是否大小不一173174PLT結(jié)果后出現(xiàn) R旗標(biāo)的臨床意義儀器進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)時(shí),計(jì)數(shù) 2fl 20fl的血小板數(shù)量,再擬合出一條 0fl 70fl的曲線,目的是為了排除計(jì)數(shù)