1、關(guān)于菊花組織培養(yǎng)和月季花藥培養(yǎng)第一張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月 通過必修課的學(xué)習(xí)，我們已經(jīng)了解到大多綠色開花植物都是靠種子來繁殖的。那么，有沒有不用種子來培育植物的方法呢？ 組織培養(yǎng)營養(yǎng)繁殖扦插嫁接壓條 第二張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月扦插嫁接壓條 第三張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月是指在人工培養(yǎng)基上，離體培養(yǎng)植物的器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體，并使其生長、增殖、分化以及再生植株的技術(shù)。 組織培養(yǎng)（一）植物組織培養(yǎng)的基本過程第四張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月（1）基礎(chǔ)知識細(xì)胞離體必要條件：一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件原理:細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞具有

2、全能性，即已分化的細(xì)胞，具有使后代細(xì)胞形成完整個體的潛能。原理： 定義： 生物體的每一個細(xì)胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)，都有發(fā)育成為完整個體所必需的全部基因第五張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞的分化概念：在個體發(fā)育中，相同細(xì)胞的后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程 結(jié)果：形成不同的細(xì)胞和組織原因：基因在特定的時間和空間條件下的選擇性表達(dá)的結(jié)果第六張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月離體的植物器官、組織、細(xì)胞脫分化愈傷組織再分化根芽植物體植物組織培養(yǎng)的基本過程第七張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月愈傷組織第八張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）

3、影響植物組織培養(yǎng)的因素1.不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差別很大。 例如，煙草和胡蘿卜的組織培養(yǎng)較為容易，而枸杞愈傷組織的芽誘導(dǎo)就比較難。因此，植物材料的選擇直接關(guān)系到實驗的成敗。對于同一種植物材料，材料的年齡、保存時間的長短等也會影響實驗結(jié)果。菊花的組織培養(yǎng)，一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝。第九張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月2.離體的植物組織和細(xì)胞，對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對特殊，需要配制適宜的培養(yǎng)基。 常用的一種培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基。其主要成分包括：大量元素，如N、P、K、Ca、Mg、S;微量元素，如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；有機(jī)物，如甘氨酸、煙酸、肌醇

4、、維生素，以及蔗糖等。在配制好的MS培養(yǎng)基中，常常需要添加植物激素。與培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基有何不同？第十張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月MS固體培養(yǎng)基成分及比例第十一張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)，無機(jī)鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。閱讀課文，思考以下問題1. 同微生物培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？2、你認(rèn)為組織培養(yǎng)過程中，成功的關(guān)鍵有哪些？這些步驟的適宜條件是什么？組織的脫分化及愈傷組織的再分化。植物組織培養(yǎng)過程中，影響植物細(xì)胞脫分化、再分化的最重要因素是植物激素，

5、細(xì)胞分裂素與生長素之間的濃度比可以調(diào)控植株組培過程中芽和根的形成。 第十二張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月3.植物激素濃度、使用的先后順序以及用量的比例等，會影響實驗結(jié)果。 植物激素中生長素和細(xì)胞分裂素是啟動細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。按照不同的順序使用這兩類激素，會得到不同的實驗結(jié)果。第十三張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月當(dāng)同時使用這兩類激素時，兩者用量的比例決定著發(fā)育的方向，是愈傷組織、長根還是長芽。如為了促進(jìn)芽器官的分化，應(yīng)除去或降低生長素的濃度，或者調(diào)整培養(yǎng)基中生長素與細(xì)胞分裂素的比例。 高 利于根的分化，抑制芽的形成 生長素/細(xì)胞分裂素 適中 利于促進(jìn)愈傷組

6、織的形成 低 利于芽的分化，抑制根的形成4.除了上述因素外，PH、溫度、光照等條件也很重要。 不同的植物對各種條件的要求往往不同。進(jìn)行 菊花的組織培養(yǎng)，一般將PH值控制在5.8左右，溫度控制在18-22，并且每日用日光燈照射12h。第十四張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月生長素/細(xì)胞分裂素高 有利于根的分化、抑制芽的形成低 有利于芽的分化、抑制根的形成第十五張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）制備MS固體培養(yǎng)基（二）外植體消毒（三）接種（四）培養(yǎng)（五）移栽（六）栽培二、實驗操作第十六張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月二、實驗操作（一）制備MS固體培養(yǎng)基1、配置各種母液2、

7、配置培養(yǎng)基3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌第十七張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月1、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右第十八張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月 酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70的酒精中搖動23次，持續(xù)67s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗 消毒液處理 取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1的氯化汞溶液中12min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液第十九張，PPT共六十頁，創(chuàng)

8、作于2022年6月（三）接種污染的主要來源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至關(guān)重要的。用70的酒精噴霧使空氣消毒， 酒精或新潔爾滅搽洗工作臺并用紫外線照射20分鐘1、接種室消毒2、無菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。第二十張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十一張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒。培養(yǎng)溫度控制在18-22，并且脫分化形成愈傷組織后，每日用日光燈光照12h。第二十二張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)

9、先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長幾日1、打開封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時間第二十三張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月（六）栽培3、移栽珍珠巖：固體基質(zhì)型，含水量高、蓄水性強(qiáng)、透性好，適合栽培幼苗長壯后，移栽到土壤中幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長情況，適時澆水、施肥，直至開花第二十四張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十五張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月課堂2 月季的花藥培養(yǎng)第二十六張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月1、被子植物定義：凡是種子有果皮包被著，胚珠有子房壁包被著的植物，就叫做被

10、子植物一、被子植物和裸子植物2、裸子植物定義：凡是胚珠裸露，外面沒有子房壁包被，種子外面沒有果皮包被的植物稱為裸子植物實例：玉米、大豆、梨、杏實例：松、杉、柏第二十七張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十八張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十九張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月3、花的結(jié)構(gòu)第三十一張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月4、花的作用被子植物的有性生殖是在花里進(jìn)行的，雌蕊和雄蕊是進(jìn)行有性生殖的主要部分二、被子植物花粉粒的形成花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉粒1、雄蕊的結(jié)構(gòu)雄蕊：第三十二張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于

11、2022年6月藥隔：花藥中部，由薄壁細(xì)胞構(gòu)成，內(nèi)有維管束花藥花粉囊（4或2）囊壁花粉粒表皮纖維層2、花藥的結(jié)構(gòu)第三十三張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月花粉是小孢子母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞3、被子植物的花粉發(fā)育花粉粒的形成花粉母細(xì)胞（小孢子母細(xì)胞）減數(shù)分裂經(jīng)歷時期：四分體時期、單核期、雙核期第三十四張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月四分體時期（進(jìn)入單核期）有絲分裂單核靠邊期(小孢子)單核居中期(小孢子) 小孢子（單核花粉粒）第三十五張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月精子精子有絲分裂花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核生殖細(xì)胞營養(yǎng)細(xì)胞雙核期兩個精子和一個營養(yǎng)核

12、的基因型相同第三十六張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月1花粉母細(xì)胞4個小孢子減分有分4個花粉管細(xì)胞核4個生殖細(xì)胞核有分8個精子第三十七張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十八張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月四、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑五、影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇接種的花藥時期第三十九張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月選擇合適的花粉發(fā)育時期是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素因為并不是任何時期的花粉都可以經(jīng)過培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體，花粉發(fā)育的過程中，只有某一個時期對離體刺激敏感。選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵選材第四十張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月最適合花藥

13、培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時期為單核靠邊期選擇單核期以前的花藥接種，質(zhì)地幼嫩，極易破碎；選擇單核期之后的花藥接種，花瓣已有些松動，又給材料的消毒帶來困難，且難以挑選到單核期的花藥。花藥培養(yǎng)時期的選擇其它時期選擇的缺點第四十一張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月 花藥培養(yǎng)時間為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。盛開的或略微開放的花，都不宜選作實驗材料。選擇完全未開放花蕾的原因 完全未開放的花蕾，可挑選到單核期的花藥，菌少、易消毒單核期花藥的挑選一般月季的花藥培養(yǎng)時間選在五月初到五月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾營養(yǎng)狀態(tài)及生理狀態(tài)會比較好，可能提高花粉的誘導(dǎo)成功率第四十二張，PPT共

14、六十頁，創(chuàng)作于2022年6月月季花藥培養(yǎng)時的花粉粒最好是（ ） A、四分體時期 B、單核居中期 C、單核靠邊期 D、二核或三核花粉粒C2、培養(yǎng)基：花藥培養(yǎng)基所采用的培養(yǎng)基可能因植物的不同而有所變化小麥中為N6，馬鈴薯、月季中為MS，油菜中為B5培養(yǎng)基第四十三張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。六、實驗操作（一）材料的選取最常用的方法有醋酸洋紅法1、確定花粉發(fā)育時期方法：第四十四張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月醋酸洋紅法染色機(jī)理醋酸洋紅為堿性染色劑，而花粉細(xì)胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是DNA和蛋白

15、質(zhì),易被堿性染料著色染成紅色 。醋酸洋紅的配置2、醋酸洋紅法第四十五張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月將花藥放在載玻片上，加一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)1的醋酸洋紅，用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查。染色操作3、焙花青鉻釩法將無水酒精與冰醋酸按體積比為3：1的比例混勻卡諾氏固定液的配制方法作用：能迅速穿透細(xì)胞,將其固定并維持染色體結(jié)構(gòu)的完整性,還要能夠增強(qiáng)染色體的嗜堿性, 達(dá)到優(yōu)良染色效果。 第四十六張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月花藥應(yīng)該在卡諾氏固定液中固定20min，然后取出放在載玻片上，加焙花青鉻釩溶液染色，蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查。焙花青鉻釩溶液的配制方法染色操作第四十七張，

16、PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）材料的消毒1、酒精處理花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30秒，立即取出。無菌水清洗無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分第四十八張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月2、消毒液處理（三）接種和培養(yǎng) 放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中24分鐘（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液） 無菌水沖洗35次用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。第四十九張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組

17、織或胚狀體的形成立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個。1、剝?nèi)』ㄋ幬饟p傷花藥，以免誘導(dǎo)出非花粉愈傷組織2、接種注意：第五十張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)條件：溫度控制在25左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 3、培養(yǎng)培養(yǎng)：一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體長出愈傷組織則將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株注意：如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。第五十一張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6

18、月在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化（主要原因是營養(yǎng)核和生殖核融合造成的）4、鑒定和篩選第五十二張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月5、植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點：項目相同點不同點植物組織培養(yǎng)技術(shù)離體的植物組織經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再分化成叢芽，誘導(dǎo)出根，然后進(jìn)行移栽。外植體為體細(xì)胞，染色體數(shù)無需加倍?；ㄋ幣囵B(yǎng)技術(shù)取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不育，必須用秋水仙素處理，使染色體加倍，恢復(fù)正常植株的染色體數(shù)，而且為純種。注意花藥離體培養(yǎng)和單倍體育種的區(qū)別第五十三張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月選學(xué)1、雌蕊的組成柱頭、花柱、子房2、子房的結(jié)構(gòu)第五十四張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月被子植物子房的結(jié)構(gòu)胚珠的結(jié)構(gòu)花粉管精 子卵細(xì)胞極核子房壁珠被珠孔第五十五張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月第五十六張，PPT共六十頁，創(chuàng)作于2022年6月花粉落到雌蕊柱頭上以后，在柱頭上黏液的刺激下，花粉開始萌發(fā)并形成花粉管，花粉管沿著花柱向胚珠方向生長，到達(dá)胚珠后從珠孔繞過