1、PCR技術(shù)在食品微生物檢測中應(yīng)用 由于PCR技術(shù)在食品檢測實際應(yīng)用中具有良好的效果，可快速檢測出多種菌類，檢測率極高，使其近些年來得以廣泛推廣，是當前最常見的食品微生物檢測技術(shù)之一，為我國食品平安管理起到了積極的促進作用【1】。1PCR技術(shù)概述1.1PCR技術(shù)。PCRPolymeraseChainReaction技術(shù)是指基于DNA聚合酶所具有的作用，將雙鏈DNA進一步分解為單鏈，在堿基互補配對原那么的根底上，實現(xiàn)單鏈DNA分子的復(fù)制與拷貝【2】。多重PCR又稱多重引物PCR或者復(fù)合PCR，它在食品微生物檢測中的應(yīng)用價值主要在于可以對多種微生物進展同時檢測或者鑒定，通過在同一PCR反響體系中同時

2、參加兩種或兩種以上微生物DNA的特異性引物，進展擴增，并形成多個核酸片段，從而到達檢測食品微生物的目的【3】。1.2食品微生物檢測。在我國現(xiàn)有的食品管理體系中，食品微生物檢測的概念主要包括兩個方面：即食品污染程度指示菌檢測和食品致病菌檢測【4】。其詳細工作流程是在對檢測對象進展取樣處理后，根據(jù)實驗條件檢驗所取樣品中的細菌菌落數(shù)，或者檢測在對應(yīng)標準中要求的微生物限量值，有些檢測還需要對可能的致病菌進展測定。這兩個方面的檢測是需要同時進展的，只有在所有關(guān)鍵指標都到達要求的情形下，才能確保食品平安到達要求。1.3常見PCR技術(shù)分類PCR技術(shù)根據(jù)應(yīng)用形式的不同，通?？煞譃槌Ｒ?guī)PCR技術(shù)、多重PCR技術(shù)

3、、RT-PCR技術(shù)及熒光PCR技術(shù)等幾種類型【5】。常規(guī)PCR技術(shù)所需要使用的樣本數(shù)量較少，技術(shù)應(yīng)用簡單，準確性強，常被應(yīng)用于單核細胞增多癥等方面的檢測中，通常情形在12-24h內(nèi)可以完成全部檢測流程。多重PCR技術(shù)基于不同PCR技術(shù)類別具有互補性，其別離速度快、檢測準確率高，但是對技術(shù)應(yīng)用程度和設(shè)備等具有較高的要求，因此應(yīng)用范圍受到一定限制。RT-PCR技術(shù)是在提取微生物中RNA并進展模板構(gòu)建的根底上，與PCR技術(shù)相結(jié)合的新型檢測技術(shù),可以有效分辨生物特征，提升檢測準確率。熒光PCR技術(shù)是對熒光分子進展染色處理，根據(jù)微生物的特異性對基因標靶進展實時檢測，它的特點是能在較短時間內(nèi)檢測出對多種病

4、原體。1.4PCR技術(shù)應(yīng)用的優(yōu)勢PCR技術(shù)在應(yīng)用于食品微生物檢測時所具有的優(yōu)勢是相對于傳統(tǒng)檢測技術(shù)而言，在實際應(yīng)用中具有應(yīng)用便捷的特征，它可以縮減檢測程序，在幾小時或者一天之內(nèi)就可以獲取檢測結(jié)果，提升食品平安現(xiàn)場管理工作的整體效率。PCR技術(shù)相對于傳統(tǒng)生化檢測技術(shù)而言，自動化程度更高，可以基于生化實驗結(jié)果，更加精準的檢測出食品中的微生物含量，確保食品平安管理程度不斷提升【6】。2PCR技術(shù)在食品微生物檢測中的詳細應(yīng)用2.1在海水產(chǎn)品副溶血弧菌中的應(yīng)用。副溶血性弧菌VP為嗜鹽性細菌，主要侵染海水產(chǎn)品和鹽含量較高的食品，是引發(fā)急性胃腸炎的重要食源性疾病原菌之一。有研究說明，沿海國家和地區(qū)的海水產(chǎn)品

5、受VP污染較為嚴重，在魚類、貝類、甲殼類、軟體類中的檢出率較高，而受污染程度與海產(chǎn)品的類別、海域環(huán)境條件相關(guān)聯(lián)。近年來，淡水產(chǎn)品中VP污染呈現(xiàn)上升趨勢，表現(xiàn)出多物種、多環(huán)節(jié)以及季節(jié)性的高污染特征。目前，食品中VP的檢測可以分為傳統(tǒng)檢測方法與快速檢測方法。傳統(tǒng)的VP檢測方法由于方便價廉被普遍使用，但存在消耗時間長、靈敏度低的缺點，如GB4789.7-2021和SN/T0173-2021。隨著技術(shù)的革新，食品中VP的快速檢測方法得以開展，各專業(yè)公司研制出快速、簡便、特異性強的檢測方法，如：北京良潤生物科技研制的副溶血性弧菌核酸檢測試劑盒;PCR-探針法，對提升食品平安檢測質(zhì)量具有重要意義。目前，文

6、獻報道的食品中VP快速檢測方法約有22種，如：以細菌培養(yǎng)和生化鑒定為根底的顯色培養(yǎng)基法、以分子生物學為根底的PCR-變性高效液相色譜法、以免疫學為根底的免疫膠體金技術(shù)ICG法、以噬菌體特異性為根底的噬菌體鑒定技術(shù)、以生物識別和信號轉(zhuǎn)換為根底的生物傳感器技術(shù)、以細胞分子程度、單克隆抗體為根底的流式細胞術(shù)【7】。2.2在生鮮食品中食源性病原微生物檢測中的應(yīng)用。生鮮食品是指未進展加工或者僅進展初步加工就可以直接食用的食品，常見的有水產(chǎn)品、肉制品及水果蔬菜類等。采用多重PCR技術(shù)對生鮮食品進展檢測，可以改變傳統(tǒng)檢測技術(shù)中存在的問題。由于多重PCR技術(shù)具有對多種病原微生物都具有較高的明暗性和特異性，并且

7、在檢驗非活菌時具有良好的檢測效果，因此可以防止假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。有學者采用多重PCR技術(shù)，在2h時間之內(nèi)，對生鮮食品中的單增李斯特菌含量進展了檢測。也有學者采取多重PCR技術(shù)進展檢測時，在4h之內(nèi)檢測出了6種食源性病微生物。還有學者研究兩套巢式PCR檢測引物，其檢測靈敏度可達3.55x10-10ng/L，比常規(guī)PCR檢測的靈敏1萬倍。由此可見，多重PCR技術(shù)在生鮮食品食源性病原微生物檢測中，有良好的應(yīng)用效果。2.3在乳制品沙門氏菌檢測中的應(yīng)用。乳制品質(zhì)量控制是食品平安管理的重要方面，在乳制品消費中，假如消費環(huán)境控制技術(shù)應(yīng)用不當，極有可能造成乳制品感染病原微生物。乳制品傳統(tǒng)的檢測方式是對微生物進

8、展培養(yǎng)后，采用生化反響進展檢測，不僅檢測速度較慢，而且整體準確率較低?；赑CR技術(shù)對乳制品進展沙門氏菌進展檢測，可以實現(xiàn)對特定目的片段的擴增，通過Mg2+對TaqDNA聚合酶進展催化，從而確保其活化性能得到提升，實現(xiàn)片段擴增的目的。有學者在進展沙門氏菌檢測時，通過現(xiàn)代PCR檢測技術(shù)和免疫磁珠技術(shù)建立了磁珠富集+PCR檢測;的快速高效方法，為食品檢測前處理時間縮短提出了新的解決思路。有學者在進展復(fù)合調(diào)味料沙門氏菌檢測時，先按照國標方法增菌，再涂布BS和XLD平板，根據(jù)沙門氏菌的特定序列設(shè)計引物，挑出疑似菌落進展菌液PCR反響，進步檢測準確率，縮短對沙門氏菌的檢測時間。2.4在大腸桿菌檢測中的應(yīng)

9、用。大腸桿菌是具有毒性的微生物類型，并且這些毒性具有較高的一致性，傳統(tǒng)的檢測方式主要是以血清微生物法進展檢測，在準確率方面存在一定的缺陷。PCR技術(shù)在微生物檢測應(yīng)用中，主要是對大腸桿菌的DNA雙鏈進展檢測，通過免疫磁別離技術(shù)與PCR技術(shù)相結(jié)合，可以提升大腸桿菌的檢測準確率，并且進展更加深化的分析,檢測準確率的進步對于確保食品平安具有重要意義。有學者通過設(shè)計PCR體系擴增不同菌株的基因部分序列，證實一些基因作為靶基因可以用于開發(fā)PCR技術(shù)，檢測食品中的大腸桿菌。3展望PRC技術(shù)應(yīng)用前景PCR技術(shù)作為食品微生物檢測的重要技術(shù)之一，已經(jīng)獲得了良好的應(yīng)用效果，為推動我國食品平安管理起到了積極的促進作用

10、，在將來開展中，PCR技術(shù)的應(yīng)用主要朝著三個方面開展：首先是對DNA和RNA模板的純度方面，具有更高的要求，這是確保PRC技術(shù)應(yīng)用提升準確率的重要前提。其次是在PRC技術(shù)應(yīng)用中，還存在檢測靈敏度缺乏而出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象，需要提升檢測準確率和技術(shù)應(yīng)用的程度。另外，PCR技術(shù)在技術(shù)應(yīng)用過程中，與數(shù)據(jù)分析和處理的結(jié)合度將會更加親密。為了明確PCR技術(shù)開展的詳細前景和詳細方向，需要針對現(xiàn)階段食品微生物檢測技術(shù)在應(yīng)用過程中存在的詳細問題進展合理的分析及解決，確保可以在進步食品微生物檢測技術(shù)應(yīng)用效率的根底上進步檢測的準確性。不同品種的食品進展平安檢測，需要具備不同的檢測設(shè)備和檢測技術(shù)，而負責相關(guān)檢測儀器設(shè)備使用的工作人員要明確先進的儀器設(shè)備的詳細操