1、UDKH基因治療犬下肢缺血后對(duì)血管、肌肉構(gòu)造的影響哈小琴，趙治華，呂同德，李元敏，任建平，吳祖澤【關(guān)鍵詞】pUDKH基因；血管；肌肉；構(gòu)造病理【Keyrds】pUDKH；artery；usle；histpathlgy【摘要】目的:不雅察pUDKH(攜帶肝細(xì)胞生長因子基因的質(zhì)粒)基因治療犬下肢缺血后對(duì)其血管和肌肉構(gòu)造病理學(xué)的影響.要領(lǐng):雜種犬在靜脈內(nèi)注射苯巴比妥鈉麻醉下，于左后側(cè)腹股溝在股動(dòng)脈由髂外動(dòng)脈分支處的起始端舉行全結(jié)扎，造成肢體缺血模子.模子犬被隨機(jī)分為比擬組和pUDKH處置懲罰組，并在結(jié)扎后馬上別離注射pUDK空缺質(zhì)粒或pUDKH.于手術(shù)后3，行左髂外動(dòng)脈造影術(shù)，測定股動(dòng)脈血流量和下肢

2、遠(yuǎn)端局部溫度，并從被結(jié)扎的后肢股動(dòng)脈及表里側(cè)肌肉取構(gòu)造標(biāo)本，經(jīng)通例構(gòu)造病理切片染色，光學(xué)顯微鏡下不雅察.效果:3時(shí)血管造影pUDKH組可見顯著血管網(wǎng)的形成，而轉(zhuǎn)移空質(zhì)粒的比擬組僅見少量新生血管；此時(shí)轉(zhuǎn)移pUDKH組犬股動(dòng)脈血流量已規(guī)復(fù)到結(jié)扎前的程度，而比擬組股動(dòng)脈血流量僅為結(jié)扎前的1/51/3；轉(zhuǎn)移pUDKH組結(jié)扎側(cè)肌肉溫度與健側(cè)比擬無顯著差異，而比擬組兩肢體肌肉溫度卻相差12.構(gòu)造學(xué)不雅察比擬犬可見結(jié)扎點(diǎn)遠(yuǎn)端股動(dòng)脈塌陷，肌束間動(dòng)脈管壁變厚，管腔變小乃至消散，少見新生的小血管；pUDKH處置懲罰組犬結(jié)扎點(diǎn)遠(yuǎn)端股動(dòng)脈管腔開放，肌束間小動(dòng)脈壁均普及未見增厚，管腔亦未縮??；比擬犬結(jié)扎側(cè)肌纖維變性、斷

3、裂、肌束內(nèi)水腫、脂肪性變，pUDKH處置懲罰組結(jié)扎側(cè)的肌肉構(gòu)造中上述病變不顯著.結(jié)論：pUDKH的局部注射對(duì)犬下肢缺血后血管和肌肉具有庇護(hù)作用.【關(guān)鍵詞】pUDKH基因；血管；肌肉；構(gòu)造病理0弁言下肢缺血重要是血栓閉塞性脈管炎或糖尿病性下肢中小血管病變、四周精神病變等所造成的下肢慢性缺血，涉及血管、神經(jīng)、肌肉等構(gòu)造的病變，當(dāng)病變希望而淘汰了動(dòng)脈的橫截面積至80%或更多時(shí)，患者表示間歇性跛行、成效停滯,乃至肢體壞死壞疽.如今對(duì)此尚無抱負(fù)的藥物治療要領(lǐng)，終極需行截肢手術(shù)而致殘，預(yù)后較差1-4.比年來基因治療為其開發(fā)了一條新的途徑，通過符合的載體介導(dǎo)，轉(zhuǎn)移促血管生長因子的基因于缺血構(gòu)造，可促進(jìn)新血管

4、在局部的產(chǎn)生，形成血管“網(wǎng)和血管“橋，創(chuàng)立“分子搭橋機(jī)制.人肝細(xì)胞生長因子hepatytegrthfatr,HGF是一多成效生長因子，除促進(jìn)血管新生外4，對(duì)器官/構(gòu)造的損傷有必然的修復(fù)作用5，包羅肌肉、神經(jīng)等.本文使用犬后肢結(jié)扎股動(dòng)脈造成血管閉塞性疾病的動(dòng)物模子，接納股動(dòng)脈四周骨骼肌肉內(nèi)多點(diǎn)注射攜帶HGF基因的裸質(zhì)粒pUDKH要領(lǐng)，探究其治療犬肢體缺血時(shí)對(duì)其血管和肌肉構(gòu)造病理學(xué)的影響，為局部pUDKH基因治療的現(xiàn)實(shí)應(yīng)用提供實(shí)行根據(jù).1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料動(dòng)物：河北地域草狗18只，雄性，年事為1.53歲，體質(zhì)量1215kg，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物實(shí)行中央提供.pUDKH:攜帶人肝細(xì)胞生長因子基因的

5、重組裸質(zhì)粒,pUDK:未攜帶人肝細(xì)胞生長因子基因的空質(zhì)粒,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所三室提供.1.2要領(lǐng)2效果2.1血管(pUDK)的比擬組,90d的新生血管數(shù)明顯少于轉(zhuǎn)移pUDKH基因組，股動(dòng)脈結(jié)扎點(diǎn)以下的動(dòng)脈全部消散(圖1B).轉(zhuǎn)移pUDKH0.15，0.30，0.60g/kg三個(gè)劑量組之間差異不顯著，0.60g/kg組比其他2個(gè)給藥組更輕易使髂外動(dòng)脈結(jié)扎點(diǎn)到股動(dòng)脈接點(diǎn)收縮.轉(zhuǎn)染pUDKH的三個(gè)劑量組在/1002骨骼肌內(nèi)、外側(cè)和皮膚中血管數(shù)顯著比模子比擬組多，差異非常顯著.與未手術(shù)的右下肢骨骼肌內(nèi)、外側(cè)和皮膚比力，無顯著的差異.轉(zhuǎn)pUDKH基因大、中、小劑量組犬骨骼肌構(gòu)造之間的血管數(shù)與康

6、健肢骨骼肌構(gòu)造血管數(shù)相差不顯著(表1).表1左下肢內(nèi)、外側(cè)骨骼肌和皮膚血管數(shù)的變革(略)轉(zhuǎn)染pUDKH后90d犬左側(cè)下肢肌肉溫度與健側(cè)肌肉溫度無顯著差異，而模子比擬組擺布后肢肌肉溫度相差12(表3).表3轉(zhuǎn)染pUDKH后左側(cè)肢體溫度的變革(略)2.2肌肉形態(tài)比擬犬不雅察到結(jié)扎側(cè)肌纖維變性、橫紋不清楚；肌纖維及細(xì)胞核變細(xì)、斷裂、染色淡，肌束內(nèi)水腫，以及出現(xiàn)脂肪圖4A.pUDKH處置懲罰犬經(jīng)各劑量處置懲罰的結(jié)扎側(cè)的肌肉構(gòu)造中上述病變均已不很顯著圖4B.3討論在實(shí)行中，經(jīng)活體股動(dòng)脈血管造影已清楚地不雅察到,pUDKH處置懲罰組犬使結(jié)扎側(cè)肢體比用不攜帶HGFA：比擬組，轉(zhuǎn)移空質(zhì)粒pUDK后第90日,示

7、肌束內(nèi)及肌束間中小動(dòng)脈管壁變厚，管腔變小,乃至幾盡消散;B：pUDKH組，轉(zhuǎn)移pUDKH0.30g/kg后第90日，示肌束間中小動(dòng)脈管壁未見增厚，管壁無縮小，管腔內(nèi)布滿奇怪的紅細(xì)胞.本文不雅察的效果資料未列出還表白，因股動(dòng)脈被結(jié)扎而使血運(yùn)嚴(yán)峻受到滋擾的患肢中從股神經(jīng)直到肌束間的微小神經(jīng)都產(chǎn)生了明顯的退行變，累及軸突、髓鞘和施旺氏細(xì)胞核，而經(jīng)pUDKH處置懲罰犬的各級(jí)神經(jīng)均已得到了顯著的規(guī)復(fù)，有的乃至已經(jīng)到達(dá)了正常犬的圖像.這些外周神經(jīng)的規(guī)復(fù)，預(yù)計(jì)得利于HGF的雙重作用：缺血造成的神經(jīng)纖維損傷，由于HGF促進(jìn)了供血體系的重修而得以修復(fù)；據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道HGF自己也有促進(jìn)神經(jīng)規(guī)復(fù)的作用6.這兩種因素在本

8、實(shí)行模子中究系各起到多大比重，如今尚無法加以預(yù)計(jì).本實(shí)行只是一個(gè)探究性的事情，因此沒有在結(jié)扎并用空缺的或攜帶HGF基因的裸露質(zhì)粒處置懲罰后的差異時(shí)間段，舉行體系性的動(dòng)態(tài)取樣不雅察.推測在血管新生和形成血管網(wǎng)的早期節(jié)段，可以或許在劑量效應(yīng)干系方面，或全或半結(jié)扎模子的療效差異方面作出必然的評(píng)價(jià).如有大概以后可以做這方面的探究，還要做一些特別染色比方肌肉和髓鞘等特別染色要領(lǐng)的不雅察.除此之外，如有條件，還可做一些生理學(xué)指標(biāo)的不雅察，比方在供血體系重修歷程中對(duì)肌力和神經(jīng)傳導(dǎo)速率的動(dòng)態(tài)不雅丈量等.【參考文獻(xiàn)】1elillG,SerinF,irielli,etal.Genetherapyinperiphe

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