1、生物試料分析資料：分析機(jī)器試薬認(rèn)定講座（14）酵素活性測(cè)定法分析構(gòu)築法（）臨床醫(yī)要望検査技師要望取入分析構(gòu)築法小川 善資1)、沼上 清彥2)Summary Enzyme activity measurement for the laboratory tests are a widely used, in many casesdone with general-purpose automatic analyzers. They are used as screening tests and in tests incor-porating diagnostic criteria. Relative

2、 analysis methods are widely used to ensure the safety andaccuracy of these analytical values. However, unlike methods that quantify substance concentrations,there are factors that affect accuracy even in relative analysis. This is a point that needs to beproperly understood. One ideal type of test

3、construction is analysis systems that take into consider-ation the desires of the treating physician incorporating the test and that also meets with wishes of theperson doing the analysis. In other words, construction of an analytical system that has sufficient analyt-ical resolution and that also s

4、ufficiently meets the desires of both the treating physician and the personin charge of the analysis with respect to lower or upper measurement limits and the minimumconcentration for assay capacity. Since there is overlap in many parts of substance quantitativemethods, this discussion focuses on th

5、e parts that differ. The analyzable range and precision greatlydiffer depending on the performance of the device used, and the performance of analytical instrumentsmust be confirmed with each device. In this article performance is assumed and specific examples ofanalytical systems are proposed. A me

6、thod of constructing an analytical system for lactate dehydro-genase (LD) is also taken up.Key words: Routine assay, Assay system of enzyme activity, Automated analyzer,Molecular absorption1. 酵素活検査、診斷基準(zhǔn)取入検査。分析値安定性正確性確保、相対分析法広用。、物質(zhì)濃度定量法異、相対分析行正確度影響與因子、點(diǎn)正理解必。検査法構(gòu)築一理想、検査込診療醫(yī)要 望汲取、併分析者希望葉分析。、分析分解能測(cè)定下限上限

7、関性測(cè)定広用検査、汎用自動(dòng)分析裝置測(cè)定多、要診療醫(yī)分析擔(dān)當(dāng)者要 望十分葉分析構(gòu)築。、物質(zhì)定量法重 部分多、相違部分中心記述。使用裝置性能、1)北里大學(xué)薬學(xué)部194-0042 東京都町田市東玉川學(xué)園 1-9-192)生物試料分析科學(xué)會(huì)常任理事 146 生物試料分析Vol. 38, No 2 (2015)分析範(fàn)囲精密度。本稿性能仮定、分析具體例立案。上、乳酸（LD）活性測(cè)定法分析構(gòu)築法取上。大変化、分析機(jī)器性能各自裝置確認(rèn)測(cè)要要2. 分析裝置性能測(cè)定誤差関係汎用自動(dòng)分析裝置用、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用、相対分析酵素活、分析機(jī)器10程度異変、測(cè)定値様誤差表表示。物質(zhì)濃度測(cè)定時(shí)同様、相対分析行系統(tǒng)誤差相殺、10程

8、度異変発生、多場(chǎng)合測(cè)定値影響與。物質(zhì)定量相違恒溫槽溫度性測(cè)定行場(chǎng)合清正確性。下記示測(cè)定原理酵素E1測(cè)定場(chǎng)合取上。反応生成NADH340 nm吸光度増加速度酵素活性測(cè)定。E1A NADB NADH相対分析法酵素活性測(cè)定物質(zhì)吸光度変化量間次式成立。、NADH340 nm吸光係數(shù) 6.310 l/mol/cm。3吸光度変化量総反応液量 10量酵素 性（U/L）6吸光係數(shù)2-1. 量著者、相対分析物質(zhì)濃度測(cè)定記述1)、酵素活性測(cè)定相対分析行限、量変化物質(zhì)定量同様、測(cè)定値影響與。2-2. 試薬分注量厳密言、試薬濃度変化活性差生出、相対分析用表分析機(jī)器誤差酵素活性測(cè)定誤差関係（10程度誤差発生場(chǎng)合発生測(cè)定

9、誤差関係）分析機(jī)器部位內(nèi)容分取量正確測(cè)定値発生誤差測(cè)定誤差発生。部量直接分析誤差表。詰深刻誤差。分注量正確測(cè)定誤差明確表。測(cè)定誤差発生。希釈濃縮誤差表。試薬分注部活基常測(cè)定値連続。試薬流路漏溫槽溫度溫度正確度溫度上下 測(cè)定酵素溫度依存性。吸光度測(cè)定精度測(cè)光正確性 影響。波長(zhǎng)正確度影響。突然異度恒間差誤差発生。異度関汚汚突然、汚以外影響。試薬汚影響與。試薬情報(bào)、影響受組合排除必要原因。正確度再現(xiàn)性影響。反応管。信號(hào)経路 147 生物試料分析誤差相殺。、基素（LD）以外、多少基質(zhì)濃度活性差出、測(cè)定誤差発生。質(zhì)濃度至適條件選択、限酵2-3. 恒物質(zhì)定量法恒溫槽溫度正確測(cè)定値影響與、酵素活性測(cè)定測(cè)定値

10、誤差與。原因標(biāo)準(zhǔn)液添加酵素検體中存在酵素溫依存性多場(chǎng)合相違。物質(zhì)定量場(chǎng)合、標(biāo)準(zhǔn)液純粋測(cè)定物質(zhì)選別添加良、酵素場(chǎng)合、様精製酵素用、酵素性質(zhì)相違、正測(cè)定値伝達(dá)。動(dòng)物由來(lái)細(xì)菌由來(lái)酵素添加管理試料用場(chǎng)合、検體中酵素溫度依存性相違。例、37測(cè)定、恒溫槽溫度実際40。血清中測(cè)定対象酵素?zé)崛酢?010低値測(cè)定。一方、標(biāo)準(zhǔn)試料添加細(xì)菌由來(lái)酵素?zé)釓?qiáng)、4037活性10高値測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)液酵素活性200 U/L検體中酵素活性100 U/L、40測(cè)定場(chǎng)合、標(biāo)準(zhǔn)液活性220 U/L分吸光度変化示（例0.022/min）。対検體測(cè)定90 U/L（0.009/min）分働示。、測(cè)定値次計(jì)算。溫槽溫度設(shè)定度正溫度標(biāo)準(zhǔn)液（200

11、U/L）反応速度0.02/min検體（100 U/L）反応速度0.01/min（37）測(cè)定場(chǎng)合検體反応速度200100 U/L標(biāo)準(zhǔn)液反応速度（0.02/min）（0.01/min）検體中酵素 性40測(cè)定場(chǎng)合標(biāo)準(zhǔn)液（200 U/L）反応速度0.022/min検體（100 U/L）反応速度0.009/min検體反応速度検體中酵素 性 20081.8 U/L標(biāo)準(zhǔn)液反応速度（0.022/min）（0.009/min）誤差発生。、様問(wèn)題引起原因一。、由來(lái)酵素用問(wèn)題、単純。由來(lái)、相違溫度依存性同一、遺伝子組換技術(shù)同一作成、溫度依存性一致実験的確分。複雑問(wèn)題。血清均等測(cè)定。両者溫度依存性相違合。一方由來(lái)溫度

12、依存性等添加、他方溫度依存性相違、測(cè)定値大歪生。問(wèn)題完全解決法。皆十分理解上、多方合意決解決方法思。濃度測(cè)定解決策一、中種類、両定量法困難、問(wèn)題、解決術(shù)思。2-4. 波長(zhǎng)正確性物質(zhì)定量法同様、系統(tǒng)誤差、測(cè)定値影響現(xiàn)。 148 生物試料分析Vol. 38, No 2 (2015)基度基度活測(cè)定直線性2-5. 吸光度線性欠如裝置正酵素活性測(cè)定。特吸光度減少速度測(cè)定方法影響大受?；钚哉`差受割合相違。具體的発生誤差記述參考下2)線性欠如吸光度高部分発生易、低部分発生難、直測(cè)定場(chǎng)合誤差発生。物質(zhì)濃度測(cè)定場(chǎng)合、吸光度増加反応利用多、直線性吸光度測(cè)定限界、誤差発生。、大吸光度反応、測(cè)定可能範(fàn)囲大（試薬項(xiàng)參照

13、）。試薬、測(cè)定可能範(fàn)囲広特徴製品。、特徴。、最近裝置長(zhǎng)短縮、高吸光度測(cè)定、精密性保問(wèn)題。吸光度測(cè)定上限倍吸光度測(cè)定分解能、感度1/2。、精密性保明確知必要 。要 、吸光度直線性有、精密性保各裝置必要 。直恒度。恒度活直線部分度純菌度恒度清菌活活活活度算2-6. 吸光度測(cè)定正確性度直線性保、吸光度測(cè)定正確性測(cè)定値正確性影響與。度度2-7. 分析裝置自動(dòng)分析裝置用、相対分析実施日常検査法正確度性能。先正確度影響及因子次。（正確度影響及性能）詰吸光度測(cè)定直線性欠如恒溫槽設(shè)定溫度正確性（精密度影響及性能）精密度影響及度度量、量減少試薬分注量変化純波長(zhǎng)正確度量直接測(cè)定値。、量減少感度減少直接、原因。試薬

14、濃度至適條件設(shè)定、試薬濃度上昇低下得測(cè)定低、感度低下、原因可能性。、測(cè)定波長(zhǎng)誤差測(cè)定光半値幅測(cè)定物質(zhì)変化。、波長(zhǎng)影響大受。、今回使用分析裝置測(cè)定限界表設(shè)定。度度清度度度意度表今回使用自動(dòng)分析裝置測(cè)定吸光度変化速度上限下限（仮定）測(cè)定下限吸光 変化量吸光度分析分析分解能（正測(cè)定仕分吸光度測(cè)定上限吸光 変化量 0.1500/min0.0001/min差）0.0001/min 149 生物試料分析項(xiàng)以下記述仮定數(shù)値、設(shè)定光路長(zhǎng)0.5 cm用、検出結(jié)果光路長(zhǎng)1.0 cm結(jié)果表示。3. 試薬測(cè)定誤差関係3-1. 正確度酵素活性測(cè)定場(chǎng)合、物質(zhì)濃度測(cè)定異、試薬変化測(cè)定値影響出。物質(zhì)定量、系統(tǒng)誤差全相殺、酵素

15、活性測(cè)定、場(chǎng)合、?；钚詼y(cè)定、血清中左右試薬問(wèn)題存在可能性、単一測(cè)定條件設(shè)定場(chǎng)合問(wèn)題発生、複數(shù)均等反応、合計(jì)活性求場(chǎng)合、大変難問(wèn)題。、検體存在比相違、影響正理解極難問(wèn)題。個(gè)別酵素議論解析不可能。具體的検査項(xiàng)目毎議論必要 。試薬発生問(wèn)題、基本的系統(tǒng)誤差発生多、相対分析誤差解消起、個(gè)別酵素吟味必要 生。、項(xiàng)目毎議論。3-2. 測(cè)定反応上再現(xiàn)酵素活性測(cè)定法試薬濃度決定上行。理由影響因子多、互影響考慮試薬條件決定極困難作業(yè)。個(gè)別酵素具體的記述。3-3. 共役酵素用酵素活酵素活性、一般的測(cè)定原理単純測(cè)定誤差要 因排除、正確活性値測(cè)定。、測(cè)定操作簡(jiǎn)単、測(cè)定操作法組。具體的LD活性測(cè)定法、乳酸酸方向反応、NA

16、DH生成速度性求。検體活性測(cè)定試薬活性測(cè)定、検體測(cè)定法全組合記述。測(cè)定 1精製水NAD 予備加溫乳酸 試薬測(cè)定性測(cè)定法活測(cè)定 2検體NAD 緩衝液 検體測(cè)定測(cè)定 3検體乳酸 緩衝液 検體測(cè)定検體活検體活性測(cè)定 2検體乳酸 NAD 検體活性測(cè)定試薬測(cè)定何問(wèn)題、一般的測(cè)定。次検體測(cè)定関考。測(cè)定検體中乳酸必存在、理論上測(cè)定。測(cè)定選択、補(bǔ)酵素酵素反応生、測(cè)定行意味。理論的、乳酸以性測(cè)定 1検體NAD 乳酸 検體活性測(cè)定外検體中存在何物質(zhì)生反応検體考、測(cè)定実施、先説明通、測(cè)定。検體活選択。一般的操作法選択同活性値考方多思、実際測(cè)定活性値相違。理論的LDNAD結(jié)合、基質(zhì)乳酸結(jié)合（Bi-Bi反応従）。、検體

17、活性測(cè)定性測(cè)定検體活性測(cè)定実施、検體活性測(cè)定実施理思、検體中LD反応物質(zhì)存在、反 150 生物試料分析Vol. 38, No 2 (2015)応本來(lái)反応阻害剤、反応開(kāi)始可能性、LD-NADH-乳酸複合體（LD活性強(qiáng)阻害剤、反応直線性失原因物質(zhì)）形成可能性。、検體活性測(cè)定選択。、両者活性差何原因発生明確限、選択理由見(jiàn)。、逆反応酸乳酸反応測(cè)定考、同問(wèn)題選択対象。結(jié)論、理論的検體正取方法無(wú)問(wèn)題存在。、問(wèn)題LD活性測(cè)定、臨床応用上問(wèn)題、決大問(wèn)題。、検體取、大誤差招患者血清出來(lái)（LD反応物質(zhì)大変高濃度疾患、特定薬物、反応物質(zhì)上昇可能性）不安殘。、標(biāo)準(zhǔn)法作成悩課題、精度管理正考、管理試料試料作成上重 問(wèn)題

18、。可能性、問(wèn)題。、検體中乳酸存在測(cè)度活度異活活清活要基3-4. 共役酵素用酵素活共役酵素用測(cè)定法関初速度反応開(kāi)始直後反応速度。警告広知渡、反応開(kāi)始直後非直線部分認(rèn)識(shí)知。、多市販試薬反応開(kāi)始直後発生非直線部分出試薬開(kāi)発進(jìn)、現(xiàn)在様現(xiàn)象極力見(jiàn)試薬市販（Km値小酵素用、酵素添加量増加現(xiàn)象目立）。、今度共役酵素添加新問(wèn)題発生可能性。試薬毎明測(cè)定値相違現(xiàn)象結(jié)果現(xiàn)。日本場(chǎng)合、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)共通使用、様試薬間差発生、共役酵素起因問(wèn)題可能性最高感。、問(wèn)題、力入気。性測(cè)定法活度活活純活活度活活活表試薬異常酵素活性測(cè)定誤差関係（10程度誤差発生場(chǎng)合発生測(cè)定誤差関係）試薬部分常內(nèi)容測(cè)定値発生誤差LD基質(zhì)阻害大酵素過(guò)剰基基質(zhì)分解試薬口質(zhì)添加活活開(kāi)放水蒸発 影響有。活活濃縮誤差発生、多酵素影響。関補(bǔ)酵素分解試薬口試薬継足厳禁、NADNADH酵素開(kāi)放水蒸発強(qiáng)力阻害剤形成。濃縮PALP問(wèn)題複雑、別途記載。意ATP、ADP安定性悪要 注意安定剤?zhí)砑恿可?、不安定多?注意共役酵素安定剤?zhí)砑?。分解、劣化。共役酵素安?/p>