1、PCR儀器的使用及注意事項HLA服務部 陳璐1PCR技術的原理1 2 39472高溫變性 低溫退火 適溫延伸重復13步溫度2535循環(huán)形成（）目的DNA片段5522條 變單 性鏈子鏈延伸擴增100萬倍以上DNA加倍DNA單鏈與引物復性DNA雙螺旋12345時間（min）PCR技術的操作以Bio-Rad S1000和ABI9700為例說明PCR儀的操作步驟主要儀器：普通PCR儀，微量移液器，高速冷凍離心機，電泳槽，凝膠成像系統(tǒng)，生物安全柜等。3Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程儀器使用記錄本要放在儀器旁邊4Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程儀器使用前記錄儀器使用后記錄Bio-

2、Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程一、 Bio-Rad S1000 控制面板（鍵盤不顯示）Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程二、新建KS文件夾，在其設置程序B011實驗程序：B-01196 396 2571 4572 172 512 for ever-0.2/cycle 30 cycles 7Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程開機自檢后進入主頁面8Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程建立新文件夾:KS9Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程10Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程設置程序B011頂蓋技術Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程Bi

3、o-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程13Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程使用之前需瀏覽程序Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程程序運行后需檢查程序關閉前需檢查17Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程四個頭 PCR儀操作規(guī)程Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程三、設置程序A01實驗程序：1） 95 595 303072 372 512 for ever57 35cycles 2） 95 595 303072 372 512 for ever60 35cycles 3）

4、95 595 303072 372 512 for ever63 35cycles Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程頂蓋自己Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程23Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程旋轉方向24Bio-Rad S1000 PCR儀操作規(guī)程五、小結：1.誤關別人的程序。2.程序沒運行。3.頂蓋設置溫度低，導致樣品蒸収。4.程序被修改卻沒核對，導致程序跑錯。5.需定期做期間核查，外借或返修回來的儀器要做儀器驗證。6. 機器碼放需有一定的距離。由于本機采用半導體雙向控溫技術，由機器內風機散熱，故丌得堵塞儀器兩側

5、及底部的通風口，并應遠離熱源，避免將液體滲入儀器內部。正確的使用環(huán)境溫度432，相對濕度20%80%，盡量避免使用4過夜，以免影響儀器的壽命。25ABI9700 PCR儀操作規(guī)程開機操作：打開PCR儀電源開關；向后平推PCR儀頂蓋，放入PCR薄壁管。向前平推PCR儀頂蓋，并均勻用力將反扣部分壓下。26ABI9700 PCR儀操作規(guī)程一、 ABI9700 控制面板（鍵盤不顯示）ABI9700 PCR儀操作規(guī)程二、新建DRB文件夾，在其設置程序ABC實驗程序：ABC:96 3 96 2566 5072 130 962564 5072 13072512 forever10cycles24cycles

6、ABI9700 PCR儀操作規(guī)程開機自檢后進入主頁面ABI9700 PCR儀操作規(guī)程建立新文件夾:DRBABI9700 PCR儀操作規(guī)程設置程序ABCABI9700 PCR儀操作規(guī)程ABI9700 PCR儀操作規(guī)程ABI9700 PCR儀操作規(guī)程ABI9700 PCR儀操作規(guī)程關機操作：實驗結束后點擊Exit至出現主界面，關閉PCR儀電源開關；均勻用力將反扣部分抬起，向后平推PCR儀頂蓋，叏出PCR薄壁管。向前平推PCR儀頂蓋。三、操作出現的問題PCR擴增產物檢測凝膠電泳緩沖液配方10TBE緩沖液(每升) ：Tris107.8g Boric Acid55.0gEDTA(Na2)8.2g10TAE緩沖液(每升) ：Tris48.4g 冰乙酸 11.42g 0.5mol/L E DTA20ml用電泳緩沖液制備1.5%瓊脂糖凝膠，按每孔8ulPCR產物上樣至膠中。100伏電泳30min