1、成年及新生大鼠面神經(jīng)結(jié)扎后NADPH【關(guān)鍵詞】大鼠；面神經(jīng)；結(jié)扎術(shù)；NADPH脫氫酶；組織化學(xué)DifferentexpressinpatternsfNADPHdpsitiveneurnsafterfaialnerveligatininnenatalandadultrats【Abstrat】AI:TestablishthenenatalandadultratdelsffaialnerveligatinandbservethedynaihangesfNADPHdpsitiveneurnsinthefaialnuleusafterligatin.ETHDS:Thenenatalandadultrat

2、sfaialnerveasligatedatstylastidfraen.Braintissues3,7,14,21,28,56,84dafterperatinrespetivelyerepreparedfrpathlgialsetinsffaialnulEiandthenthesetinserestainedithNADPHdfrbservingtherphlgialhangeffaialtneurns(FN).RESULTS:ThenuberfNADPHdpsitiveFNinreasedsignifiantlyinadultratsfr3dt12kafterfaialnerveligat

3、in,hiletheNADPHdpsitiveFNinnenatalratsasfundinthelesinsideduring18eeksafterligatin.NLUSIN:Afterfaialnerveligatin,thenuberfNADPHdpsitiveFNinreasedinbththenenatalandtheadultrats,hiletheirexpressinpatternsarequitedifferentinthese2grups.【Keyrds】rats;faialnerve;ligatin;NADPHdehydrgenase;histheistry【摘要】目的

4、：研究新生及成年大鼠面神經(jīng)結(jié)扎后，面神經(jīng)核運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元FNNADPHd陽(yáng)性細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化.方法：于新生及成年大鼠莖乳孔處結(jié)扎面神經(jīng)，于3,7,14,21,28,56,84d采用NADPHd組織化學(xué)方法觀察NADPHd陽(yáng)性細(xì)胞在面神經(jīng)核中的變化.并觀察NADPHd陽(yáng)性細(xì)胞與存活神經(jīng)元之間的關(guān)系.結(jié)果：成年大鼠面神經(jīng)結(jié)扎FN受損后，3d12kNADPHd陽(yáng)性持續(xù)表達(dá).但是幼年大鼠面神經(jīng)結(jié)扎FN受損后1k，NADPHd陽(yáng)性方可在損傷側(cè)觀察到，至8k那么幾乎觀察不到NADPHd陽(yáng)性FN.結(jié)論：面神經(jīng)損傷后，成年及新生大鼠損傷側(cè)NADPHd陽(yáng)性FN數(shù)目均有所增加，但是它們?cè)诒磉_(dá)時(shí)程上顯示了不同的形式.【關(guān)

5、鍵詞】大鼠；面神經(jīng)；結(jié)扎術(shù)；NADPH脫氫酶；組織化學(xué)0引言N參與神經(jīng)系統(tǒng)的生理和病理過(guò)程，但出生后正常運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元N合酶(NS)表達(dá)陰性1.坐骨神經(jīng)切斷的研究說(shuō)明，新生大鼠相應(yīng)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元大量死亡，NS表達(dá)增高，成年大鼠相應(yīng)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元那么無(wú)顯著變化.提示NS的表達(dá)可能與神經(jīng)元的變性壞死相關(guān)聯(lián)2.神經(jīng)系統(tǒng)中NADPH脫氫酶(NADPHd)與NS是同一種酶，因此采用NADPHd組織化學(xué)的方法可以間接顯示NS的分布.我們通過(guò)NADPHd組織化學(xué)的方法3，研究不同年齡大鼠面神經(jīng)損傷后，其神經(jīng)元NS表達(dá)形式的變化以及NS表達(dá)和存活神經(jīng)元之間的關(guān)系.1材料和方法1.1材料SD大鼠42只(第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

6、中心提供)，雌性，體質(zhì)量(20010)g，面神經(jīng)壓榨傷7組(3,7,14,21,28,56,84d)，每組6只.成年大鼠手術(shù)方法參照文獻(xiàn)，建立以左側(cè)面神經(jīng)斷裂為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的動(dòng)物模型.麻醉(10g/L戊巴比妥鈉40g/kg)大鼠，暴露左側(cè)莖乳孔及面神經(jīng)干，使用手術(shù)線于距莖乳孔1.5處結(jié)扎面神經(jīng)，右側(cè)為正常對(duì)照.新生SD大鼠42只(第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),全部產(chǎn)自7只母鼠，于出生后7d，低溫麻醉-20,2030in，在其左側(cè)面部的腮腺下方暴露面神經(jīng)，結(jié)扎其主干4.術(shù)后新生鼠與其母鼠以12h12h間隔喂養(yǎng).全部動(dòng)物按時(shí)給予食物和水，并經(jīng)不同存活時(shí)間，在10g/L戊巴比妥鈉(40g/kg)ip麻

7、醉下開(kāi)胸，左心室升動(dòng)脈插管，灌注溫生理鹽水100L沖凈血液，然后用預(yù)冷的40g/L多聚甲醛固定液pH7.4500L灌注，固定完畢，參照文獻(xiàn)5定位面神經(jīng)核，程度面切取一塊5腦干(以橋延溝為中心)后固定2h,入200g/L蔗糖溶液4過(guò)夜，至組織塊下沉，冰凍冠狀切片14.1.2方法切片經(jīng)10l/LPBS漂洗35in后，在含有TritnX100,0.6g/LNADPHd和0.5g/L硝基四氮唑藍(lán)NBT的PB液(pH8.0)中37孵育4060in,10l/LPBS終止反響.并使用中性紅復(fù)染，貼片，脫水，透明，封片.每只動(dòng)物隨機(jī)取5張切片，在BX60X100下計(jì)數(shù)面神經(jīng)核團(tuán)內(nèi)神經(jīng)元FN.左右兩側(cè)面神經(jīng)核團(tuán)

8、中中性紅陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目之比L/R為存活率.損傷側(cè)NADPHd染色陽(yáng)性神經(jīng)元于同側(cè)中性紅陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目之比為相對(duì)陽(yáng)性率，損傷側(cè)NADPHd染色陽(yáng)性神經(jīng)元于對(duì)照側(cè)中性紅陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目之比為絕對(duì)陽(yáng)性率.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：實(shí)驗(yàn)結(jié)果用xs表示，采用rigin7.0軟件，組內(nèi)比擬統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用t檢驗(yàn)，P0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.2結(jié)果2.1成年大鼠面神經(jīng)切斷后1k，神經(jīng)元存活數(shù)目變化不大，但112k之間，存活神經(jīng)元從對(duì)側(cè)的95.8%下降至68.8%(圖1.此后，神經(jīng)元數(shù)目變化不大，至16k，仍然有66.3%的神經(jīng)元存活.成年大鼠面神經(jīng)損傷3d，損傷側(cè)面神經(jīng)核內(nèi)即可見(jiàn)NADPHd陽(yáng)性神經(jīng)元，但是其染色比擬淺淡

9、，并且有NADPHd染色陽(yáng)性的血管.從損傷后1k開(kāi)場(chǎng)，損傷側(cè)面神經(jīng)染色較深；NADPHd陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目在損傷后2k到達(dá)最高，并且此后直至12k,損傷側(cè)始終有25%以上相比照率的神經(jīng)元NADPHd染色陽(yáng)性圖2.圖1大鼠面神經(jīng)結(jié)扎后損傷側(cè)面神經(jīng)核團(tuán)內(nèi)神經(jīng)元的存活率aP0.05略2.2幼年大鼠新生大鼠面神經(jīng)損傷1d后，損傷側(cè)面神經(jīng)元尼氏體開(kāi)場(chǎng)崩解，核固縮，但是和對(duì)照側(cè)相比，F(xiàn)N數(shù)目沒(méi)有顯著差異.損傷后3d開(kāi)場(chǎng)，損傷側(cè)FN存活細(xì)胞開(kāi)場(chǎng)減少，只有對(duì)照側(cè)的93%；背景出現(xiàn)NADPHd染色陽(yáng)性的血管，但是未觀察到NADPHd陽(yáng)性神經(jīng)元.從損傷后1k開(kāi)場(chǎng)，損傷側(cè)FN存活數(shù)目明顯降低，大約只有對(duì)照側(cè)的50%；并

10、且除了背景血管NADPHd染色陽(yáng)性以外，損傷側(cè)開(kāi)場(chǎng)出現(xiàn)NADPHd陽(yáng)性的神經(jīng)元.至2k，盡管損傷側(cè)只有對(duì)照側(cè)57.7%的FN仍然存活，但是其N(xiāo)ADPHd陽(yáng)性神經(jīng)元的相對(duì)及絕比照率都最大表1.此后，面神經(jīng)核內(nèi)NADPHd陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目急劇下降，并且至8k，只有個(gè)別動(dòng)物損傷側(cè)仍然存在NADPHd陽(yáng)性神經(jīng)元.而至12k，檢查的所有5只動(dòng)物損傷側(cè)均未發(fā)現(xiàn)NADPHd陽(yáng)性神經(jīng)元圖3.對(duì)于新生大鼠，神經(jīng)元死亡的主要時(shí)間發(fā)生于損傷后3d至1k，損傷側(cè)大約有33%的神經(jīng)元在此期間死亡.而之后，損傷側(cè)存活神經(jīng)元數(shù)目雖然隨著時(shí)間持續(xù)減少，但是減少的趨勢(shì)已經(jīng)減緩.A：3d;B:1k;:2k;D:12k.Bar=10

11、0.圖2成年大鼠面神經(jīng)結(jié)扎后面神經(jīng)核內(nèi)的NADPHd陽(yáng)性神經(jīng)元略A：3d;B:1k;:2k;D:8k.Bar=100.圖3新生大鼠面神經(jīng)結(jié)扎后面神經(jīng)核內(nèi)的NADPHd陽(yáng)性神經(jīng)元略表1面神經(jīng)結(jié)扎后核團(tuán)內(nèi)NADPHd陽(yáng)性神經(jīng)元的變化略3討論我們發(fā)現(xiàn)，幼年大鼠從損傷后3d開(kāi)場(chǎng)就有大量的神經(jīng)元死亡，而成年大鼠那么從1k開(kāi)場(chǎng)神經(jīng)元的死亡才比擬顯著.盡管成年及新生大鼠面神經(jīng)結(jié)扎之后，其FN均有死亡，NADPHd陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目均增加，但是它們的反響形式是不同的.這種差異可能反映了不同發(fā)育階段神經(jīng)元對(duì)同一損傷的不同反響，其死亡可能是由不同的機(jī)制介導(dǎo)的.成年運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元對(duì)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的依賴程度較低，因此軸突切斷之后

12、的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子缺乏并沒(méi)有成為成年大鼠FN死亡的直接原因.其神經(jīng)元的死亡和NADPHd的表達(dá)正相關(guān)，因此，使用iNS的抑制劑可以有效地減少成年大鼠FN的死亡6.而對(duì)于幼年大鼠，損傷1k內(nèi)即有大量神經(jīng)元死亡，但在損傷后1k才有NADPHd陽(yáng)性神經(jīng)元出現(xiàn)，說(shuō)明N并不是幼年大鼠FN早期死亡的主要原因.我們推測(cè)，幼年大鼠面神經(jīng)結(jié)扎后，其早期的神經(jīng)元死亡占主要作用，而這一過(guò)程是不依賴于iNS的.而成年大鼠面神經(jīng)結(jié)扎后，神經(jīng)元內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生的iNS是引起其死亡的主要因素，因此可以考慮使用iNS的抑制劑.【參考文獻(xiàn)】1ihel,HessA,Krlzig,etal.Invlveentfnitrixidesyntha

13、seinthephysilgyandpathphysilgyffaialnervefuntinanddysfuntinJ.EurArhtrhinlaryngl,2000,257(4):188-192.2RuanRS,LengSK,YehKH.TherlefnitrixideinfaialtneurnaldeathJ.BrainRes,1995,698(12):163-168.3RuanRS,LengSK,YehKH.ExpressinfNADPHdiaphraseativityinthefaialtneurnsafterpressinfthefaialnerveinthealbinratJ.BrainRes,1994,652:350-352.4ranLB,GraeberB.ThefaialnerveaxtydelJ.BrainResBrainResRev,2022,44(23):154-178.5hiD,DunnLT.Faialnerverepairandregeneratin:A