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文檔簡介

1、實驗三淋巴細胞分離技術(shù)（1）細胞免疫 主要是由T細胞介導。這種細胞在血液中占淋巴細胞總數(shù)的8090。受抗原刺激后活化發(fā)揮直接殺傷、分泌細胞因子等效應(yīng)。 2）體液免疫 主要是通過B細胞介導。受到抗原刺激形成漿細胞后，產(chǎn)生并分泌抗體即免疫球蛋白，發(fā)揮中和作用、激活補體及調(diào)理作用等。 淋巴細胞為白細胞中體積最小的一種，直徑6-8微米;在人體約占白細胞的20-30%，圓形細胞核，細胞質(zhì)很少。淋巴細胞一、實驗目的掌握淋巴細胞分離技術(shù)，熟悉免疫細胞的檢查和功能二、實驗原理脾臟是機體最大的外周免疫器官， 含有大量的淋巴細胞和巨噬細胞。本實驗以小鼠脾為例，通過離心及紅細胞裂解液等分離脾細胞懸液，得到較高濃度的

2、淋巴細胞。 濾孔直徑與濾網(wǎng)目數(shù)的對應(yīng)關(guān)系濾孔直徑（mm） 目數(shù)（目） 0.771 20 0.420 40 0.180 80 0.152 100 0.125 120 0.105 150 0.089 180 0.074 200 0.053 270 0.044 325扒開內(nèi)臟，可看到如圖所示的長約3-4厘米呈長條狀的深紅色組織，即為脾臟三、試劑及器材小鼠，解剖剪，培養(yǎng)皿，研磨棒，尼龍網(wǎng)，離心機，顯微鏡，計數(shù)板；RPMI 1640培養(yǎng)液， 紅細胞裂解液（Tris-NH4Cl）， 0.05錐蘭PBS溶液。四、實驗步驟1. 頸椎脫臼處死小鼠，浸入75%的乙醇中浸泡1-2分鐘；2. 在超凈臺中小心剪開小鼠的

3、腹部外皮，用大頭針固定，再剪開小鼠的腹腔，用鑷子取出小鼠脾臟放入200目尼龍網(wǎng)上,注意無菌操作；3.加入2mL的1640培養(yǎng)液, 然后用注射器活塞輕輕研磨小鼠脾臟；4. 加入2mL的1640培養(yǎng)液，沖洗尼龍網(wǎng)上殘余細胞；5. 將全部液體收集到離心管中，1500rpm離心10分鐘,去上清；6.加入2mL的1640培養(yǎng)液，1500rpm離心10分鐘,去上清；7. 加Tris 氯化銨2ml，1分鐘消化紅細胞，加入1640培養(yǎng)液6ml, 1500rpm離心10分鐘；8 .去上清液，加入1 mL的1640培養(yǎng)液重懸細胞，計數(shù)板細胞計數(shù)。五、實驗結(jié)果細胞濃度計算公式： 4個大方格內(nèi)的細胞總數(shù)個/ml = 104稀釋倍數(shù) 4細胞活力檢測：死的細胞可被染成藍色

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