1、微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用學(xué)案三、保存菌種：1.臨時(shí)保藏：固體斜面培養(yǎng)基 一4 c冰箱一轉(zhuǎn)移【學(xué)習(xí)目標(biāo)】.能根據(jù)不同的需要對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行滅菌或消 毒，會(huì)配制不同用途的培養(yǎng)基。.學(xué)會(huì)利用微生物的培養(yǎng)技術(shù)分離或鑒定某種 環(huán)境的微生物方法。.交流分享微生物的培養(yǎng)在生活實(shí)踐中的應(yīng)用?！菊n標(biāo)要求】1.闡明無(wú)菌技術(shù)是在操作過(guò)程中， 保持無(wú)菌物品與 無(wú)菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)2.舉例說(shuō)明通過(guò)調(diào)整培的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物.概述平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法.概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法【高頻考點(diǎn)突破】一、理清微生物培養(yǎng)的 5種基本技術(shù)培養(yǎng)基的

2、制備：計(jì)算一稱(chēng)量一溶化一滅菌(2)無(wú)菌技術(shù)：主要包括消毒和滅菌。實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法：實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方一核為什么 考本專(zhuān)題是偏重學(xué)生的實(shí)踐，以學(xué)生動(dòng)手操作為基礎(chǔ)，利用微生物的特點(diǎn)進(jìn)行分 離或培養(yǎng)而達(dá)到某種目的，進(jìn)而推動(dòng)生物學(xué)的不斷進(jìn)步，提高人類(lèi)生活質(zhì)量。四層考什么核心價(jià)值通過(guò)復(fù)習(xí)使學(xué)生形成科學(xué)技術(shù)服務(wù)于生產(chǎn)實(shí)際的核心價(jià)值，引導(dǎo)學(xué) 生形成合理的科學(xué)發(fā)展觀(guān)，能夠分析科學(xué)技術(shù)與生產(chǎn)力的關(guān)系，并 具有一定的實(shí)驗(yàn)操作水平。學(xué)科素養(yǎng)理解生命的本質(zhì)及各種微生物的生長(zhǎng)特點(diǎn)，了解系統(tǒng)分析的思想和 方法，學(xué)會(huì)用科學(xué)的方法和科學(xué)的思維去設(shè)計(jì)科學(xué)的實(shí)驗(yàn)程序，完 成相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作。關(guān)鍵能力要求學(xué)生有理解能力，分析現(xiàn)實(shí)

3、情境解決問(wèn)題能力。生物技術(shù)實(shí)踐對(duì)對(duì)學(xué)生的考察比較多， 如何利用已學(xué)知識(shí)解決現(xiàn)實(shí)問(wèn)題比較重要。必備知識(shí)會(huì)進(jìn)行無(wú)菌操作能根據(jù)需要配制不同的培養(yǎng)基學(xué)會(huì)不同環(huán)境中不同微生物的分離方法會(huì)用平板劃線(xiàn)法、稀釋涂布平板法分離、鑒定、計(jì)數(shù)某種微生物四翼怎么考基礎(chǔ)性學(xué)案中突出主干知識(shí)，每部分都對(duì)課本內(nèi)容進(jìn)行知識(shí)引領(lǐng)，特別強(qiáng) 調(diào)容易忽視的文字圖表部分。本專(zhuān)題利用選擇題對(duì)學(xué)生的主干知識(shí) 進(jìn)行考察，輔助理解，非選擇題的部分內(nèi)容加強(qiáng)對(duì)課本的熟悉。綜合性知識(shí)綜合性：微生物的培養(yǎng)與必修一中原核生物的結(jié)構(gòu)和功能有 關(guān)系密切，與發(fā)酵工程的相關(guān)內(nèi)容綜合性強(qiáng)。能力綜合性：圖表 的分析能力，多個(gè)變量的分析能力等。應(yīng)用性用于解決某種特定

4、物質(zhì)污染、水質(zhì)鑒定等問(wèn)題創(chuàng)新性本部分內(nèi)容與實(shí)際生活聯(lián)系密切，只要與微生物相關(guān)的生產(chǎn)活動(dòng)或 個(gè)人衛(wèi)生行為都可以用到本專(zhuān)題的相關(guān)技術(shù)。2.長(zhǎng)期保存：-20 C冷凍箱四、不同菌株篩選原理及部分顏色變化的比較法一法：(3)倒平板操作：待培養(yǎng)基冷卻至,左右時(shí),在酒精燈火焰附近倒平板。(4)平板劃線(xiàn)操作：平板劃線(xiàn)法是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)的操作目的是:(5)稀釋涂布平板法：先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尪鹊木悍謩e涂布到瓊脂固體培 養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。其原理是：二、統(tǒng)計(jì)微生物數(shù)目的2種方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積的

5、樣品中的微生物。O注意劃線(xiàn)的方法如下圖所示:種類(lèi)處理結(jié)果纖維素分解菌培喬基中加入。與纖維素形成色復(fù)合物，纖維素分解后出現(xiàn)透明圈尿素分解菌培喬基中加入。分解尿素后，PH升高，指示劑 變紅大腸桿菌用培養(yǎng)基培養(yǎng)菌落呈現(xiàn)黑色亞硝酸鹽在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與 對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮反應(yīng)后， 與N-1-奈基乙二胺鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料紅方腐乳加入紅曲深紅色缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌和活菌。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的,就能推測(cè)出樣品中含有多少活菌。計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=(C+V)XM,其中C代表某一稀

6、釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù),V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL),M代表操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確同時(shí)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在平板進(jìn)行計(jì)數(shù)?！靖呖兼溄印?.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是()A.測(cè)定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目，常用稀釋涂布平板法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)B.在對(duì)微生物進(jìn)行培養(yǎng)前，需要對(duì)微生物和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌C.酵母菌發(fā)酵過(guò)程產(chǎn)生的酒精，對(duì)其他微生物生長(zhǎng)有一定的抑制作用的 D.分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源2.做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是()A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回到零后，開(kāi)啟鍋蓋B.倒平板時(shí)，應(yīng)將

7、打開(kāi)的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上3.下列關(guān)于統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目方法的敘述，錯(cuò)誤的是（）A .采用平板計(jì)數(shù)法獲得的菌落數(shù)往往少于實(shí)際的菌落數(shù)B.當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，一個(gè)活菌會(huì)形成一個(gè)菌落C.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般采用密度較大的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)D.在某一濃度下涂布三個(gè)平板，若三個(gè)平板統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)差別不大，則應(yīng)以它們的平均值作為統(tǒng) 計(jì)結(jié)果4.（不定項(xiàng)）下列關(guān)于微生物培養(yǎng)的操作或過(guò)程正確的是：A.斜面培養(yǎng)基中含有大量營(yíng)養(yǎng)物，可在常溫下長(zhǎng)期保存菌株B.消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)

8、胞的傷害C.無(wú)菌操作的對(duì)象只要是沒(méi)有生物活性的材料（如培養(yǎng)基、接種環(huán)等）都可采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌D.平板劃線(xiàn)法中每一次劃線(xiàn)后要將接種環(huán)灼燒5.（不定項(xiàng)）漆酶屬于木質(zhì)素降解酶類(lèi)，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。如圖是分離、 純化和保存漆酶菌株的過(guò)程，相關(guān)敘述正確的是（多選）（）A.生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品B.篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落C.在涂布平板上長(zhǎng)出的菌落，再通過(guò)劃線(xiàn)進(jìn)一步純化D.斜面培養(yǎng)基中含有大量營(yíng)養(yǎng)物，可在常溫下長(zhǎng)期保存菌株6（不定項(xiàng)）在涂布有大腸桿菌的培養(yǎng)基上進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，在a、b、c處分別貼浸有不同抗生素

9、（濃度 相同）的無(wú)菌濾紙片，d處濾紙片浸有無(wú)菌水。培養(yǎng)后的結(jié)果如圖所示。以下判斷正確的是（）A. a處抑菌效果小于 b處 B. b處的濾紙片沒(méi)有瀝干 C. c處抗生素?zé)o效 D. d為對(duì)照7.淀粉酶是用途最廣、產(chǎn)量最大的酶制劑之一，廣泛用于印染、釀造和醫(yī)藥行業(yè)。請(qǐng)回答:（1）配制篩選能分泌淀粉酶的微生物的培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)以為 唯一碳源，在該培養(yǎng)基中加入碘酸鉀一碘化鉀后，有的菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈，說(shuō)明這些菌落能分泌淀粉酶，原理（2）從面粉加工廠(chǎng)附近的土壤中，取 5g 土壤倒入裝有45mL蒸儲(chǔ)水并帶有玻璃珠的錐形瓶中振蕩， 制成土壤懸液。將土壤懸液稀釋105倍后，用 法分別將0.1mL的菌液接種到3個(gè)平板

10、上，培養(yǎng)一段時(shí)間，3個(gè)平板中的菌落數(shù)分別為53個(gè)、60個(gè)、73個(gè)，則土壤懸液中分泌淀粉酶的微生物有 個(gè)/ mL將接種后的平板置于恒溫培養(yǎng)箱中 （填“正置”或“倒置”）培養(yǎng)。（3）對(duì)該微生物鑒定表明，此菌是一種芽抱桿菌。淀粉酶是一種胞外酶，此菌中與淀粉酶的產(chǎn)生和分泌有關(guān)的細(xì)胞器有,因此，在動(dòng)物飼料中添加芽抱桿菌或其代謝產(chǎn)物可提高動(dòng)物 的效率。一般情況下，透明圈直徑（D）和菌落直徑（d）的比值（D/d）反映了淀粉酶的活性，它們的關(guān)系是（4）若需較長(zhǎng)時(shí)間保存該菌種，可用的方法是 。驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該需經(jīng) 處理后才能倒掉。8.硝基苯酚（PNP）是一種黃色有機(jī)物，也是一種常見(jiàn)的環(huán)境污染物。目前

11、常用能降解 PNP的細(xì)菌處理含PNP的廢水。請(qǐng)回答： 在篩選PNP降解菌的固體培養(yǎng)基中應(yīng)加入 作為唯一碳源，將含PNP降解菌的菌液接種 在上述培養(yǎng)基上時(shí)常用的方法是，PNP降解菌的降解效率的高低可通過(guò)進(jìn)行 鑒定。（2）在制備稀釋倍數(shù)為IoZ。8的菌液時(shí)，依次用移液管移取1mL菌液至盛有 mL蒸儲(chǔ)水的試 管中。在移液前，應(yīng)吹吸3次，目的是。（3）此實(shí)驗(yàn)需要滅菌的材料或用具有 。用到的滅菌方法包括 。（4）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，與其他同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比 ，甲同學(xué)培養(yǎng)的不同濃度下的菌落數(shù)均顯著偏低。導(dǎo)致甲同學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)偏低的原因有 。.解磷菌能分泌酸性物質(zhì)，分解并釋放土壤中固化的磷元素。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（1）

12、磷是植物生長(zhǎng)發(fā)育白主要元素之一，可用于合成植物體內(nèi)的 等化合物。（至少寫(xiě)兩種）。（2）篩選土壤中的解磷菌時(shí)，普通培養(yǎng)基中加入磷酸鈣 ，篩選原理是觀(guān)察培養(yǎng)基中是否出現(xiàn)溶磷圈，培養(yǎng)基中出現(xiàn)溶磷圈的原因是 。解磷菌主要有細(xì)菌和真菌兩種類(lèi)型，欲從菌落特征上判斷其類(lèi)型，應(yīng)觀(guān)察并記錄等參數(shù)。（4）在用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)土壤中解磷菌數(shù)量時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是 。甲、乙兩同學(xué)用同一稀釋培養(yǎng)液計(jì)數(shù)菌落數(shù)時(shí)，甲同學(xué)涂布了 3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是 135、146和152,乙同學(xué)涂布了 3個(gè)平 板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分

13、別是45、51和60,甲、乙兩同學(xué)統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)有較大差異的原因是.有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長(zhǎng)期使用會(huì)污染環(huán)境。 研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖甲、乙所示。(2)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線(xiàn)工具是 。(2)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線(xiàn)工具是 。劃線(xiàn)的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線(xiàn)區(qū)域的劃線(xiàn)上都不間斷地長(zhǎng)滿(mǎn)了菌，第二劃線(xiàn)區(qū)域所劃的第一條線(xiàn)上無(wú)菌落，其他劃線(xiàn)上有菌落。造成劃線(xiàn)無(wú)菌落可能的操作失誤有(3)為探究苯磺隆的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過(guò)濾離心，取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是 ,該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么？11.自生固氮菌可不與其

14、他植物共生，獨(dú)立完成固氮作用，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有廣泛的用途。研究人員 欲從土壤中篩選高效的自生固氮菌株進(jìn)行研究。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)在配制含瓊脂的培養(yǎng)基和倒平板的過(guò)程中，下列選項(xiàng)不需要的是 (填序號(hào))。酒精燈接種環(huán)高壓蒸汽滅菌鍋棉塞(2)要從土壤樣品中分離出自生固氮菌，在獲得土壤浸出懸液后， 可以采用稀釋涂布平板法將菌液涂布于 培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。在如圖所示的四種菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是(1)微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、 四類(lèi)，該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源， 其原因是(3)稀釋涂布平板法還可用于檢測(cè)土壤中自生固氮菌的含量，圖中用該方法得到的菌落分布

15、圖中， 最符合計(jì)數(shù)要求的是圖中的 。用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)時(shí)是否需要設(shè)置對(duì)照組？ 為什么？ 。(4)將1 g 土樣稀釋103倍后分別取0.1 mL 土壤浸出液，涂布到 3個(gè)瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培 養(yǎng)，記錄到自生固氮菌的菌落平均數(shù)為130。則每克土樣中自生固氮菌為 。(5)若將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高 的利用率。種類(lèi)處理結(jié)果纖維素分解菌剛果紅種類(lèi)處理結(jié)果纖維素分解菌剛果紅紅尿素分解菌酚紅指示劑大腸桿菌伊紅美監(jiān)局

16、考鏈接一、微生物培養(yǎng)的5種基本技術(shù)調(diào)pH倒平板。(2)煮沸消毒；化學(xué)藥物消毒；紫外線(xiàn)消毒。灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。(3)50 C(4)將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面(5)在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞 菌落。二、統(tǒng)計(jì)微生物數(shù)目的 2種方法(2)菌落數(shù)稀釋倍數(shù)。 30-300三、2.甘油管藏，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)四、不同菌株篩選原理及部分顏色變化的比較，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)1-3.BDC 4.BD 5.BC 6.BCD(1)淀粉 淀粉遇碘變藍(lán)，淀粉酶分解淀粉后出現(xiàn)透明圈(2)稀釋涂布平板法6.2 X 107 倒置(3)核糖體 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收 D/d 越大，菌株(菌落)產(chǎn)生淀粉酶的能力越強(qiáng)或淀粉酶活性越高(4)甘油管藏滅菌(1) PNP涂步平板 透明圈的大小(2) 9保證菌液與水充分混合(3)培養(yǎng)基、培養(yǎng)器皿、接種工具灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌(4)各梯度濃度的菌液濃度偏低；接種量偏少(1)(核酸、ATP輔酶(還原氫)、磷脂(答出兩種即可)