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1、維生素B12注射液的定性鑒定及含量的測定實驗目的了解紫外可見分光光度計的構(gòu)造及正確使用方法。掌握吸收曲線的繪制方法。掌握紫外可見分光光度法對物質(zhì)的定性鑒定和含量測定。實驗原理紫外分光光度法仍然是基于LambertBeer定律 A = kcb 其中k為吸光系數(shù)。在條件改變時,吸光系數(shù)k可以用摩爾吸光系數(shù)或比吸光系數(shù) 所代替。 實驗原理維生素B12是含有Co的有機化合物,為深紅色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。其注射液在2781nm、3611nm、5501nm波長處有最大吸收。實驗原理通過對最大吸收峰處吸光度比值的計算,可對其進行實性鑒定。中華人民共和國藥典2000版規(guī)定維生素B12的定性鑒定標準為:實驗步驟1
2、. 參看紫外可見分光光度計儀器簡介和使用操作部分,熟悉其性能和操作方法。接通電源,打開儀器,預熱20min。實驗步驟2. 按藥典方法,取維生素B12注射液1支(1mL),倒入25mL容量瓶,用蒸餾水稀釋至刻度,充分混勻,置于1cm石英吸收池中以蒸餾水作參比溶液,在波長230nm580nm的范圍內(nèi),每間隔20nm測定一次吸光度,在最大吸收峰278nm、361nm、550nm附近,每間隔2nm測量一次,然后繪制A吸收曲線圖,確定最大吸收峰位置,并計算吸光度之比值,進行定性鑒定。思考題1. 紫外可見分光光度計測定維生素B12含量及定性鑒定的原理是什么?2. 稱取0.0500g維生素C,溶于0.01mol/L H2SO4溶液中,然后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,稀釋至刻度。吸取該溶液2.00mL,準確稀釋至100.0mL。取此溶液在1cm厚的吸收池中用245nm波長的單色光測其吸光度
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