1、DNA變性: 當(dāng)溶液中的DNA分子處于高溫或高pH值條件下,維持雙螺旋在一起的堿基互補(bǔ)對就被破壞,DNA雙鏈解離成兩條單鏈,這一過程叫DNA變性。核酸分子雜交的基本原理引起核酸變性的因素酸堿熱變性劑（尿素）有機(jī)溶劑（乙醇） DNA復(fù)性: 當(dāng)溫度降低至合適溫度或恢復(fù)pH值至中性，兩條裂解的單鏈按堿基互補(bǔ)配對原則重新形成雙鏈結(jié)構(gòu),這一過程叫DNA復(fù)性,又叫DNA雜交。4核酸分子雜交（nucleotide molecular hybridization）以DNA的變性、復(fù)性為理論基礎(chǔ)指具有一定同源序列的兩條核酸單鏈（DNA或RNA），在一定條件下按堿基互補(bǔ)配對原則經(jīng)過復(fù)性處理后，形成異源雙鏈的過程

2、分子雜交的基本方法Southern 印跡法Northern 印跡法斑點印跡雜交原位雜交液相雜交6一、Southern 印跡可用于分析基因拷貝數(shù)的變化由E. M. Southern在1975年提出可用于分析基因拷貝數(shù)的變化基本操作過程包括待測DNA樣品的制備和基因探針的標(biāo)記；待測DNA樣品的電泳分離；電泳分離的DNA經(jīng)變性、轉(zhuǎn)移、固定到合適的固相支持物；特異性核酸探針與膜上DNA片段雜交，放射自顯影或顯色檢測目的DNA的存在。 7Southern印跡分析基本流程濾紙NC膜凝膠濾紙電泳 轉(zhuǎn)移 雜交，顯影酶切DNA樣品上樣 DNA印跡重物緩沖液利用這一技術(shù)可進(jìn)行克隆基因DNA的酶切圖譜分析，基因組中

3、某一基因的定性與定量分析、基因點突變及限制性片段長度多態(tài)性分性等。8二、Northern 印跡和RT-PCR可用于分析基因轉(zhuǎn)錄水平的變化Northern blot是將RNA從凝膠中轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，定性分析mRNA的常用方法；RT-PCR是以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄合成cDNA、再以cDNA為模板進(jìn)行特異性擴(kuò)增，進(jìn)行RNA定性或定量分析的一種方法；二者均可用于分析基因轉(zhuǎn)錄水平的變化 。 Northern 印跡是應(yīng)用DNA探針檢測特異mRNA的，主要用于分析mRNA的轉(zhuǎn)錄或mRNA分子大小，其方法類似于Southern印跡雜交。三、斑點印跡雜交(dot blotting) 狹縫印跡雜交（slot

4、 blotting）將分離的RNA或DNA變性后直接點樣于NC膜或尼龍膜上優(yōu)點：簡單、快速、可同時檢測多個樣品用于基因組中特定基因及其表達(dá)產(chǎn)物的定性和定量研究，不能測定分子量的大小。11四、原位分子雜交技術(shù)可用于基因及其表達(dá)產(chǎn)物的定位分析原位雜交（in situ hybridization，ISH） 將標(biāo)記探針與細(xì)胞或組織中的核酸按堿基配對原則進(jìn)行特異性雜交，并應(yīng)用組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)方法在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位或基因表達(dá)的檢測技術(shù)稱為原位雜交（hybridization in situ)。 可用于基因及其表達(dá)產(chǎn)物的定位分析。 原位裂解細(xì)胞，不需要分離DNA，RNA或蛋白質(zhì)樣品，可同時處理大

5、量樣品，常用于目的基因的篩選或檢測某類細(xì)胞或組織中是否存在某一特定的DNA、RNA或蛋白質(zhì)序列。特點能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究不需從組織或細(xì)胞中提取核酸，對含量極低的靶序列靈敏度高能準(zhǔn)確反映組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)核酸原位雜交的基本步驟細(xì)胞或組織的固定：載玻片組織細(xì)胞雜交前的預(yù)處理用去垢劑或蛋白酶除去核酸表面蛋白質(zhì)探針的選擇和標(biāo)記雜交雜交結(jié)果檢測14箭頭所示為雜交信號，結(jié)合帶型分析可判斷染色體位置熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization, FISH） 五、液相雜交將參加液相雜交的兩條核酸鏈都游離在溶液中，在一定條件下（溶液的離子強(qiáng)度、溫度、時間等）進(jìn)行雜交，然后再將未雜交的探針除去，即得到雜交后的核酸分子。RNA酶保護(hù)分析法核酸酶S1保護(hù)分析法1、RNA酶保護(hù)分析法原理 RNaseA和RNaseT1專一水解雜交體系中的單鏈RNA，不水解探針RNA與待測RNA互補(bǔ)形成的雙鏈RNA，使雜交分子得到保護(hù)，稱RNA酶保護(hù)分析法。2、核酸酶S1保護(hù)分析法原理 核酸酶S1在一定條件下專一水解雜交體系中的單鏈DNA和單鏈RNA，不水解DNA探針與待測RNA雜交形成的雜交體，使雜交分子得到保護(hù)，稱核酸酶S1保護(hù)分析法 六、固相雜交 將待測的靶核苷酸鏈預(yù)先固定在固體支持物上，而標(biāo)記的探針則游離在溶液中，進(jìn)行雜交反應(yīng)后，使雜交