1、目錄實(shí)驗(yàn)一常用 HYPERLINK /v5632212.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 培養(yǎng)基的制備、滅菌與消毒實(shí)驗(yàn)二土壤中微生物分離純化培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)三菌種保藏實(shí)驗(yàn)四細(xì)菌形態(tài)觀察及單染色實(shí)驗(yàn)五放線菌及霉菌形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)六革蘭氏染色及芽孢染色實(shí)驗(yàn)七酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒定實(shí)驗(yàn)八微生物直接計(jì)數(shù)法及測(cè)微技術(shù)實(shí)驗(yàn)九大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定實(shí)驗(yàn)十水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)十一細(xì)菌細(xì)胞的生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)十二 HYPERLINK /v57518.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 噬菌體的分離、純化及效價(jià)測(cè)定實(shí)驗(yàn)一常用培養(yǎng)基的制備、滅菌與消毒一、實(shí)驗(yàn)?zāi)?/p>

2、的了解培養(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；了解常見(jiàn)滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過(guò)濾除菌的操作方法。二、實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成 HYPERLINK /v553336.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 代謝產(chǎn)物所需要的 HYPERLINK /v735414.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水。根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌囵B(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。 HYPERLINK /v310351.

3、htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 牛肉膏 HYPERLINK /v310345.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時(shí)又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般 HYPERLINK /v1748709.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需要的最基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以可供微生物生長(zhǎng)繁殖之用。干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過(guò)升溫使 HYPERLINK /v7558549.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 蛋白質(zhì)

4、變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。三、試劑與器材1.器材 試管、三角瓶、燒杯、 HYPERLINK /v177090.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、 HYPERLINK /v3735272.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 記號(hào)筆、麻繩、紗布、吸管、 HYPERLINK /v107418.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 培養(yǎng)皿、電 HYPERLINK /v229263.htm?ch=ch.bk.innerlink t _

5、blank 烘箱、注射器、微孔濾膜過(guò)濾器、鑷子等。2.試劑 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、 HYPERLINK /v225942.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 瓊脂四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.稱量溶化調(diào)pH過(guò)濾分裝 HYPERLINK /v408289.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 加塞包扎滅菌無(wú)菌檢查2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品升溫恒溫降溫開(kāi)箱取物3.高壓蒸汽滅菌：加水裝物品加蓋加熱排冷空氣加壓恒壓降壓回零排汽取物無(wú)菌檢查4.過(guò)濾除菌：組裝滅菌連接壓濾無(wú)菌檢查清洗滅菌五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.要嚴(yán)格按配方配制。2.調(diào)pH不要過(guò)頭。3.干熱滅

6、菌要注意物品不要堆放過(guò)緊，注意溫度的時(shí)間控制，70C以下放物、取物。4.高壓滅菌要注意物品不要過(guò)多，加熱后排除冷空氣，到時(shí)降壓回零取物。5.過(guò)濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時(shí)，壓力要適當(dāng)，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。實(shí)驗(yàn)二土壤中微生物分離純化培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆盏蛊桨宓姆椒ê蛶追N常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)；了解不同的微生物 HYPERLINK /v74301.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 菌落在斜面上、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特征；進(jìn)一步熟練和掌握微生物 HYPERLINK /v483922.htm?ch=ch.bk.innerlink t

7、 _blank 無(wú)菌操作技術(shù)；掌握微生物培養(yǎng)方法。二、實(shí)驗(yàn)原理從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱為微生物的分離與純化。常用的分離、純化方法：?jiǎn)渭?xì)胞挑取法，稀釋涂布平板法，稀釋混合平板法， HYPERLINK /v352591.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 平板劃線法稀釋涂布平板法步驟：倒平板制備土壤污水稀釋液涂布培養(yǎng)挑菌落；平板劃線法步驟：倒平板標(biāo)記培養(yǎng)基名稱劃線。三、試劑與器材1.器材 盛9m1無(wú)菌水的試管、盛90m1無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角 HYPERLINK /v176931.htm?ch=ch.bk.innerlink t _b

8、lank 燒瓶、無(wú)菌玻璃涂棒、無(wú)菌吸管、接種環(huán)、酒精燈、無(wú)菌培養(yǎng)皿、顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板等。2.試劑 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基， HYPERLINK /v352430.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 高氏1號(hào)培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.土壤稀釋液的制備2.微生物分離純化：稀釋涂平板法，平皿劃線分離法，微生物培養(yǎng)技術(shù)五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.掌握含菌培養(yǎng)基的配制，嚴(yán)格控制溫度。2.平板劃線應(yīng)防止染菌，同時(shí)應(yīng)注意劃線深度及密度。實(shí)驗(yàn)三菌種保藏一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)并掌握 HYPERLINK /v174262.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blan

9、k 菌種保藏的基本原理。2.掌握常用的幾種不同的菌種保藏方法。二、實(shí)驗(yàn)原理 微生物個(gè)體微小、代謝旺盛、生長(zhǎng)繁殖快，如果保存不妥容易發(fā)生變異和 HYPERLINK /v7642815.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 雜菌污染，甚至導(dǎo)致 HYPERLINK /v7742579.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 細(xì)胞死亡等現(xiàn)象。因此，保存好菌種是非常必要和重要的。常用的菌種保藏方法包括 HYPERLINK /v495159.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 傳代培養(yǎng)法、載體法、懸液法、冷凍法和 HYPERLI

10、NK /v356146.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 真空干燥法三、試劑與器材1.材料 大腸桿菌、 HYPERLINK /v305399.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 青霉菌、放線菌2.試劑 HYPERLINK /v6402859.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 液體石蠟、甘油、 HYPERLINK /v277142.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 五氧化二磷、95乙醇、10鹽酸、無(wú)水氯化鈣、食鹽、干冰3.器材 無(wú)菌吸管、無(wú)菌滴管、無(wú)菌培養(yǎng)皿；安額管、 HYPER

11、LINK /v356341.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 凍干管、40目與100目篩子、油紙、濾紙條(0.5X1.2cm)、 HYPERLINK /v362327.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 干燥器、真泵器、 HYPERLINK /v263024.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 真空泵、真空壓力表、噴燈、L形五通管、冰箱、低溫冰箱(30)、超低溫冰箱和液氮罐等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.斜面保藏法2.液體石蠟法3.穿刺保藏法4.砂土管保藏法5.冷凍真空干燥保存法五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.清楚各種保藏方法

12、的優(yōu)缺點(diǎn)，針對(duì)不同要求選擇適宜的保藏方法。2.熔封 HYPERLINK /v2539359.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 安瓶時(shí)防止封閉不嚴(yán)。3.液氮凍存操作應(yīng)防止凍傷。實(shí)驗(yàn)四細(xì)菌形態(tài)觀察及單染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解簡(jiǎn)單染色法的原理，并掌握其操作方法。2.學(xué)習(xí)并掌握微生物涂片、染色的基本技術(shù)和無(wú)菌操作技術(shù)。3.鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法。4.初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征。二、實(shí)驗(yàn)原理 細(xì)菌個(gè)體微小，且較透明，必須借助染色法使菌體著色，與背景形成鮮明的對(duì)比，以便在顯微鏡下進(jìn)行觀察。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌煞譃楹?jiǎn)單染色法、鑒別染色法和特殊染色法等。簡(jiǎn)單染色法是最基本的染色

13、方法，是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色。此法操作簡(jiǎn)便，適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀察。常用堿性染料進(jìn)行簡(jiǎn)單染色。三、試劑與器材1.材料 大腸桿菌， HYPERLINK /v228266.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 枯草芽孢桿菌2.試劑 呂氏堿性美藍(lán)染液(或草酸銨 HYPERLINK /v374424.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 結(jié)晶紫染液)、齊氏石炭酸復(fù)紅染液。3.器材 顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容簡(jiǎn)單染色法：涂片干燥固定染色水洗干燥鏡檢五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.涂片時(shí)，生理

14、鹽水及取菌不宜過(guò)多，涂片應(yīng)盡可能均勻，2.水洗步驟水流不宜過(guò)大，過(guò)急，以免涂片薄膜脫落。實(shí)驗(yàn)五放線菌及霉菌形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解 HYPERLINK /v57240.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 放線菌、霉菌形態(tài)觀察的原理。2.學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌、霉菌形態(tài)的操作方法。3.初步了解放線菌、霉菌的形態(tài)特征。二、實(shí)驗(yàn)原理 放線菌是指能形成分枝 HYPERLINK /v437242.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 絲狀體或 HYPERLINK /v375292.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 菌絲

15、體的一類 HYPERLINK /v6149288.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。常見(jiàn)放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的叫基內(nèi)菌絲(簡(jiǎn)稱“基絲”)，基絲生長(zhǎng)到一定階段還能向空氣中生長(zhǎng)出 HYPERLINK /v375331.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 氣生菌絲(簡(jiǎn)稱“氣絲”)，并進(jìn)一步分化產(chǎn)生 HYPERLINK /v375341.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 孢子絲及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基絲而無(wú)氣絲。在顯微鏡下直接觀察時(shí)，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲

16、色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。霉菌可產(chǎn)生復(fù)合分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多，常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。人們?cè)O(shè)計(jì)了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài)特征。本實(shí)驗(yàn)采用插片法。插片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌 HYPERLINK /v177625.htm?ch=ch.bk.innerlink

17、t _blank 蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長(zhǎng)而附著在蓋玻上。觀察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長(zhǎng)期的形態(tài)。三、試劑與器材1.材料 HYPERLINK /v118749.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 黑曲霉、 HYPERLINK /v118745.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 青霉和根霉，細(xì)黃鏈霉菌或青色鏈霉菌，滅菌的高氏I號(hào)瓊脂和滅菌的查氏培養(yǎng)基。2.實(shí)驗(yàn)器材 經(jīng)滅菌的：平皿、玻璃紙、無(wú)菌吸管、蓋玻片、玻璃涂棒，以及載玻

18、片、接種環(huán)、接種鏟、鑷子、顯微鏡等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容倒平板接種插片培養(yǎng)鏡檢五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.倒平板要厚一些，接種時(shí)劃線要密。2.插片時(shí)要有一定角度并與劃線垂直。3.觀察時(shí)，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當(dāng)視野，更換高倍鏡觀察。4.如果用0.1%美藍(lán)對(duì)培養(yǎng)后的蓋玻片進(jìn)行染色后觀察，效果會(huì)更好。實(shí)驗(yàn)六革蘭氏染色及芽孢染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解 HYPERLINK /v374351.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 革蘭氏染色法和芽孢染色法的原理，并掌握其操作方法。2.了解革蘭氏染色法在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。3.學(xué)習(xí)并掌握微生物涂片、染色的基本技術(shù)和無(wú)菌操作技術(shù)。4

19、.學(xué)習(xí)顯微鏡(油鏡)的使用方法。5.初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征。二、實(shí)驗(yàn)原理 革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結(jié)晶紫進(jìn)行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脫色，最后用復(fù)染劑(如番紅)復(fù)染。經(jīng)此方法染色后，細(xì)胞保留初染劑藍(lán)紫色的細(xì)菌為 HYPERLINK /v374430.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 革蘭氏陽(yáng)性菌；如果細(xì)胞中初染劑被 HYPERLINK /v7703485.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 脫色劑洗脫而使細(xì)菌染上復(fù)染劑的顏色(紅色)，該菌屬于 HYPERLINK /v123869.htm?ch=ch.bk.i

20、nnerlink t _blank 革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌重要的鑒別特征，為保證染色結(jié)果的正確性，采用規(guī)范的染色方法是十分必要的。芽孢染色法的基本原理，用 HYPERLINK /v397213.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 著色力強(qiáng)的染色劑 HYPERLINK /v747278.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 孔雀綠或石炭酸復(fù)紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進(jìn)入菌體也可進(jìn)入芽孢內(nèi)，進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色難以被水洗脫，當(dāng)用對(duì)比度大的復(fù)染劑染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體和芽孢囊被染成復(fù)染劑的

21、顏色，使芽孢和菌體更易于區(qū)分。三、試劑與器材1.材料：枯草芽孢桿菌1218h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，大腸桿菌約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物2.試劑 革蘭氏染色液(結(jié)晶紫液、碘液、95乙醇、番紅液)。5孔雀綠水溶液3.實(shí)驗(yàn)器材 小試管、滴管、燒杯、 HYPERLINK /v177447.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 試管架、濾紙、木夾子、載玻片、蓋玻片、凹載玻片、無(wú)菌水、顯微鏡等、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)、擦鏡紙、生理鹽水等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.革蘭氏染色法 制片初染媒染脫色復(fù)染鏡檢。2.Schaefer-Fulton氏染色法 制片染色水洗復(fù)染水洗鏡檢。五、關(guān)鍵

22、步驟及注意事項(xiàng)1.涂片時(shí)，生理鹽水及取菌不宜過(guò)多，涂片應(yīng)盡可能均勻，2.乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，嚴(yán)格掌握脫色時(shí)間。實(shí)驗(yàn)七酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.觀察酵母菌的形態(tài)特征、 HYPERLINK /v7671701.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 出芽生殖方式，并掌握酵母菌與細(xì)菌形態(tài)特征的區(qū)別。2.學(xué)習(xí)鑒別死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。二、實(shí)驗(yàn)原理 酵母菌是單細(xì)胞的真核微生物，菌體比細(xì)菌大而且不運(yùn)動(dòng)。酵母菌的繁殖方式分為 HYPERLINK /v375361.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 無(wú)性繁殖和 HYPER

23、LINK /v417749.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 有性繁殖兩種，以無(wú)性繁殖為主。芽殖是酵母菌普遍的無(wú)性繁殖方式，少數(shù)為裂殖；有性繁殖是產(chǎn)生子囊和 HYPERLINK /v7512277.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 子囊孢子。本實(shí)驗(yàn)是通過(guò)美藍(lán)染液水浸片和水一碘液水浸片來(lái)觀察酵母的形態(tài)和芽殖方式。 美藍(lán)是一種無(wú)毒性的染料，它的氧化型呈藍(lán)色，還原型無(wú)色。用美藍(lán)對(duì)酵母活細(xì)胞染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o(wú)色的還原型，而對(duì)代謝作用微弱或 HYPERLINK /v355630

24、.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 死細(xì)胞，無(wú)此還原能力或還原能力極弱，而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。因此，不僅用此法可觀察酵母細(xì)胞形態(tài)，也可用來(lái)鑒別酵母菌的死細(xì)胞和活細(xì)胞。三、試劑與器材1.材料 釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡爾酵母(Saccharomyces calsbergensis)培養(yǎng)2天左右的麥芽汁(或豆芽汁)液體培養(yǎng)物。2.試劑 0.05和O.1呂氏堿性美藍(lán)染色液、革蘭氏染色用的碘液。3.器材 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、灑精燈等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.美藍(lán)浸片觀察 酵母培養(yǎng)制片染色鏡檢30分鐘后再鏡檢2.水-碘浸片觀察五

25、、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.染液不宜過(guò)多或過(guò)少，否則，在蓋上蓋玻片時(shí)，菌液溢出或出現(xiàn)大量氣泡。2.用鑷子取一塊蓋玻片，先將一側(cè)與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下，使其蓋在菌液上，蓋玻片不宜平著放下，避免氣泡產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)八 微生物直接計(jì)數(shù)法及測(cè)微技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)原理，并掌握計(jì)數(shù)方法。2.掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物大小的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將一定稀釋的菌體或孢子懸液注入血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室中，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法。因?yàn)橛?jì)數(shù)板是一塊特別的載玻片。其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各刻有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)

26、共分為九個(gè)大方格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格(見(jiàn)圖2344)；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，無(wú)論哪種每個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)。每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為01mm，所以計(jì)數(shù)室的容積為01mm3。計(jì)數(shù)時(shí)，通常只用5個(gè)中格內(nèi)的菌體(孢子)數(shù)即可。然后求出每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，得出一個(gè)大方格中的總茵數(shù)，再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。若設(shè)5個(gè)中方格中總菌數(shù)為N，菌液稀釋倍數(shù)為M，如果是25個(gè)中方格計(jì)數(shù)板，則計(jì)算方法為：lml菌液中的總菌數(shù)=平均每個(gè)中格中菌的個(gè)數(shù)25104M=50000NM(個(gè))微生物細(xì)胞的大小是微

27、生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小的測(cè)定，需要在顯微鏡下，借助于特殊的測(cè)量工具測(cè)微尺，包括目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺。鏡臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般是將1mm等分為100格，每格長(zhǎng)001mm(即10pm)。鏡臺(tái)測(cè)微尺并不直接用來(lái)測(cè)量細(xì)胞的大小，而是用于校正目鏡測(cè)微尺每格的相對(duì)長(zhǎng)度。三、試劑與器材1.材料 釀酒酵母、藤黃微球菌和大腸桿菌的染色標(biāo)本片、釀酒酵母24h馬鈴薯斜面培養(yǎng)物。2.實(shí)驗(yàn)器材 細(xì)胞計(jì)數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、無(wú)菌毛細(xì)滴管、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.微生物直接計(jì)數(shù)法 菌懸液制備鏡檢計(jì)數(shù)室加樣品顯微鏡計(jì)數(shù)清洗血細(xì)

28、胞計(jì)數(shù)板2.微生物測(cè)微技術(shù) 裝目鏡測(cè)微尺校正菌體大小測(cè)定五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.防止加樣空氣泡產(chǎn)生。2.調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)。實(shí)驗(yàn)九大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解大腸桿菌的 HYPERLINK /v352274.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 生長(zhǎng)曲線特征和繁殖規(guī)律，并學(xué)會(huì)繪制生長(zhǎng)曲線。2.復(fù)習(xí)光電比濁法測(cè)量細(xì)菌數(shù)量的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理 將一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。不同的細(xì)菌在相

29、同的培養(yǎng)條件下其生長(zhǎng)曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長(zhǎng)曲線也不相同。三、試劑與器材1.材料與試劑 大腸桿菌、LB液體培養(yǎng)基70ml、分裝2支大試管(5ml支)、剩余60ml裝入250ml的三角瓶。2.器材 722型分光光度計(jì)、恒溫振蕩搖床、無(wú)菌試管、無(wú)菌吸管等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容編號(hào)接種培養(yǎng)比濁測(cè)定五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.測(cè)定OD值時(shí)，要求從低濃度到高濃度測(cè)定2.嚴(yán)格控制培養(yǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)十水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)水樣的采取方法和水樣 HYPERLINK /v809955.htm?ch=ch.bk.innerlink t _blank 細(xì)菌總數(shù)測(cè)定的方法。2.了解水源水的平

30、板菌落計(jì)數(shù)的原理。二、實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用平板計(jì)數(shù)技術(shù)測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù)。由于水中細(xì)菌種類繁多，它們對(duì)營(yíng)養(yǎng)和其他生長(zhǎng)條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使水中所有的細(xì)菌均能生長(zhǎng)繁殖，因此，以一定的培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)出來(lái)的菌落，計(jì)算出來(lái)的水中細(xì)菌總數(shù)僅是一種近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。三、試劑與器材1.試劑 牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，滅菌水2.器材 滅菌三角瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養(yǎng)皿，滅菌吸管，滅菌試管等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.水樣的采取2.細(xì)菌總數(shù)測(cè)定3.菌落計(jì)數(shù)方法五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.注意全過(guò)程防止染菌實(shí)驗(yàn)十一細(xì)菌細(xì)胞的生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私獠⒄莆占?xì)菌鑒定中常用生理生化反應(yīng)的原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)原理 各種細(xì)菌由于具有不同的酶系統(tǒng)，致使它們能利用不同的底物，或雖然可以利用相同的底物，卻產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物，因此可以利用各種生理生化反應(yīng)來(lái)鑒別細(xì)菌。 糖發(fā)酵是最常用的生化反應(yīng)，存在于大多數(shù)細(xì)菌中。不同的細(xì)菌在糖的分解能力上存在很大的差異。有些細(xì)菌能分解某種糖并產(chǎn)生酸性物質(zhì)(如