1、胃切除術(shù)對(duì)大鼠骨密度及鈣磷含量的影響【摘要】目的討論胃切除術(shù)對(duì)大鼠骨密度及鈣、磷含量影響的實(shí)驗(yàn)研究。方法采用胃切除術(shù)建立大鼠骨質(zhì)疏松模型共60只，并將其分為5組：胃竇切除術(shù)組、胃底切除術(shù)組、全胃切除術(shù)組、空白對(duì)照組和假手術(shù)組各12只；術(shù)后6個(gè)月，應(yīng)用雙能X線(xiàn)吸收法DEXA檢測(cè)大鼠股骨骨密度，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)鈣、磷等骨代謝生化指標(biāo)，對(duì)結(jié)果進(jìn)展比擬。結(jié)果與空白對(duì)照組比擬，胃切除術(shù)組大鼠股骨骨密度值顯著降低P0.05；血清堿性磷酸酶、甲狀旁腺激素、血清無(wú)機(jī)磷均升高P0.05；血清總鈣、降鈣素、骨鈣素均降低P0.05。結(jié)論胃切除術(shù)后可以顯著降低大鼠股骨的骨密度和骨礦含量，血清ALP、P升高，腸

2、鈣吸收低下，分泌減少，BGP分泌減少，分泌亢進(jìn)的情況下，骨吸收明顯增強(qiáng)，這樣骨吸收遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于骨形成，導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的發(fā)生?！娟P(guān)鍵詞】胃切除術(shù)；骨質(zhì)疏松癥；大鼠；骨密度；鈣；磷Abstrat:bjetiveTexplretheeffetsfGastretynbneineraldensityandaliuandphsphrusinrats.ethdsThegastretyasusedtestablisharatdelfsteprsis.60ratseredividedintfivegrupsand12ineahgrup:Antralresetingrup,Gastriresetingrup,Ttalg

3、astretygrup,ntrlgrup,Sha-peratedgrup.Aftersixnths,DEXAasadptedtdetetratfeurBD,andAutatibiheialanalyzerasusedtdetetaliuandphsphrus.Resultsparedithntrlgrup,gastretyP0.05;ALP,PTH,PereinreasedP0.05;a,T,BGPeredereasedP0.05.nlusinGastretyansignifiantlyredueferalBDandBinrats，inreaseALP、P,lerintestinalabsrp

4、tinfaliuandT,BGPseretin，PTH.Keyrds:Gastrety;steprsis;Rats;BD;a;P骨質(zhì)疏松癥是以骨強(qiáng)度下降、骨折風(fēng)險(xiǎn)性增加為特征的骨骼系統(tǒng)疾病,骨強(qiáng)度反映了骨骼的兩個(gè)主要方面,即骨礦密度和骨質(zhì)量。在我國(guó)骨質(zhì)疏松委員會(huì)參考世界衛(wèi)生組織(H)的標(biāo)準(zhǔn)提出了骨質(zhì)疏松診斷的試行標(biāo)準(zhǔn)。這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)的主要手段是應(yīng)用雙能X線(xiàn)吸收法診察。本研究通過(guò)對(duì)大鼠采用胃切除術(shù)后骨密度及鈣、磷含量變化的影響，討論繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的病理機(jī)制。1材料1.1動(dòng)物清潔級(jí)SD大鼠60只，雄性，體質(zhì)量300350g,月齡45月，由中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。答應(yīng)證編號(hào)：軍。

5、1.2試劑及儀器甲狀旁腺素和降鈣素放射免疫分析試劑盒均購(gòu)自原子高科股份；血清骨鈣素BGP放免藥盒購(gòu)自北京福瑞生物工程公司。雙能X線(xiàn)骨密度儀DEXA，LUNAR.PRDIGY,美國(guó)GE；全自動(dòng)生化分析儀LYPUSAU2700；湘儀離心機(jī)TD5A-S；電子天平(SPS202F)；放射免疫計(jì)數(shù)器G-1200中佳光電。2方法2.1分組及手術(shù)方法成年雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分為5組，每組12只，并記錄每只大鼠的體質(zhì)量，A組為空白對(duì)照組、B組為假手術(shù)組、組為胃竇切除術(shù)組、D組為胃底切除術(shù)組、E組為全胃切除術(shù)組。2.2模型制備及取材正常適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，觀(guān)察并記錄鼠毛的色澤與疏密、眼睛的色澤與靈敏性、大便和

6、大鼠的活動(dòng)情況。實(shí)驗(yàn)組SD大鼠禁食24h，禁水8h后，在3%戊巴比妥鈉麻醉下按無(wú)菌操作法分別行胃竇切除術(shù)組、胃底切除術(shù)D組、全胃切除術(shù)E組，假手術(shù)B組在同等手術(shù)條件下行胃體周?chē)植恐窘M織切除術(shù)。術(shù)后給予青霉素80萬(wàn)單位肌肉注射，0.1l/只，單籠飼養(yǎng)，禁食2d，禁水1d，第3天少量粉末飼料，飲水不拘，第6天正常飲食。術(shù)后飼養(yǎng)期間每周測(cè)量并記錄每只鼠的體質(zhì)量1次，觀(guān)察并記錄鼠毛的色澤與疏密、眼睛的色澤與靈敏性、大便及大鼠的活動(dòng)情況1次，術(shù)后6個(gè)月實(shí)驗(yàn)到期，在3%戊巴比妥鈉麻醉下心臟采血510l，-20冰箱保存。處死大鼠，完好取出大鼠右股骨，剔凈軟組織后，用含生理鹽水容器浸泡，將股骨編號(hào)，置于-

7、80冰箱保存。2.3指標(biāo)的檢測(cè)方法骨量指標(biāo)的測(cè)定：測(cè)定時(shí)將標(biāo)本放置于美國(guó)GE，LUNAR，PRDIGY型雙能X線(xiàn)骨密度儀的探頭下，應(yīng)用小動(dòng)物軟件進(jìn)展股骨的掃描，記錄骨密度數(shù)據(jù)。骨代謝生化指標(biāo)的測(cè)定：包括堿性磷酸酶、血清總鈣、無(wú)機(jī)磷的檢測(cè)，均采用全自動(dòng)生化分析儀LYPUSAU2700檢測(cè)其大鼠血清；骨鈣素、甲狀旁腺激素、降鈣素的檢測(cè)，均采用放射免疫計(jì)數(shù)器G-1200檢測(cè)其大鼠血清，測(cè)得指標(biāo)。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用軟件進(jìn)展數(shù)據(jù)處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)量資料皆以s表示，主要采用單因素方差分析進(jìn)展數(shù)據(jù)處理，組間兩兩比擬，采用LSD檢驗(yàn)。以=0.05為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),以P0.05為差異有顯著意義。3結(jié)果3.1胃切除術(shù)對(duì)

8、骨轉(zhuǎn)換的評(píng)價(jià)指標(biāo)-骨密度的影響結(jié)果見(jiàn)表1。表1胃切除術(shù)對(duì)大鼠右股骨骨密度，骨礦鹽含量的影響略表1顯示,胃切除術(shù)三組與空白對(duì)照、假手術(shù)組比擬BD和B均降低，且有顯著性差異(P0.01)，而空白對(duì)照組與假手術(shù)組差異無(wú)顯著性(P0.05)，且胃竇切除術(shù)組與胃底切除術(shù)組作用相似，差異無(wú)顯著性(P0.05)。3.2胃切除術(shù)對(duì)骨代謝生化指標(biāo)的影響結(jié)果見(jiàn)表2。表2胃切除術(shù)對(duì)骨吸收指標(biāo)血清總鈣、清無(wú)機(jī)磷的影響略表2顯示,胃切除術(shù)3組a程度均低于空白對(duì)照和假手術(shù)組(P0.05)；而胃切除術(shù)3組P程度均高于空白對(duì)照和假手術(shù)組(P0.05)，且a、P指標(biāo)，空白對(duì)照組與假手術(shù)組差異無(wú)顯著性(P0.05)，胃竇切除術(shù)組

9、與胃底切除術(shù)組作用相似，差異無(wú)顯著性(P0.05)。表3胃切除術(shù)對(duì)骨形成指標(biāo)血清堿性磷酸酶、骨鈣素的影響略表3顯示ALP指標(biāo)，胃切除術(shù)3組程度均高，于空白對(duì)照組和假手術(shù)組(P0.05)，而B(niǎo)GP指標(biāo)：胃切除術(shù)3組程度均低于空白對(duì)照組和假手術(shù)組(P0.05)；且ALP、BGP指標(biāo)空白對(duì)照組與假手術(shù)組差異無(wú)顯著性(P0.05)，胃竇切除術(shù)組與胃底切除術(shù)組作用相似，差異無(wú)顯著性(P0.05)。表4胃切除術(shù)對(duì)鈣磷代謝調(diào)節(jié)指標(biāo)：甲狀旁腺激素及降鈣素的影響略表4顯示,胃切除術(shù)3組PTH程度均高于空白對(duì)照和假手術(shù)組(P0.05)；而HT指標(biāo)那么胃切除術(shù)3組均低于空白對(duì)照和假手術(shù)組(P0.05)，且PTH、H

10、T指標(biāo)，空白對(duì)照組與假手術(shù)組差異無(wú)顯著性(P0.05)，胃竇切除術(shù)組與胃底切除術(shù)組作用相似，差異無(wú)顯著性(P0.05)。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.4討論骨質(zhì)疏松癥steprsis，簡(jiǎn)稱(chēng)P是以骨量降低和骨組織顯微構(gòu)造破壞為特征，導(dǎo)致骨脆性增加和易于骨折的代謝性骨病1。中醫(yī)“骨痿與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的P概念根本相似。就病因病機(jī)而言,歷代醫(yī)家多從“腎主骨，“腎藏精,主骨生髓等方面出發(fā),認(rèn)為與“腎虛有關(guān)。腎為先天之本,脾為后天之本,脾主運(yùn)化,充養(yǎng)腎精,?素問(wèn)五臟生成篇?:“腎之合骨也,其榮在發(fā),其主脾也,假設(shè)脾虛,腎失所養(yǎng),進(jìn)一步可導(dǎo)致腎虛,從而使骨髓失養(yǎng)而致骨痿。P的發(fā)生是一個(gè)漸進(jìn)的過(guò)程，BD的改變比骨代謝生化標(biāo)

11、志物的改變要慢，血中骨代謝生化檢查能較早發(fā)現(xiàn)骨代謝異常，因此在P的早期診斷中具有重要價(jià)值。將BD法和骨代謝生化標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)合應(yīng)用，能早期、快速地作出正確診斷，判斷療效，調(diào)整治療方案。4.1胃切除術(shù)對(duì)模型大鼠股骨骨密度、骨礦含量的影響骨密度BD是指骨骼單位面積中礦物質(zhì)的含量。骨礦物含量減少即骨密度下降是骨質(zhì)疏松的主要病理表現(xiàn)。H以骨密度測(cè)值法中“T-2.5SD為診斷骨質(zhì)疏松癥的“金標(biāo)準(zhǔn)2。BD是目前診斷骨質(zhì)疏松、估計(jì)骨質(zhì)疏松的程度、預(yù)測(cè)脆性骨折風(fēng)險(xiǎn)和評(píng)價(jià)藥物干預(yù)療效的最正確定量指標(biāo)3。對(duì)于正常骨骼形態(tài)、骨質(zhì)代謝及吸收性骨病，骨吸收與骨合成的動(dòng)態(tài)平衡起著決定性作用。故本實(shí)驗(yàn)以骨密度作為評(píng)價(jià)模型制備

12、成功的標(biāo)準(zhǔn)。測(cè)量BD的方法多種多樣，目前對(duì)骨量或骨密度主要采用定量測(cè)量的方法，尤以雙能X線(xiàn)吸收法(DEXA)是目前國(guó)內(nèi)、外測(cè)量的最常用方法。DEXA具有準(zhǔn)確性高、準(zhǔn)確度高、輻射劑量低、掃描時(shí)間短、調(diào)節(jié)穩(wěn)定、重復(fù)檢查誤差小等優(yōu)點(diǎn)。DEXA在人體骨量、骨密度測(cè)量以及骨質(zhì)疏松的預(yù)防、診斷和治療過(guò)程中均起著重要的作用4，5。目前認(rèn)為雙能X線(xiàn)吸收法(DEXA)是骨密度(BD)檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)6。本實(shí)驗(yàn)研究說(shuō)明，雄性大鼠胃切除術(shù)6個(gè)月后，胃切除術(shù)組股骨BD低于空白對(duì)照組，差異顯著，尤其全胃切除術(shù)組顯著差異，說(shuō)明動(dòng)物模型復(fù)制成功。其機(jī)理可能是胃切除術(shù)造成胃腸營(yíng)養(yǎng)吸收障礙，抑制成骨細(xì)胞活性，使骨形成減少，同時(shí)可

13、引起機(jī)體鈣、磷和等代謝的變化，促進(jìn)骨吸收，最終導(dǎo)致骨代謝處于骨吸收大于骨形成的負(fù)平衡狀態(tài)，出現(xiàn)骨量喪失，誘發(fā)P。4.2胃切除術(shù)對(duì)骨代謝生化指標(biāo)的影響4.2.1胃切除術(shù)對(duì)骨形成標(biāo)志物的影響血清堿性磷酸酶ALP是最常應(yīng)用的評(píng)價(jià)骨形成和骨轉(zhuǎn)換的重要的生化指標(biāo)，臨床上將其作為P診斷的參考指標(biāo)。骨形成時(shí)成骨細(xì)胞可分泌大量的ALP參與骨的礦化，因此，ALP活性反映骨形成的活潑程度，血清中約50%ALP來(lái)源于骨，另一半來(lái)源于肝臟。Ere等7及Lee等8研究認(rèn)為，血清ALP含量隨年齡增加而增加，其變化與BGP的變化呈正相關(guān)，與骨中礦物質(zhì)含量的變化呈負(fù)相關(guān)。從表3可知，與空白對(duì)照組相比，胃切除術(shù)組ALP明顯升高

14、，說(shuō)明代償性骨形成增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其主要機(jī)制可能是胃切除術(shù)對(duì)ALP的分泌具有促進(jìn)作用，進(jìn)而引起異常骨代謝。血清骨鈣素(BGP)又稱(chēng)2羧基谷氨酸蛋白，是一種相對(duì)分子質(zhì)量為52005900KD的依賴(lài)維生素K富含谷氨酸的非膠原蛋白，主要由成骨細(xì)胞產(chǎn)生和分泌,其生理功能是維持骨的正常礦化速度,血清BGP可作為評(píng)估骨轉(zhuǎn)換率及骨形成的特異指標(biāo)9。大量研究說(shuō)明，血循環(huán)中BGP濃度反映骨形成速率10。血循環(huán)中BGP含量減少或增加是成骨細(xì)胞活性變化的結(jié)果，與骨吸收無(wú)關(guān)，它反映骨代謝的瞬間變化11。Delas認(rèn)為，當(dāng)骨形成與骨吸收耦聯(lián)時(shí)，BGP是反映骨轉(zhuǎn)換的指標(biāo)；當(dāng)骨形成與骨吸收解耦聯(lián)時(shí)，BGP是

15、反映骨形成的特異性指標(biāo)，可直接反映骨形成的速率。也有學(xué)者認(rèn)為，完好BGP反映骨形成，BGP片段反映骨吸收，這些有待于進(jìn)一步討論12。從表3可知，胃切除術(shù)組BGP明顯低于空白對(duì)照組，說(shuō)明胃切除術(shù)對(duì)BGP的分泌具有抑制作用，而B(niǎo)GP分泌減少，說(shuō)明骨形成降低，進(jìn)而引發(fā)P。4.2.2胃切除術(shù)對(duì)骨吸收標(biāo)志物的影響血鈣和尿鈣是反映骨吸收的主要生化指標(biāo)之一，血清鈣和離子鈣對(duì)各種代謝性骨病的診斷和鑒別診斷有重要意義。從表2可知:胃切除術(shù)對(duì)血鈣的分泌具有促進(jìn)作用。P的病理機(jī)制主要是血鈣程度下降，使分泌增多，它作用環(huán)磷酸腺苷使其升高，造成破骨細(xì)胞活性增強(qiáng)，骨吸收加速，骨鈣溶出，骨吸收超過(guò)骨形成，發(fā)生P13。而血鈣

16、的降低是由于鈣吸收的下降，鈣吸收低下是由于低鈣飲食，低維生素或低活性維生素及日照缺乏和長(zhǎng)期臥床、高磷飲食攝入等造成。從表2可知，與空白對(duì)照組比擬，胃切除術(shù)組血清無(wú)機(jī)磷含量明顯升高。P也是反映骨吸收的主要生化指標(biāo)，磷在體內(nèi)的含量?jī)H次于鈣，刺激骨釋放、。鈣離子、維生素代謝產(chǎn)物可促進(jìn)直腸對(duì)磷的吸收。其機(jī)理可能是高磷可使細(xì)胞外液的濃度升高，使細(xì)胞內(nèi)鈣濃度降低，/比率下降，尤其鈣離子濃度下降，使分泌亢進(jìn)，骨吸收增加，造成骨營(yíng)養(yǎng)不良，誘發(fā)P13。4.2.3胃切除術(shù)對(duì)骨轉(zhuǎn)換有關(guān)的鈣調(diào)激素的影響甲狀旁腺素，能增強(qiáng)破骨細(xì)胞活性，促進(jìn)骨的吸收，使骨鈣釋放入血。還能減少近端腎小管對(duì)磷的重吸收，而增加鈣的重吸收，促進(jìn)腎的活性維生素的轉(zhuǎn)化，間接促進(jìn)腸鈣吸收，最終結(jié)果是血鈣濃度增加。具有調(diào)節(jié)機(jī)體骨內(nèi)鈣離子濃度的功能。而合成和分泌與血鈣離子濃度呈負(fù)反應(yīng)機(jī)制，即鈣離子濃度降低，刺激分泌增加。從表4可知:胃切除術(shù)對(duì)的分泌具有促進(jìn)作用。分泌增加使骨鈣溶出，血鈣增加，骨吸收作用增強(qiáng)，骨量減少，導(dǎo)致P13。從表4可知，與空白對(duì)照組比擬，胃切除術(shù)組明顯降低。其機(jī)理可能是胃切除術(shù)對(duì)的分泌具有抑制作用，而既能抑制破骨細(xì)胞的活性，阻礙骨吸收，又能抑制和活性維生素D的活性，降低血鈣濃度，從而導(dǎo)致P13?？傊緦?shí)