1、實驗三 蠶豆細(xì)胞微核試驗在環(huán)境監(jiān)測中的應(yīng)用 植物生物學(xué)實驗植物生態(tài)學(xué)實驗部分1前言隨著社會的發(fā)展，工業(yè)化水平的不斷提高，大量有毒有害的廢棄物排放到大氣、水體和土壤中，給環(huán)境帶來巨大危害，控制環(huán)境污染就需要一些行之有效的檢測手段。應(yīng)用蠶豆根尖微核試驗監(jiān)測環(huán)境致突變物，簡便可靠，經(jīng)濟(jì)易行，是國際上廣泛使用的環(huán)境監(jiān)測方法。2微核如何產(chǎn)生？誘變因素如射線、重金屬污染的水體與土壤、有機(jī)廢水等導(dǎo)致的DNA鏈的初級損傷如堿基交聯(lián)、聚合、取代基的結(jié)合或DNA鏈斷裂，或經(jīng)過一次S期的錯誤復(fù)制，或經(jīng)過G2期的一次錯誤修復(fù)便可出現(xiàn)畸變，再經(jīng)過一次細(xì)胞分裂，方形成微核。3為何蠶豆根尖微核試驗可用于環(huán)境監(jiān)測？隨著誘變因

2、素水平的升高，錯誤復(fù)制與錯誤修復(fù)機(jī)率增加，微核形成機(jī)率也增加了。反之，高的微核發(fā)生率也就意味著環(huán)境中高的誘變因素水平。4應(yīng)用舉例評估污水處理廠污水處理效率：對污水處理前后的微核千分率進(jìn)行比較，可有效指示污水處理效果。對化妝品致突變作用的檢測：嵇慶等（1994）用蠶豆根尖微核法檢測了10種脂溶性面霜的致突變性，結(jié)果其中的3種有致突變作用。5為什么要以蠶豆根尖為試驗材料？染色體數(shù)較少（2n=12）且形體大，便于觀察對誘變物的反應(yīng)較敏感，微核本底值較低根尖分生組織有大量的細(xì)胞同步進(jìn)行有絲分裂便宜6如何在顯微鏡下判斷微核？在400倍顯微鏡下，凡小于主核1/4以下的，同主核有相同染色效果的，圓形、橢圓形或其他類似形狀的染色物質(zhì)都可以算作微核。 7微核千分率與微核細(xì)胞千分率的區(qū)別一般情況下，有微核的細(xì)胞中只有一個微核存在，但也有極少數(shù)的例外，一個細(xì)胞中含有兩個、三個甚至更多的微核。微核細(xì)胞千分率是指每一千個細(xì)胞中含有微核的細(xì)胞個數(shù)。微核千分率是指每一千的細(xì)胞中所含微核數(shù)。8實驗步驟蠶豆培養(yǎng)（約5-6天）待測液處理（1天）恢復(fù)培養(yǎng)（1天）根尖固定（1天）解離（15-20分鐘）染色（5分鐘）制片觀察、微核計數(shù)9微核千分率與鎘離子濃度的關(guān)系1011蠶豆（Vicia faba ）12使用顯微鏡觀察微核的注意事項不要隨意挪動顯微鏡鏡頭臟了要使用鏡頭紙擦拭調(diào)整焦距時不要一直使用粗螺旋先用低倍鏡確定視野