1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選復(fù)方降脂靈的提取工藝【摘要】目的優(yōu)選中藥復(fù)方降脂靈的提取工藝。方法采用正交實(shí)驗(yàn)法，以出膏率和提取液中齊墩果酸的含量為指標(biāo)進(jìn)展優(yōu)眩結(jié)果復(fù)方降脂靈的最正確提取工藝為加水12倍量，提取3次，2h/次。結(jié)論對(duì)于出膏率，提取次數(shù)有顯著性影響；對(duì)于齊墩果酸，提取次數(shù)、加水量和提取時(shí)間3個(gè)因素均無(wú)顯著性影響。【關(guān)鍵詞】復(fù)方降脂靈正交實(shí)驗(yàn)提取工藝齊墩果酸出膏率復(fù)方降脂靈(原名丹七降脂湯)為廣東藥學(xué)院郭姣教授臨床經(jīng)歷方，主要由女貞子、白術(shù)、杜仲等8味中藥組成，臨床上在降血脂、降血糖和改善血流變等方面均有良好的作用。其湯劑和粉末膠囊經(jīng)臨床、初步藥效學(xué)研究，均證實(shí)療效確切而無(wú)明顯毒副作用1。女貞子是本

2、復(fù)方中的君藥，而齊墩果酸是女貞子的主要藥效成分之一。齊墩果酸除了能用于治療急性黃疸型肝炎、慢性遷延型與活動(dòng)型肝炎和抗癌輔佐藥物外，還具有降糖、降血脂、抗炎、抗病毒、抗衰老及增強(qiáng)免疫的作用2。通過(guò)水提娶90乙醇提娶70乙醇提娶半仿生提取和綜合提取等不同提取工藝的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果說(shuō)明以水提取法的藥效為最好3。水提取法工藝簡(jiǎn)單、本錢(qián)低，而且藥效好。為了研究水提取工藝的最正確條件，用正交實(shí)驗(yàn)法，以出膏率和齊墩果酸含量為考察指標(biāo)，對(duì)水提取工藝條件進(jìn)展優(yōu)選，為消費(fèi)提供根據(jù)。1材料與儀器1.1材料女貞子、杜仲、大薊、白術(shù)、田七等中藥均購(gòu)自廣東省藥材公司，經(jīng)廣東藥學(xué)院生藥學(xué)專(zhuān)家劉基柱教師鑒定為真品。1.2儀器

3、與試劑T6紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)北京普析通用儀器；HH-6電子恒溫水浴鍋蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品；GZX-9420BE電熱恒溫鼓風(fēng)枯燥箱上海博迅實(shí)業(yè)醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng)。齊墩果酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；香草醛指示劑，天津市福晨化學(xué)試劑廠(chǎng)；薄層層析硅膠H層析用，青島海洋化工廠(chǎng)和羧甲基纖維素納鹽-Na8001200為化學(xué)純；其它試劑均為分析純。齊墩果酸對(duì)照品使用液：精細(xì)稱(chēng)定齊墩果酸對(duì)照品10g，用三氯甲烷配制成濃度為0.2g/l的溶液。硅膠板的制備：稱(chēng)取硅膠H5g，放入研缽中，參加1-Na溶液適量，調(diào)成糊狀，均勻涂布于干凈的玻璃板(204)上，使其外表均勻光滑。于室溫下晾干后，置于烘箱內(nèi)加熱活化，在溫度10

4、5左右保持活化30in，然后放入枯燥箱中保存，備用。2方法2.1工藝設(shè)計(jì)采用加熱回流的提取方法，提取時(shí)選擇了加水量、提取時(shí)間及提取次數(shù)3個(gè)因素，每個(gè)因素選取三個(gè)程度設(shè)計(jì)了正交實(shí)驗(yàn)方案，實(shí)驗(yàn)因素程度見(jiàn)表1。根據(jù)以上因素程度,選擇L9(3)4正交設(shè)計(jì)表，按照正交實(shí)驗(yàn)表項(xiàng)下的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)展提取，用出膏率及齊墩果酸的含量作為考察指標(biāo)，對(duì)水提工藝條件進(jìn)展優(yōu)眩2.2樣品溶液的制備藥材經(jīng)60恒溫烘30in，稍加搗碎，稱(chēng)取處方藥材共64g。按正交實(shí)驗(yàn)表項(xiàng)下設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)條件以加熱回流方式進(jìn)展提取，合并水提取液。將上述提取液濃縮，定容至一定體積，制得樣品溶液。表1提取實(shí)驗(yàn)程度因素略2.3出膏率測(cè)定精細(xì)量取一定體積樣品

5、溶液，置于已枯燥恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸發(fā)至近干，再放置烘箱于105烘34h，置枯燥器中冷卻至室溫，精細(xì)稱(chēng)量質(zhì)量，按下式計(jì)算出膏率。出膏率%=VV100%(g)為浸膏質(zhì)量，(g)為藥材質(zhì)量，V為樣品溶液總體積，V為量取樣品溶液的體積。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4齊墩果酸的含量測(cè)定2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備采用高氯酸香草醛比色法測(cè)定齊墩果酸的含量4。精細(xì)量取齊墩果酸對(duì)照品使用液0.2g/l的三氯甲烷溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6l0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2g，分別置于刻度離心管中，水浴揮干溶劑，各精細(xì)參加5香草醛乙酸溶液0.2l，高氯酸0.8l，混勻，置于

6、70恒溫水浴上加熱15in，冷卻至室溫，精細(xì)參加醋酸乙酯4l，搖勻。以試劑為空白，在555n處測(cè)定吸光度值，結(jié)果見(jiàn)表2。并以吸光度A對(duì)對(duì)照品使用液體積V進(jìn)展直線(xiàn)回歸，得回歸方程A0.9425V0.0052，r=0.9978。表2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)測(cè)定數(shù)據(jù)略2.4.2樣品測(cè)定精細(xì)量取一定體積的樣品溶液，濃縮成稠膏，枯燥，稱(chēng)量質(zhì)量。精細(xì)稱(chēng)取上述膏體10g于圓底燒瓶中，參加三氯甲烷30l，70恒溫水浴回流1h。用分液漏斗分出三氯甲烷層，于殘?jiān)性賲⒓尤燃淄?0l，同樣回流提取1h，合并三氯甲烷溶液，無(wú)水Na2S4枯燥，過(guò)濾，揮干溶劑，再用三氯甲烷定容至5.00l，備用。用精細(xì)汲取樣品溶液5l，對(duì)照品溶液30

7、l點(diǎn)于同一硅膠板上，用三氯甲烷甲醇冰乙酸54011展開(kāi)10，取出，揮干溶劑，再放入飽和碘蒸氣缸中顯色，定位后再揮去碘，將斑點(diǎn)分別刮入具塞刻度離心管中，各參加5香草醛乙酸溶液0.2l，高氯酸0.8l，混勻，同“2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備項(xiàng)下操作。離心后取上清液于555n處測(cè)定吸光度，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)在硅膠板上刮取與樣品斑點(diǎn)同樣大小的空白硅膠進(jìn)展實(shí)驗(yàn)。根據(jù)吸光度A，由回歸方程計(jì)算出齊墩果酸的含量。3結(jié)果出膏率正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，因素的極差很小，因此把因素與空白項(xiàng)合并，作為誤差項(xiàng)，方差分析結(jié)果見(jiàn)表4。齊墩果酸含量測(cè)定正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5，方差分析結(jié)果見(jiàn)表6。表3出膏率L9(3)4正交實(shí)驗(yàn)略由表

8、3可見(jiàn)，RARBR，說(shuō)明對(duì)出膏率的影響程度依次為AB，即提取次數(shù)是主要因素，其次是加水量，提取時(shí)間的影響最校A因素中A3A2A1，B因素B3B2B1，因素321，從節(jié)約的角度，選擇2。從表4可見(jiàn)，提取次數(shù)對(duì)出膏率有顯著影響，加水量和提取時(shí)間無(wú)顯著性影響。因此，以出膏率為指標(biāo)，優(yōu)選出復(fù)方降脂靈水提取工藝的最正確條件為A3B32。表4出膏率方差分析略從表5可見(jiàn)，優(yōu)先順序?yàn)锳B，即提取次數(shù)是主要因素，其次是提取時(shí)間，加水量的影響最校A因素中A3A2A1，B因素B3B1B2，因素231。由表6可見(jiàn)，提取次數(shù)，加水量和提取時(shí)間3個(gè)因素對(duì)齊墩果酸的含量均無(wú)顯著性影響。因此，以齊墩果酸含量為指標(biāo)，優(yōu)選出復(fù)方

9、降脂靈水提取工藝的最正確條件為A3B32。表5齊墩果酸L9(3)4正交實(shí)驗(yàn)略表6齊墩果酸方差分析略正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，綜合出膏率和齊墩果酸含量指標(biāo)，最正確提取工藝為A3B32，即加水量為藥材量的12倍，提取時(shí)間2h及提取3次，出膏率及所得齊墩果酸的含量最高。對(duì)于出膏率，提取次數(shù)有顯著性影響，加水量和提取時(shí)間無(wú)顯著性影響；對(duì)于齊墩果酸，提取次數(shù)、加水量和提取時(shí)間3個(gè)因素的影響均無(wú)顯著性差異?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1唐春萍,郭姣,陳紅紅,等.調(diào)脂靈對(duì)高脂血癥大鼠降脂作用的實(shí)驗(yàn)研究J.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2022,13(5):24.2田麗婷,馬龍,堵年生.齊墩果酸的藥理作用研究概況J.中國(guó)中藥雜志,2002,27(12):884.3郭彤,郭姣,何偉,等.丹七降脂湯治療高