1、美味獼猴桃根提取物對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用【關(guān)鍵詞】美味獼猴桃；,肝損傷；,四氯化碳；,D-半乳糖胺摘要：目的研究美味獼猴桃根提取物對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。方法分別采用l4和D-半乳糖胺作為化學(xué)毒物制成急性肝損傷模型，采用賴氏法測(cè)定各組動(dòng)物血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的活性，并測(cè)定肝勻漿DA含量。結(jié)果l4肝損傷模型組和D-半乳糖胺肝損傷模型組小鼠的血清ALT和AST均明顯高于正常對(duì)照組(P0.01),DA含量高于正常對(duì)照組(P0.01),說(shuō)明l4和D-半乳糖胺均造模成功。l4造模實(shí)驗(yàn)中美味獼猴桃根提取物高劑量組較模型組血清ALT和AST活性明顯降低(

2、P0.01),肝臟DA含量明顯降低P0.01，而在D-乳糖胺造模實(shí)驗(yàn)中美味獼猴桃根提取物中劑量組較模型組血清AST明顯降低P0.01，肝臟DA含量降低P0.05，低劑量組較模型組ALTAST活性和DA含量均明顯降低(P0.01)。結(jié)論美味獼猴桃根提取物對(duì)小鼠急性肝損傷有一定的保護(hù)作用。關(guān)鍵詞：美味獼猴桃；肝損傷；四氯化碳；D-半乳糖胺PrtetiveEffetfRtsfAitinidiadeliilsaAgainstauteHepatiInjuryinieAbstrat：bjetiveTstudytheprtetiveeffetfrtsfAitinidiadeliilsaagainstaute

3、hepatiinjury.ethdsheialliverinjurydelsereadebyD-galatsaineandarbntetrahlrideandALT,ASTativitiesandDAeredeteined.ResultsSeruALTandASTlevelsindelieerearkedlyhigherthanthseinthentrlgrup(P0.01),DAntentashigherthanthatinthentrlgrup(P0.01),indiatingsuessfuldelreatinrediththedelgrup,highandiddledsagefrtsfA

4、itinidiadeliilsauldsigntfiantlyinhibittheinreasefativitiesfATandASTinseruandDAntentinhepatitissueinduedbyl4.HerernlyldsagefthedrugulddereasethelevelsfALT,ASTinseruandDAinhepatitissueinduedbyD-galatsaine,theiddledsagegrupuldnlydereasethelevelfASTinseruandDAinliver.nlusinRtsfAitinidiadeliisahasagdprte

5、tiveeffetsnautehepatiinjuryinie,itsrapeutiehanisisrelatedttheantixidatin.Keyrds：Aitinidiadeliilsa;Hepatiinjury;arbntetrahlride;D-galatsaine美味獼猴桃Aitinidiadeliilsa.F.liangetA.R.Fergusn為獼猴桃科獼猴桃植物。本品酸微甘，涼，有小毒，具有清熱，利尿，活血，消腫的成效,適用于治肝炎，水腫，跌打損傷，風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛，淋濁，帶下，瘡癤等諸癥1。本試驗(yàn)旨在就其對(duì)急性肝損傷的保護(hù)作用和作用機(jī)制進(jìn)展討論,以期客觀評(píng)價(jià)獼猴桃對(duì)小鼠急性肝損

6、傷的保護(hù)作用。1器材1.1動(dòng)物清潔級(jí)小鼠,雌雄各半,體重202g,由廣西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，桂醫(yī)動(dòng)字11004號(hào)。1.2藥物美味獼猴桃根采集于廣西桂林地區(qū)全州，經(jīng)中國(guó)科學(xué)院廣西植物研究所植物分類室鑒定。美味獼猴桃根提取物是用60%乙醇2經(jīng)兩次回流提取而成，最后得到稠膏。1.3試劑聯(lián)苯雙酯，廣州星群藥業(yè)股份，批號(hào)：H44023176：四氯化碳(l4),分析純,中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司,批號(hào):20010202；D-半乳糖胺(D-GlaN),啟東就豐工貿(mào),批號(hào):20220307；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)測(cè)定試劑盒,天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)測(cè)定試劑盒,丙二醛(DA)測(cè)定試劑盒,均由南

7、京建成生物工程研究所提供。1.4儀器紫外可見光分光光度計(jì)：Agilent8453；高速微量離心機(jī)：LG16-，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；高速低溫離心機(jī)：德國(guó)Bifugestruts；日本島津電子天平：LIBRRAEU-210；超聲波細(xì)胞破碎機(jī)：JY92-IID，寧波新芝科器研究所；數(shù)顯恒溫水浴鍋：HH-8，國(guó)華電器；液體快速混合器：YKH-I，江西醫(yī)療器械廠。2方法2.1對(duì)l4所致急性肝損傷的影響取安康小鼠60只，雌雄各半，體重(202)g，隨機(jī)分為6組,每組10只,分別為正常對(duì)照組、模型組、聯(lián)苯雙酯組200g/kg、美味獼猴桃根提取物高劑量組(50g生藥量/kg)、美味獼猴桃根提取物中劑量組(25g

8、生藥量/kg)和美味獼猴桃根提取物低劑量組(13g生藥量/kg),分別灌胃給藥,美味獼猴桃根提取物高、中、低劑量、聯(lián)苯雙酯均按0.2l/10，g給藥，連續(xù)7d,1次/d,于末次給藥8h后,除正常對(duì)照組外,其余各組均腹腔注射0.08%l4花生油溶液0.1l/10g,禁食過(guò)夜不禁水,16h后全部小鼠摘眼球取血,離心,別離出血清,測(cè)定ALT，AST。采血后,迅速解剖,取出肝臟,在同一肝小葉上取一小塊肝組織用冰冷生理鹽水漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,加生理鹽水制成10%肝勻漿,測(cè)其肝勻漿中DA含量。2.2對(duì)D-GlaN所致急性肝損傷的影響取安康小鼠60只，雌雄各半，體重202g，隨機(jī)分為6組,每組1

9、0只,分別為正常對(duì)照組、模型組、聯(lián)苯雙酯組400g/kg、美味獼猴桃根提取物高劑量組(100g生藥量/kg)、美味獼猴桃根提取物中劑量組(50g生藥量/kg)和美味獼猴桃根提取物低劑量組(25g生藥量/kg),分別灌胃給藥,美味獼猴桃根提取物高、中、低劑量、聯(lián)苯雙酯均按0.2l/10g給藥，連續(xù)7d,2次/d,于末次給藥8h后,除正常對(duì)照組外,其余各組均腹腔注射D-GlaN溶液450g/kg0.1l/10g,禁食過(guò)夜不禁水,16h后全部小鼠摘眼球取血,離心,別離出血清,測(cè)定ALT，AST。采血后,迅速解剖,取出肝臟,在同一肝小葉上取一小塊肝組織用冰冷生理鹽水漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,加生

10、理鹽水制成10%肝勻漿,測(cè)其肝勻漿中DA含量。2.3數(shù)據(jù)處理所有數(shù)據(jù)均以s表示,采用t檢驗(yàn)觀察其組間差異。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.1美味獼猴桃根提取物對(duì)l4肝損傷生化指標(biāo)的影響對(duì)血清ALT、AST活力和肝勻漿中DA含量的影響結(jié)果見表1。表1美味獼猴桃根提取物對(duì)l4誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠血清ALT、AST活力和肝勻漿中DA的影響略與對(duì)照組比擬,P0.01;與模型組比擬,*P0.05,*P0.01，*P0.05；n=10由表1可知,l4模型組小鼠血清ALT，AST活力和肝臟DA含量明顯高于正常對(duì)照組(P0.01),說(shuō)明造模成功。美味獼猴桃根提取物高劑量組血清ALT，AST活力和肝臟DA含量較

11、模型組有顯著降低(P0.01),中劑量組AST活性和DA含量較模型組也有明顯降低(P0.05),低劑量組降酶作用不明顯,說(shuō)明獼猴桃降酶作用呈一定的劑量依賴性，而且低劑量組肝組織中的DA含量較模型組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果提示美味獼猴桃根提取物對(duì)四氯化碳造成的肝損傷有一定的保護(hù)作用。3.2美味獼猴桃根提取物對(duì)D-GlaN肝損傷生化指標(biāo)的影響對(duì)血清ALT、AST活力和肝勻漿中DA含量的影響結(jié)果見表2。表2美味獼猴桃根提取物對(duì)D-半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠血清ALT、AST活力和肝勻漿DA含量的影響略與對(duì)照組比,P0.01;與模型組比,*P0.05,*P0.01，*P0.05；n=10由表2可知,D-G

12、laN模型組小鼠血清ALT，AST活力和DA含量明顯高于正常對(duì)照組(P0.01),說(shuō)明造模成功。美味獼猴桃根提取物中劑量組血清AST活力和DA含量較模型組均有顯著降低(P0.01，P0.05),而低劑量組均顯著降低P0.01。結(jié)果提示美味獼猴桃根提取物對(duì)D-半乳糖胺造成的肝損傷有一定的保護(hù)作用。4討論本實(shí)驗(yàn)采用l4和D-GlaN造模,是因?yàn)閘4是經(jīng)典的化學(xué)性肝損傷動(dòng)物模型的肝毒物,D-GlaN肝損傷模型的病理改變與人類病毒性肝炎的病理改變較為接近,且此兩種模型均可造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清ALT、AST升高和肝組織構(gòu)造的病理改變,同時(shí)重復(fù)性好。資料說(shuō)明l4所致肝損傷是典型的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷3，l4進(jìn)入肝細(xì)

13、胞內(nèi),經(jīng)細(xì)胞色素P-450代謝后,生成自由基(l3和l3),后者可直接損傷質(zhì)膜,并啟動(dòng)膜脂質(zhì)過(guò)氧化，使膜穩(wěn)定性降低，造成肝細(xì)胞變性壞死，其中線粒體膜受影響最大,這與線粒體生成自由基多,以及線粒體膜含酶豐富有關(guān)。l3還可以與肝細(xì)胞微粒體脂質(zhì)和蛋白質(zhì)發(fā)生結(jié)合,損傷肝細(xì)胞膜的構(gòu)造與功能,使肝細(xì)胞內(nèi)可溶酶如ALT，AST等從細(xì)胞內(nèi)游離出來(lái),使血清ALT，AST升高,并最終導(dǎo)致肝細(xì)胞的壞死4。因此，血清中的ALT，AST程度的上下可以敏感地反映肝臟細(xì)胞膜的受損程度。本實(shí)驗(yàn)l4肝損傷組和D-GlaN肝損傷組與正常對(duì)照組比擬,ALT，AST活力明顯升高,給予美味獼猴桃根提取物提取物后ALT，AST活力明顯下

14、降,提示美味獼猴桃根提取物具有保護(hù)肝細(xì)胞膜的作用,能使細(xì)胞膜的通透性降低，抑制細(xì)胞內(nèi)酶的釋放,從而改善肝損傷,促進(jìn)肝功能的恢復(fù)。D-GlaN損傷肝臟的機(jī)制是在代謝過(guò)程中與體內(nèi)磷酸尿苷大量結(jié)合,形成穩(wěn)定的尿苷衍生物,造成體內(nèi)尿苷耗竭,從而使依賴磷酸尿苷進(jìn)展生物合成的RNA和蛋白質(zhì)糖原等物質(zhì)合成受阻,導(dǎo)致肝損傷。另外,D-GlaN還可通過(guò)產(chǎn)生自由基引起脂質(zhì)過(guò)氧化,造成肝細(xì)胞損傷5，此外,還可使肥大細(xì)胞脫顆粒釋放組胺,造成結(jié)腸水腫,使腸源性內(nèi)毒素吸收增加,引起內(nèi)毒素中毒損傷肝臟。生物膜磷脂過(guò)氧化分解后,生成多種脂醇、脂醛和短鏈產(chǎn)物6,DA就是其中之一。DA為脂質(zhì)過(guò)氧化的最終產(chǎn)物,可嚴(yán)重破壞細(xì)胞膜構(gòu)造

15、,導(dǎo)致細(xì)胞膜腫脹壞死,其血清及組織中的含量反映了組織過(guò)氧化損傷的程度和細(xì)胞受損程度7。在本實(shí)驗(yàn)中經(jīng)l4和D-GlaN造模的小鼠肝組織中的DA含量明顯升高,這些變化反映了脂質(zhì)過(guò)氧化與肝損傷的關(guān)系，給予獼猴桃提取物后,l4、D-GlaN肝損傷小鼠肝臟病理變化明顯減輕,肝組織中的DA含量明顯下降,以上作用均呈劑量依賴，說(shuō)明美味獼猴桃根提取物對(duì)去除自由基,抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反響,維持細(xì)胞質(zhì)膜的正常構(gòu)造,防止細(xì)胞的損害有一定的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,美味獼猴桃提取物對(duì)化學(xué)性肝損傷有多種環(huán)節(jié)的保護(hù)作用,其機(jī)理可能是降低肝內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反響,去除自由基,保護(hù)肝細(xì)胞膜,維持膜的正常通透性等。參考文獻(xiàn)：1江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典，下冊(cè).上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1997：2211.2鐘振國(guó)，張鳳芬，甄漢深，等.美味獼猴桃根提取物抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究J.中醫(yī)學(xué)刊，2022，922：70.3朱起貴,曾岳祥,李天望,等.保肝康抗急慢性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究J.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,2000,10(6):31.4王曉立.柳茶對(duì)l4肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)理討論J