1、白術(shù)茯苓湯及水煎液提取別離組分對(duì)脾氣虛大鼠VIP受體的影響【摘要】目的觀察白術(shù)茯苓湯及其水煎液提取別離組分與組分配伍對(duì)脾氣虛大鼠VIP受體的調(diào)控作用。方法以大黃厚樸枳實(shí)加饑飽失常法復(fù)制脾氣虛證的動(dòng)物模型，采用ELISA法檢測(cè)，觀察白術(shù)茯苓湯水煎液提取別離組分對(duì)脾氣虛大鼠腸組織VIP受體的影響。結(jié)果與模型組比擬：白術(shù)茯苓湯組、總多糖高劑量組、白術(shù)內(nèi)酯中劑量組、組分配伍中劑量組能降低VIPR1程度P0.05；絡(luò)合物高劑量組能顯著降低VIPR1程度P0.01。白術(shù)內(nèi)酯高劑量組、絡(luò)合物高劑量組、組分配伍中劑量組能降低VIPR2程度P0.05；白術(shù)茯苓湯組、總多糖高劑量組、絡(luò)合物中劑量組能顯著降低VIP

2、R2程度P0.01。結(jié)論白術(shù)茯苓湯及各提取別離組分對(duì)VIP受體皆有不同程度地下調(diào)作用?！娟P(guān)鍵詞】白術(shù)茯苓湯；提取別離組分；脾氣虛證；VIP受體中醫(yī)脾氣虛證與VIP及其受體親密相關(guān)。我們前期研究說(shuō)明白術(shù)茯苓湯能下調(diào)血管活性腸肽VasativeIntestinalPeptide，VIP程度14，近期研究證實(shí)白術(shù)茯苓水煎液提取別離的總多糖、總絡(luò)合物、白術(shù)內(nèi)酯亦能明顯降低脾氣虛大鼠VIP程度另文發(fā)表。為進(jìn)一步探究白術(shù)茯苓湯及提取別離組分對(duì)VIP受體是否具有調(diào)節(jié)作用，課題組觀察了上述組分及組分配伍對(duì)脾氣虛大鼠VIP1受體(VIPR1)和VIP2受體(VIPR2)影響。1材料1.1動(dòng)物SPE級(jí)SD大鼠90

3、只，體質(zhì)量20020g，雌雄各半。由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：0015593。1.2藥材厚樸、枳實(shí)、大黃藥材購(gòu)于成都同仁堂，白術(shù)、茯苓購(gòu)于北京本草方源藥業(yè)，由成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室衛(wèi)瑩芳教授鑒定。1.3試劑VIP受體試劑盒由美國(guó)adl公司提供。2方法2.1脾氣虛模型的建立與分組SD大鼠90只，隨機(jī)分為15組，每組6只?？瞻捉M：生理鹽水4l灌服，隔日1次，連續(xù)42d；脾氣虛證模型組：小承氣湯煎液4l1l藥液含原生藥0.25g隔日灌胃1次，喂藥當(dāng)日禁食，飲水不限，次日喂飼不限，連續(xù)42天，復(fù)制脾氣虛模型1；余為白術(shù)茯苓湯組；總多糖高、中、低劑量組；總絡(luò)合物高、中、低劑量組；白

4、術(shù)內(nèi)酯高、中、低劑量組，上述3組分配伍之高、中、低劑量組，均于第43天分別給予相應(yīng)濃度藥液4l，1次d/，連續(xù)7d。2.2供試藥物制備2.2.1白術(shù)茯苓湯組白術(shù)茯苓湯：稱(chēng)取重量為11的白術(shù)茯苓生藥材飲片，混合浸泡30in，煎煮30in，過(guò)濾，共煎2次，合并藥液，濃縮為11即1毫升藥液含原生藥1g藥液,4冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.2各提取別離組分配制見(jiàn)表1。表1各組分藥液配制濃度表略2.3標(biāo)本采集與處理各組動(dòng)物在末次給藥后禁食24h，飲水不限。實(shí)驗(yàn)時(shí)處死大鼠，自距肛門(mén)2以上取腸組織1段300g，用PBS液沖洗，剪碎，參加生理鹽水1l勻漿，加PBS液稀釋成110混懸液，43000r/in離心15in，

5、取上清液，裝于子彈頭，-80保存，待測(cè)腸組織VIP受體。2.4測(cè)定采用ELISA法檢測(cè)，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心測(cè)定。2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)各組數(shù)據(jù)均采用s表示，用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)展數(shù)據(jù)處理，單因素方差分析，均數(shù)間兩兩比擬。3結(jié)果3.1動(dòng)物造模情況造模后第3天起模型大鼠開(kāi)場(chǎng)出現(xiàn)飲水減少，糊狀稀便，食欲下降，體重下降，倦耽懶動(dòng)，喜聚堆等體征；7d后模型大鼠相繼出現(xiàn)嗜臥懶動(dòng)，大便溏，食欲明顯下降，體質(zhì)量、體溫下降，毛色不榮等病癥；造模1520d大鼠以上病癥持續(xù)加重；造模3542d大鼠飲食量大幅度下降，身體虛弱，毛色晦暗發(fā)黃，精神萎靡。3.2各組大鼠血漿及結(jié)腸組織VIP受體變化比擬見(jiàn)表2。表2各組

6、VIP受體含量變化的比擬略轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.4討論脾虛證是中醫(yī)臨床的常見(jiàn)證候，病變涉及到消化吸收功能障礙,自主神經(jīng)功能紊亂，內(nèi)分泌功能失調(diào)，免疫功能低下，以及血液系統(tǒng),運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)和能量代謝等方面的諸多異常。其中，脾氣虛證內(nèi)分泌激素尤其是胃腸道激素分泌異常是近年來(lái)研究的重要內(nèi)容15。已有研究證實(shí)脾氣虛證時(shí)機(jī)體胃腸功能呈紊亂狀態(tài)與腦腸肽的調(diào)節(jié)親密相關(guān)，臨床觀察到脾氣虛證患者血漿及乙狀結(jié)腸粘膜VIP含量明顯增加68。我們的前期研究也說(shuō)明脾氣虛大鼠血漿和腸組織VIP明顯升高14。本次研究那么發(fā)現(xiàn)脾虛大鼠尚存在VIP受體程度的升高?？梢?jiàn)，VIP及其受體程度的變化可能是中醫(yī)脾氣虛證的根本病理變化之一。V

7、IP是腸神經(jīng)系統(tǒng)中最具代表性和研究得最深化的神經(jīng)肽，是最重要的腦腸肽和肽類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)之一。VIP在體內(nèi)分布非常廣泛，以消化道的分布最為廣泛，尤其是結(jié)腸和十二指腸含量最多，主要分布在粘膜的內(nèi)分泌細(xì)胞和粘膜下的細(xì)微神經(jīng)纖維、腸肌神經(jīng)叢。VIP受體是一種與G蛋白偶聯(lián)的7次跨膜糖蛋白。VIP受體廣泛分布于多種組織器官上。根據(jù)受體的分布及受體與配體親和力的差異，將其分為兩大類(lèi)：分別為VIPR1和VIPR2。VIP在消化道的生理作用為松弛消化道平滑肌，刺激腸道及胰腺的分泌，參與調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)。VIP需與其受體結(jié)合后,通過(guò)一系列信號(hào)傳遞途徑才能發(fā)揮其生理作用9。白術(shù)、茯苓二藥配伍應(yīng)用，始見(jiàn)于?傷寒論?，明代徐春

8、甫用以專(zhuān)治濕瀉，并命名為白術(shù)茯苓湯而載入?古今醫(yī)統(tǒng)大全?。脾主運(yùn)化，其性喜燥惡濕，脾失健運(yùn)與水濕停滯是脾胃氣虛證的主要病理改變。白術(shù)苦溫，益氣健脾而善燥濕,茯苓甘淡而善健脾滲濕,合而用之,一燥一滲,一補(bǔ)一瀉，相輔相成，益氣健脾除濕，尤能兼顧脾之病理特點(diǎn)，因此白術(shù)茯苓湯是古今治療脾氣虛證及脾虛夾濕瀉泄的經(jīng)典小方與常用藥對(duì)。臨床應(yīng)用也顯示以白術(shù)、茯苓為主藥的健脾除濕方劑治療一些脾虛濕滯腹瀉為主要病癥的疾病，如腸易激綜合征、功能性消化不良、炎癥性腸炎多有效驗(yàn)。復(fù)方配伍規(guī)律是方劑理論的核心，也是近年來(lái)中醫(yī)根底理論研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。而中藥復(fù)方的研發(fā)中最為重要的環(huán)節(jié)是確定該復(fù)方中產(chǎn)生藥效的物質(zhì)基矗近年來(lái)國(guó)

9、內(nèi)外對(duì)復(fù)方物質(zhì)根底的研究多以證候藥效藥化相結(jié)合為主要思路，運(yùn)用植化別離方法對(duì)復(fù)方中復(fù)雜化學(xué)物質(zhì)進(jìn)展系統(tǒng)提取10。本研究根據(jù)這一思路和方法方法，以原方劑臨床療效為導(dǎo)向，以中藥復(fù)雜化學(xué)物質(zhì)根底為研究目的，以藥效為標(biāo)準(zhǔn)追蹤復(fù)方活性部位與有效成分，采用系統(tǒng)溶劑法萃取白術(shù)茯苓湯各部位，從白術(shù)茯苓湯水煎液提取別離得到白術(shù)茯苓總多糖、總絡(luò)合物、白術(shù)內(nèi)酯。從物質(zhì)構(gòu)造特性分析白術(shù)內(nèi)酯是中藥白術(shù)中萜類(lèi)內(nèi)酯的一種，具有抗炎、抑制胃腸運(yùn)動(dòng)的藥理作用11。絡(luò)合物是本研究首次從白術(shù)茯苓湯水煎液中別離得到的化合物，經(jīng)過(guò)構(gòu)造解析，我們判斷主要由5個(gè)含鎂配合物組成的混合物，說(shuō)明在復(fù)方中存在有由有機(jī)成分和微量元素互相作用組成的配

10、合物，這種配合物，既別于有機(jī)物，也異于無(wú)機(jī)物，因?yàn)樗芙庑院茫妆唤M織吸收而發(fā)揮藥效。我們相關(guān)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，上述3組分高劑量不僅對(duì)脾虛大鼠血漿及腸組織VIP程度均具有不同程度的下調(diào)作用，且對(duì)腸組織VIPR1和VIPR2程度也均具有不同程度的下調(diào)作用P0.05，P0.01。由此，可初步確定總多糖、總絡(luò)合物、白術(shù)內(nèi)酯為白術(shù)茯苓湯下調(diào)脾虛大鼠VIP及受體的有效組分。中醫(yī)方藥對(duì)VIP的調(diào)控已有大量報(bào)道，但對(duì)VIP受體的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。我們研究提示白術(shù)茯苓湯治療脾虛濕滯之泄瀉機(jī)理不僅與下調(diào)VIP有關(guān)，還與下調(diào)VIP受體程度有關(guān)，其治療效應(yīng)可能是對(duì)VIP及其受體調(diào)控的綜合效應(yīng)所致，其物質(zhì)根底可能與上述3組分有

11、關(guān)。3組分中，絡(luò)合物、白術(shù)內(nèi)酯含量甚微，但其效應(yīng)顯著，提示中藥中一些微量成分具有較強(qiáng)的生物活性和藥理作用。3組分低劑量時(shí)對(duì)腸組織VIPR1和VIPR2影響皆不明顯，但絡(luò)合物中劑量對(duì)VIPR2的影響反較高劑量更明顯，以及白術(shù)內(nèi)酯高劑量對(duì)VIPR1的降低沒(méi)有統(tǒng)計(jì)意義，而中劑量對(duì)VIPR1的降低反而有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，需進(jìn)一步研究討論?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1賈波，李小紅,梁煜,等.白術(shù)茯苓湯對(duì)脾虛大鼠胃腸激素的影響J.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，244：47.2魏華，賈波，文躍強(qiáng)，等.白術(shù)茯苓湯分煎、合煎及醇提對(duì)脾虛大鼠血管活性腸肽的比擬研究J.中藥藥理與臨床，2022，57：65.3賈波，劉巖，張豐華，等.白

12、術(shù)、茯苓、白術(shù)茯苓湯對(duì)脾虛大鼠VIP及VIPR2的基因表達(dá)的影響J.四川中醫(yī)，2022，269：14.4文躍強(qiáng)，彭藤，賈波，等.白術(shù)茯苓湯各萃取部位對(duì)脾虛大鼠VIP的影響J.江蘇中醫(yī)藥，2022，265：356.5陳天娥,王秀琴,張華,等.大鼠脾氣虛胃潰瘍證病結(jié)合模型胃腸粘膜部分免疫-神經(jīng)-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)的變化J.解剖學(xué)報(bào),2022344：441.6張忠兵，張學(xué)庸，陳希陶，等.脾虛泄瀉腸粘膜中SP和VIP初步討論J.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1991，113：144.7毛炯,李艷嫦,朱偉淑,等.脾陰虛與脾氣虛血漿血管活性腸肽程度比擬研究J.中醫(yī)藥學(xué)刊,2022，215：693.8時(shí)宇,張啟元,侯雪,等.實(shí)驗(yàn)性脾虛動(dòng)物