1、茄根酸性組分對脂多糖誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞核因子kB表達(dá)的影響【關(guān)鍵詞】茄根摘要:目的:討論茄根酸性組分的抗炎機(jī)理。方法:以淀粉誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，用LPS為刺激劑，誘導(dǎo)NF-kB的表達(dá)，再用NF-kBP65的抗體與其結(jié)合，用流式細(xì)胞術(shù)測定巨噬細(xì)胞外表NF-kBP65亞單位表達(dá)的熒光強(qiáng)度，反映NF-kB活化程度。結(jié)果:LPS刺激12h后，NF-kBP65的表達(dá)明顯增加，茄根酸性組分能顯著抑制NF-kB的表達(dá)P0.01。結(jié)論:抑制NF-kB的活化，可能是茄根酸性組分發(fā)揮抗炎作用的主要機(jī)理之一。關(guān)鍵詞:茄根;酸性組分;抗炎;核因子kB;機(jī)理TheInflueneftheAidipnentsfAu

2、berginertttheurinePeritnealarphagesNFkBAtivatedbyLipplysaharideAbstrat:bjetive:Researhntheanti-inflaatryehanisftheaidipnentsfauberginert.ethds:Induedtheurineperitnealarphagesbythedisslubiltystarh，ativatetheurineperitnealarphagesiththeLipplysaharideLPS，jintheantibdyfNF-kBP65，ensuratetheflureseneinten

3、sityithflytetry.Results:After12hursativatedbyLipplysaharide，thpareiththedel，theaidipnentsfauberginertsignifiantlyreduententfthePGE2.nlusin:TheaidipnentsfauberginertsignifiantlyinhibittheX2ativities.TheeffetfinhibittheX2，aybeaainanti-inflaatryehanisfftheaidipnentsfauberginert.Keyrds:Auberginert;Theai

4、dipnentsAnti-inflaatryNulearfafr-kBehanis茄根為土家族常用藥物，具有祛風(fēng)利濕、清熱止血、散瘀消腫等成效。臨床用于治療牙痛、風(fēng)濕痹痛、凍瘡等1。酸性組分是茄根抗炎的主要有效部位，對多種炎癥，如關(guān)節(jié)炎、牙周炎等具有良好的治療效果。為討論茄根酸性組分的抗炎機(jī)理，我們就茄根酸性組分對核因子kBNF-kB表達(dá)的影響進(jìn)展了研究。istar雄性大鼠按體重隨機(jī)分為4組。分別為正常血清對照組，陽性對照組消炎痛，藥物高、低劑量組。灌胃給藥2次/d，連續(xù)5d。末次給藥后1h，股動脈取血，別離血清，56水浴滅活30in，0.22濾膜除菌，參加DE培養(yǎng)基，配成20%含藥血清培養(yǎng)液

5、，-20保存?zhèn)溆?。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2腹腔巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)57BL/6小鼠腹腔注射1%的可溶性淀粉，每只ll。3天后斷頭處死。腹腔注射Hanks液8l/只，無菌條件下洗出腹腔細(xì)胞1000r/in離心8in，細(xì)胞用Hanks液洗1次，作細(xì)胞計(jì)數(shù)，用含10%新生小牛血清的DE培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度至106ell/1。將細(xì)胞接種于4孔培養(yǎng)板中，每孔3l，37，5%2。培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)6h。2.3NF-kB的測定3用Hanks液洗去末貼壁細(xì)胞，參加不含新生小牛血清的培養(yǎng)基，饑餓12h。換液，于培養(yǎng)板中參加3l含藥血清培養(yǎng)基，分組如下:陰性對照組、模型對照組參加含正常動物血清的培養(yǎng)基，陽性對照組消炎痛、藥

6、物高、低劑量組分別參加含藥血清培養(yǎng)基;除陰性對照組外，其余各組同時參加刺激劑LPS，使其終濃度為1g/l培養(yǎng)12h:每孔參加細(xì)胞消化液0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA11混合2l進(jìn)展消化，待細(xì)胞變圓、懸浮后，取消化液1500r/in離心5in;棄上清液，細(xì)胞用PBS洗滌2次。參加150兔抗人NF-kBP6550l置4冰箱內(nèi)過夜。用PBS洗滌3次，參加1100稀釋的FIT標(biāo)記的羊抗兔IgG50l，4作用2h。用PBS洗滌2次，細(xì)胞移入專用管中，用流式細(xì)胞儀檢測其平均熒光強(qiáng)度。結(jié)果見表1，圖1。表1對LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞NF-kB表達(dá)的影響略3討論NF-kBnulearfatr-kB

7、是一個多功能核轉(zhuǎn)錄因子，具有廣泛的生物學(xué)活性，激活后可促進(jìn)細(xì)胞因子、粘附分子、趨化因子等基因轉(zhuǎn)錄，在炎癥反響中起重要作用。本研究以淀粉誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為對象，以LPS為刺激劑，誘導(dǎo)NF-kB的表達(dá)，再用NF-kBP65的抗體與其結(jié)合，用流式細(xì)胞術(shù)測定巨噬細(xì)胞外表NF-kBP65亞單位表達(dá)的熒光強(qiáng)度，反映NF-kB活化程度;通過茄根酸性組分含藥血清使熒光強(qiáng)度降低的程度，判斷茄根酸性組分對NF-kB的抑制作用。結(jié)果說明LPS刺激12h后，NF-kBP65的表達(dá)明顯增加，與空白對照組比擬有顯著性差異;茄根酸性組分與模型組比擬，能顯著抑制NF-kB的表達(dá)P0.01見表1。提示茄根酸性組分發(fā)揮抗炎作用的分子機(jī)制可能在于抑制NF-kB的活化，從而控制了細(xì)胞因子、炎癥相關(guān)酶如PLA2、環(huán)氧酶、5-脂氧酶、iNS等基因的轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)的合成，進(jìn)一步抑制各類炎癥介質(zhì)的分泌與釋放。茄根資源豐富易得，茄根酸性組分臨床用量小，療效顯著，毒副作用小，可望開發(fā)出NF-kB抑制劑，值得進(jìn)一步研究和利用。參考文獻(xiàn):1國家中醫(yī)藥管理局?中華本草?編委會.中華本草，第7冊，第1版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1998:30