1、對S180荷瘤小鼠腫瘤生長及免疫功能的影響 綠茶對S180荷瘤小鼠腫瘤生長及免疫功能的影響 綠茶綠茶是歷史上最早的茶類,也是我國茶量最大的茶類,在國際市場上,我國綠茶占國際貿(mào)易量的70%以上,銷量遍及北非、西非各國及法、美、阿富汗等 50多個國家和地區(qū)。綠茶是歷史上最早的茶類,也是我國茶量最大的茶類,在國際市場 聯(lián)合國衛(wèi)生組織頒布的“世界六大種保健飲品”依次是：第一綠茶、第二紅葡萄酒、第三豆?jié){、第四酸奶、第五蘑菇湯、第六骨頭湯。綠茶為六大保健飲品之首，被譽為“世界第一大種保健飲品”。綠茶有益健康是自古以來人們普遍認(rèn)同的一種養(yǎng)生之道1隨著生活水平的提高,人們越來越注重生活質(zhì)量,具有養(yǎng)生作用的綠茶

2、也越來越受歡迎。 聯(lián)合國衛(wèi)生組織頒布的“世界六大種保健飲品”依次是：第一綠 近年來，惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的健康，并且國內(nèi)外對腫瘤的治療及愈后較差，其原因可能是患者的免疫功能顯著下降2。很多資料建議在治療期間飲用綠茶來增強機體抵抗力，臨床上應(yīng)用綠茶多酚化合物以防癌的優(yōu)點有：也經(jīng)大量動物實驗證明其有效性：無嚴(yán)重之副作用等3，本組對此很感興趣，本研究旨在某點驗證綠茶增強機體免疫力防癌的機制。 近年來，惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的健康，并且國內(nèi)外對腫瘤的1 材料與方法1.1主要試劑 綠茶，刀豆蛋白A（ConA），環(huán)磷酰胺。1.2瘤源和細(xì)胞株 S180細(xì)胞和TAC-1細(xì)胞，P815細(xì)胞和CTLL-2細(xì)胞。

3、1 材料與方法 1.3實驗動物分組 將昆明小鼠隨機分為6組，即正常鹽水對照組、荷瘤對照組、環(huán)磷酰胺對照組和三個綠茶實驗組，每組10只小鼠，后五組小鼠于右腋皮下接種S180細(xì)胞（每只2106）。每日3個實驗組開始經(jīng)腹腔注射綠茶溶液，劑量分別為10,30,50mg/kg，荷瘤對照組注射等量生理鹽水0.2ml，環(huán)磷酰胺對照組注射環(huán)磷酰20mg/kg 。每日1次，連續(xù)14天后處死小鼠取實體瘤稱重，同時取脾細(xì)胞測定增值反應(yīng)，IL-2生長能力，NK細(xì)胞活性。 1.3實驗動物分組1.4試驗方法1.4.1測腫瘤抑制率 停藥后處死小鼠，剝離完整腫瘤組織，電子天平稱量瘤體濕重（精確到0.001）并計算腫瘤生長抑制

4、率。 抑制率（）=（荷瘤對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重）/荷瘤對照組平均瘤重100。 注意：腫瘤組動物平均質(zhì)量1表示腫瘤生長不良，實驗組小鼠死亡率超過20表示藥物所致毒性。1.4試驗方法1.4.2小鼠脾細(xì)胞懸液的制備 將小鼠處死，取脾臟，研磨，沙網(wǎng)過濾(200目)，加入紅細(xì)胞裂解液裂解3分鐘，1500r/min離心8分鐘，取出淋巴細(xì)胞，生理鹽水沖洗2次，800r/min離心10分鐘,RP-MI1640 培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞濃度為5106 ml-1，37，5% CO2飽和濕度培養(yǎng)，備用。1.4.2小鼠脾細(xì)胞懸液的制備 1.4.3 ConA誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增值反應(yīng) 采用常規(guī)H-TdR摻入法。將制備的小鼠脾細(xì)胞

5、懸液用RP-MI1640培養(yǎng)液制成2107ml-1細(xì)胞懸液，每孔1ml分裝到24孔培養(yǎng)板中，每孔加入ConA3g于CO2培養(yǎng)箱37孵育56小時后，加入3H-TdR達到終濃度37KBq/ml后繼續(xù)置CO2培養(yǎng)箱37孵育16小時后，將各孔細(xì)胞收集到玻璃纖維紙上，置于FJ-2100型液體閃爍計數(shù)器測定并計算dpm值。 1.4.3 ConA誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增值反應(yīng) 1.4.4 IL-2的誘生和活性測定 將制備的小鼠脾細(xì)胞懸液用含10%小牛血清的RP-MI1640培養(yǎng)液調(diào)整濃度為5106ml-1，接種于24孔培養(yǎng)板，每孔500ml，每孔再加入終濃度5g/ml的ConA，500g/孔，37 5%CO2培養(yǎng)箱沒

6、培養(yǎng)24小時后離心取上清，備用。取傳代培養(yǎng)48小時的CTLL-2細(xì)胞，用培養(yǎng)液離心洗滌2次，每次1000r/min離心5分鐘，再用含10%小牛血清的RP-MI1640培養(yǎng)液調(diào)整濃度為1106ml-1，接種于96孔培養(yǎng)板100l /孔，同時將待測樣品也加入培養(yǎng)板100l /孔，置于CO2培養(yǎng)箱37孵育56小時后，加入3H-TdR達到終濃度37KBq/ml后繼續(xù)置CO2培養(yǎng)箱37孵育16小時后，將各孔細(xì)胞收集到玻璃纖維紙上，置于FJ-2100型液體閃爍計數(shù)器測定并計算dpm值。 1.4.4 IL-2的誘生和活性測定1.4.5 NK細(xì)胞活性測定 將制備的小鼠脾細(xì)胞懸液用含10%小牛血清的RP-MI1

7、640培養(yǎng)液調(diào)整濃度為5106ml-1于96孔培養(yǎng)板，每孔中分別加入100g脾細(xì)胞懸液和YAC-1細(xì)胞，靶細(xì)胞（YAC-1細(xì)胞，濃度1105個/ml，效靶比值50:11，設(shè)靶細(xì)胞自然釋放組和最大釋放對照組（YAC-1細(xì)胞100g+1%NP-40 100g）。每樣本是3個重復(fù)孔，培養(yǎng)16小時后，吸出各孔上清100g加入另一細(xì)胞培養(yǎng)板中置于37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10分鐘，每孔加入新鮮配制的底物液100l室溫，避光反應(yīng)1015分鐘，再加入檸檬終止液30l酶標(biāo)分析儀570nm波長處測定A值。按一下公式計算NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞活性。 NK細(xì)胞活性（%）=（實驗組A-自然釋放組A）/(最大釋放組A-自然釋放組A)

8、 100%。 1.4.5 NK細(xì)胞活性測定2 結(jié)果預(yù)測2 結(jié)果預(yù)測2.1 綠茶對S180肉瘤抑制作用 不同劑量的綠茶對荷瘤小鼠的腫瘤具有明顯的抑制作用，與荷瘤對照組、環(huán)磷酰胺比較有顯著的差異。 2.2 綠茶對荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖和IL-2產(chǎn)生能力的影響 荷瘤對照組小鼠脾細(xì)胞增值能力和IL-2產(chǎn)生能力均較正常對照組小鼠明顯下降，不同劑量綠茶治療組小鼠淋巴細(xì)胞增值和IL-2水平均顯著高于荷瘤對照組，且呈劑量依賴性。 2.3 綠茶對荷瘤小鼠脾NK細(xì)胞活性的影響 荷瘤對照組脾NK細(xì)胞活性顯著低于正常對照組，體內(nèi)注釋綠茶組小鼠的NK細(xì)胞活性明顯高于荷瘤對照組，且能達到正常對照組水平。 綠茶對S荷瘤小鼠

9、腫瘤生長及免疫功能的影響課件3 討論分析3 討論分析 綠茶是眾所周知的健康飲品,它具有多種治療和保健功效,越來越受人們的歡迎。茶多酚(GTP)是從綠茶中提取的主要活性成分,占茶葉干重的 30% ,包括黃烷醇類、黃烷雙醇、黃酮類和酚酸4。目前,國內(nèi)外學(xué)者對茶多酚進行了大量的研究,表明茶多酚具有增強機體抵抗力，誘導(dǎo)動物免疫系統(tǒng)的多種細(xì)胞因子,促進干擾素、白細(xì)胞介素等的合成,具有清除體內(nèi)自由基、抗脂質(zhì)過氧化作用,能激活巨噬細(xì)胞(M )、自然殺傷(NK)細(xì)胞和B、T 淋巴細(xì)胞，激活補體系統(tǒng)，提高抗體水平5。 本實驗通過用環(huán)磷酰胺作用陽性對照組，來分析綠茶的抗瘤效果。環(huán)磷酰胺是臨床常用的化療藥物，其能有

10、效地殺傷癌細(xì)胞，但與此同時也對人體產(chǎn)生不同程度的毒副作用，其中主要有骨髓抑制、免疫功能低下和白細(xì)胞減少癥。本實驗即使之與荷瘤對照組進行比較易于分析。 本實驗通過用環(huán)磷酰胺作用陽性對照組，來分析綠茶的抗瘤 IL-2是由活化的Th細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞增殖因子，具有多種生物學(xué)活性，如能夠促進T細(xì)胞、B細(xì)胞增殖分化和刺激NK細(xì)胞的生長，激活巨噬細(xì)胞，促進CTL功能，在集體的免疫應(yīng)答和調(diào)節(jié)中起到重要的作用。另有研究表明，IL-2能促進外周血單核細(xì)胞產(chǎn)生TNF，從而增強抗腫瘤的作用6。由于IL-2的含量與細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)，因此可將IL-2產(chǎn)生作為細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要指標(biāo)。 IL-2是由活化的Th細(xì)胞分泌的

11、一種細(xì)胞增殖因子，具 NK細(xì)胞不需預(yù)先致敏即能分泌細(xì)胞毒性因子殺傷腫瘤細(xì)胞，抗瘤譜廣，無腫瘤特異性和MHC限制性，也能釋放IFN-、IL-1、IL-2等細(xì)胞因子來發(fā)揮天然防疫系統(tǒng)。有研究表明，隨著NK細(xì)胞活性的降低，腫瘤發(fā)生率增加7。因此提高機體NK細(xì)胞活性，對于腫瘤的預(yù)防和預(yù)測都有重要的價值。 NK細(xì)胞不需預(yù)先致敏即能分泌細(xì)胞毒性因子殺傷腫瘤細(xì)【參考文獻】1趙春頌. 綠茶的營養(yǎng)保健功能J. 營養(yǎng), 2003, 17(2): 17.2艾今霞，劉良.艾迪針劑對和瘤小鼠免疫功能的影響J.中國免疫學(xué)雜志，2010,26（3）：224227.3山根哲郎.綠茶兒茶素的藥理作用及其臨床應(yīng)用J.日本醫(yī)學(xué)介紹,2001,22(3):100101.4雷蕾.綠茶藥理研究進展J.海峽藥學(xué),2007,19(6):1517.5李振, 陳現(xiàn)偉. 茶多酚的免