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DB50重 慶 市 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB50/T1043—2020無菌（Germ-free,GF）豬生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范ProductionTechnicalPracticeofGerm-freePig2020-10-10發(fā)布 2020-12-30實(shí)施重慶市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB50/T1043DB50/T1043—2020PAGEPAGE11目 次范圍 3規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 3設(shè)施設(shè)計(jì) 4隔離器 6日糧 8無菌豬的制備 9無菌豬的飼養(yǎng)管理 10前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由重慶市畜牧科學(xué)院提出。本標(biāo)準(zhǔn)由重慶市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：重慶市畜牧科學(xué)院、重慶百斯達(dá)生物科技有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：孫靜、葛良鵬、劉作華、梁浩、丁玉春、吳夢(mèng)、林保忠、黃勇、楊松全。無菌（Germ-free,GF）豬生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了無菌豬的術(shù)語和定義、設(shè)施設(shè)計(jì)、隔離器、日糧，無菌豬獲取與人工飼養(yǎng)等內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于無菌豬的制備、培育和相關(guān)實(shí)驗(yàn)。規(guī)范性引用文件GBZ133醫(yī)用放射性廢物的衛(wèi)生防護(hù)管理GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB/T4789.18食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)乳與乳制品檢驗(yàn)GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB8978污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn)GB/T18641偽狂犬病診斷技術(shù)GB14925實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施GB/T14926.41實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無菌動(dòng)物生活環(huán)境及糞便標(biāo)本的檢測(cè)方法GB16551豬瘟檢疫技術(shù)規(guī)范GB50052供配電系統(tǒng)設(shè)計(jì)規(guī)范GB50068建筑結(jié)構(gòu)可靠性設(shè)計(jì)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)GB50447實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施建筑技術(shù)規(guī)范SN/T1919-2016豬細(xì)小病毒病檢疫技術(shù)規(guī)范NY/T679豬繁殖與呼吸綜合癥免疫酶試驗(yàn)方法術(shù)語和定義下列術(shù)語與定義適用于本文件。3.1無菌豬Germ-free(GF)pig利用現(xiàn)有檢測(cè)手段，無可檢出一切活的微生物（包括細(xì)菌、病毒）和寄生蟲，能保證豬源性細(xì)胞、組織、器官的生物安全性和清晰的微生物背景的實(shí)驗(yàn)用豬，簡(jiǎn)稱無菌豬。3.2悉生豬Gnotobitoic(GN)pig3.3隔離環(huán)境Isolationenvironment與外界完全隔離，可阻斷任何外源微生物侵入的封閉空間。3.4屏障環(huán)境Barrierenvironment隔離環(huán)境的第一層保障，用于放置和使用無菌隔離器。設(shè)施設(shè)計(jì)場(chǎng)址遠(yuǎn)離有嚴(yán)重空氣污染、噪聲干擾和生物安全風(fēng)險(xiǎn)等區(qū)域。GB50052GB5749的規(guī)定。規(guī)劃布局生產(chǎn)區(qū)布局非凈化區(qū)的設(shè)置包括辦公室、監(jiān)控室、庫房、機(jī)械設(shè)備室（維修室、淋浴室、工作人員休息100m設(shè)施要求設(shè)施一般要求1.5m，門0.8m。管道管徑不宜小于DN150外環(huán)境應(yīng)整潔，便于清掃和消毒。應(yīng)排水暢通，無廢物堆積和無水積存。應(yīng)設(shè)置人、動(dòng)物、物品專用出入口，道路通暢，配置專用的消毒設(shè)施與設(shè)備。應(yīng)有防治外來動(dòng)物進(jìn)入的措施。設(shè)施建筑構(gòu)造要求GB50068屏障環(huán)境設(shè)施的清洗消毒間與潔凈物料儲(chǔ)存間之間應(yīng)設(shè)置消毒滅菌設(shè)施設(shè)備。淋浴室、清洗消毒區(qū)的地面和墻面均應(yīng)做防水處理。主要分區(qū)設(shè)置要求非凈化區(qū)應(yīng)設(shè)置母豬準(zhǔn)備室和配套設(shè)備，方便手術(shù)前動(dòng)物體表清潔和消毒。給排水要求無菌豬的飲用水定額應(yīng)滿足無菌豬飲用水需要。GB/T14926.41GB5749（實(shí)驗(yàn)區(qū)屏障環(huán)境設(shè)施生產(chǎn)區(qū)（實(shí)驗(yàn)區(qū)）內(nèi)無排水管或者地漏。屏障環(huán)境設(shè)施清洗消毒室的地漏應(yīng)采用密閉型。排水管道應(yīng)選用耐腐蝕、連接方便可靠、不生銹、不易老化的管材和管件。屏障環(huán)境設(shè)施的排水宜與其他生活排水分開設(shè)置。糞污、廢棄物及動(dòng)物尸體處理GB8978（36）（農(nóng)醫(yī)發(fā)[2013]34）》要求，集中做無害化處理。隔離器分類無菌豬隔離器分為無菌子宮剝離器、無菌運(yùn)輸隔離器和無菌飼養(yǎng)隔離器。無菌子宮剝離器無菌運(yùn)輸隔離器與無菌子宮剝離器對(duì)接，用于無菌新生仔豬的轉(zhuǎn)移；單獨(dú)使用時(shí)，用于無菌豬轉(zhuǎn)運(yùn)。無菌飼養(yǎng)隔離器結(jié)構(gòu)無菌豬子宮剝離器無菌豬運(yùn)輸隔離器應(yīng)由架體、密封罩、隔離腔體、傳遞通道、操作手套、進(jìn)出風(fēng)過濾系統(tǒng)等組成。無菌豬飼養(yǎng)隔離器應(yīng)由架體、密封罩、隔離腔體、傳遞通道、操作手套、進(jìn)出風(fēng)過濾系統(tǒng)、飼喂系統(tǒng)等組成。規(guī)格無菌子宮剝離器應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)豬飼育品種的要求確定子宮剝離器的消毒液槽和無菌操作臺(tái)的尺寸。無菌運(yùn)輸隔離器應(yīng)根據(jù)無菌豬大小、運(yùn)輸數(shù)量的要求確定無菌運(yùn)輸器的尺寸。無菌飼養(yǎng)隔離器11表11月齡無菌豬飼養(yǎng)隔離器最小空間項(xiàng)目體重（kg）＜5≥5且≤10＞10kgm/頭0.17～0.350.35～0.520.52～0.70籠內(nèi)高度m0.40.40.5要求隔離腔體架體密封罩傳遞通道用于物品和動(dòng)物的密封傳遞。應(yīng)密封。操作手套連接于隔離器密封罩的操作用膠質(zhì)手套，應(yīng)密封、大小適用。進(jìn)出風(fēng)過濾系統(tǒng)進(jìn)風(fēng)處應(yīng)有初效、中效、高效過濾，出風(fēng)處應(yīng)有高效過濾。消毒液槽宜采用耐腐蝕的不銹鋼等硬質(zhì)材料密封連接組成，具有開口，應(yīng)可以液封，具有放水口，可排放廢液。無菌操作臺(tái)采用耐腐蝕的不銹鋼等硬質(zhì)材料密封連接組成，底部具有水平推拉蓋，應(yīng)可密封。性能凈度達(dá)到GB14925-201070.1-0.3m/s，20-55Pa20-50/h，噪音應(yīng)≤55db。用途在隔離環(huán)境下，無菌豬隔離器的用途見表2。表2無菌豬隔離器用途項(xiàng)目環(huán)境分類使用功能適用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無菌子宮剝離器正壓無菌豬子宮外表面消毒和新生無菌仔豬的獲取無菌豬無菌運(yùn)輸隔離器正壓新生無菌仔豬運(yùn)輸、體表清潔和運(yùn)輸無菌豬無菌飼養(yǎng)隔離器正壓/負(fù)壓正壓用于無菌豬的飼養(yǎng)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和悉生豬的實(shí)驗(yàn)/負(fù)壓用于豬感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)無菌豬、悉生豬日糧分類根據(jù)無菌豬的日齡，日糧主要分為代乳粉、粉料、顆粒料。代乳粉Co0輻照滅菌。粉料C0顆粒料選用成年豬用全價(jià)顆粒料。采用輻照、高壓高溫處理等方法滅菌。一般采用鈷60輻照滅菌。衛(wèi)生要求4GB/T4789.18包裝裝于防潮的紙箱、紙桶（袋）或聚丙烯塑料桶（袋）中，內(nèi)襯包裝食品用高阻隔材質(zhì)的真空包裝袋。貯存應(yīng)貯存在清潔、干燥、陰涼、通風(fēng)的專用倉庫中。要防蟲蛀、鼠害、防擠壓、霉變和污染。保質(zhì)期不少于3個(gè)月，不宜超過6個(gè)月。無菌豬的制備品種選擇妊娠母豬的篩選GB/T16551、GB/T18641、NY/T679SN/T1919-2016飼養(yǎng)環(huán)境與條件的準(zhǔn)備隔離器的準(zhǔn)備7-101.5%-2.0101連接，1.5%-2.01屏障環(huán)境的維持1.5%-2.0%新制的過1剖腹產(chǎn)手術(shù)時(shí)間妊娠母豬術(shù)前準(zhǔn)備氟烷呼吸麻醉法，配合肌肉松弛劑使用。剖腹產(chǎn)手術(shù)10-20s，之后移入無菌子宮剝離器的無菌操作臺(tái)，取出胎兒、擦干羊水、剪斷臍帶。無菌仔豬的獲取與轉(zhuǎn)運(yùn)無菌仔豬的獲取34-36℃，防止仔豬受凍。根據(jù)新生仔豬情況，進(jìn)行人工輔助呼吸。從切開腹腔到人工輔助呼吸結(jié)束，時(shí)間控制在30min無菌仔豬的轉(zhuǎn)運(yùn)1.5%-2%新制的過氧乙酸噴霧消毒隔離器外表面。根據(jù)使用目的，10min34-3630min無菌豬的飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)流程2h（根據(jù)商業(yè)化奶粉使用說明確定比例，倒入隔離器內(nèi)各食槽內(nèi)。每日早、中、晚各哺乳1次。3日齡前，每次宜給料量100-200mL；4200-300mL。不喂水。21溫度管理730℃；21日齡后隔離器內(nèi)溫度不低于26℃。光照管理仔豬進(jìn)入隔離器后，按照光照12h，黑暗12h執(zhí)行。物品進(jìn)出消毒屏障環(huán)境物品進(jìn)出消毒操作物品轉(zhuǎn)入屏障環(huán)境進(jìn)入屏障環(huán)境的物品應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的消毒滅菌處理。滅菌之前，耐高溫高壓物品，如手術(shù)器械、器具、（1.5%-2%過氧乙酸）1h30min物品轉(zhuǎn)出屏障環(huán)境（清走廊轉(zhuǎn)出至廢棄物品存放處理間，分類處理。隔離環(huán)境物品進(jìn)出消毒操作物品進(jìn)入隔離環(huán)境（如新制的1.5%-2%過氧乙酸1h物品轉(zhuǎn)出隔離環(huán)境（1.5%-2%過氧乙酸噴霧傳遞通道內(nèi)部空/