Biomolecule生物分子

泛指生物體特有的各類(lèi)分子，是自然存在于生物體中的分子的總稱(chēng)，是組成生命的基本單位。包括生物大分子（蛋白質(zhì)、核酸、糖復(fù)合物等）小分子（如脂類(lèi)、激素、維生素等）Biomolecule生物分子泛指生物體特有的1生物大分子

生物大分子指的是作為生物體內(nèi)主要活性成分的各種分子量達(dá)到上萬(wàn)或更多的有機(jī)分子。常見(jiàn)的生物大分子包括蛋白質(zhì)、核酸、脂類(lèi)、糖類(lèi)。

一般分子量從幾千到幾百萬(wàn)。生物大分子生物大分子指的是作為生物體內(nèi)主要活性成2它們廣泛存在于各種生物體內(nèi)，與各種生命活動(dòng)息息相關(guān)。除了天然存在的外，還有生物工程培養(yǎng)和發(fā)酵的。生物大分子具有十分重要的生理功能和應(yīng)用價(jià)值。研究生物大分子的結(jié)構(gòu)、功能及應(yīng)用已成為生命科學(xué)的一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題。不論從動(dòng)植物和微生物體內(nèi)提取或用生物工程制備的生物大分子產(chǎn)品，都是組成十分復(fù)雜的混合物，在使用前都要分離和純化。生物大分子的分離純化及其應(yīng)用課件3

制備生物大分子的分離純化方法多種多樣，主要是利用它們之間理化性質(zhì)的差異。根據(jù)作用原理生物分子的分離、純化可分為以下幾種類(lèi)型：（1）根據(jù)分子極性大小和溶解度的不同，如溶劑提取技術(shù)、鹽析法、分配層析法、分級(jí)沉淀法等；（2）根據(jù)分子形狀和大小不同，如凝膠過(guò)濾層析等；（3）根據(jù)物質(zhì)吸附性質(zhì)不同，如選擇性吸附與吸附層析法等；（4）根據(jù)分子帶電性（電離性質(zhì)）的差異，如離子交換層析、電泳、等電聚焦法等。（5）根據(jù)配體特異性，如親和層析。制備生物大分子的分離純化方法多種多樣，主要是利用它們之間4影響提取效果的因素（1）pH值（2）鹽濃度（即離子強(qiáng)度）（3）溫度（4）水解酶（5）攪拌與氧化（6）有機(jī)溶劑影響提取效果的因素（1）pH值（2）鹽濃度（即離子強(qiáng)度）5（1）分離純化方法千差萬(wàn)別，沒(méi)有一種標(biāo)準(zhǔn)方法可通用于各種生物大分子的分離制備；（2）制備幾乎都是在溶液中進(jìn)行的，難以準(zhǔn)確估計(jì)和判斷pH值、溫度度等各種參數(shù)對(duì)溶液中各種組份的綜合影響；

生物大分子的分離純化有以下主要特點(diǎn)：（1）分離純化方法千差萬(wàn)別，沒(méi)有一種標(biāo)準(zhǔn)方法可通用于各種生物6（3）大多數(shù)生物大分子的含量極微，分離純化的步驟多，流程長(zhǎng)，有的目的產(chǎn)物甚至要經(jīng)過(guò)幾十步的操作才能達(dá)到所需純度；（4）分離純化過(guò)程中要保證目標(biāo)產(chǎn)物的活性。（3）大多數(shù)生物大分子的含量極微，分離純化的步驟多，流程長(zhǎng)，7蛋白質(zhì)的分離純化《生理學(xué)》提及蛋白質(zhì)的功能：(1)構(gòu)成組織與修補(bǔ)組織；(2)構(gòu)成酶和某些激素的成分；(3)增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，構(gòu)成抗體；(4)調(diào)節(jié)滲透壓；(5)供給熱能。蛋白質(zhì)的分離純化《生理學(xué)》提及蛋白質(zhì)的功能：8

蛋白質(zhì)具有廣泛的功能性質(zhì)，每一種性質(zhì)都會(huì)給食品及其加工過(guò)程帶來(lái)特定的效果。具有生理活性的蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)在維持現(xiàn)代人類(lèi)健康方面已必不可少，在醫(yī)療和食品領(lǐng)域已逐漸得到應(yīng)用。

如可將功能蛋白質(zhì)如乳清蛋白、蛋清蛋白、大豆蛋白等添加到食品中制得各種功能性食品。

正是由于蛋白質(zhì)與人類(lèi)生活密切相關(guān)，所以對(duì)其質(zhì)量和純度要求也越來(lái)越高。

9蛋白質(zhì)的分離純化是研究蛋白質(zhì)化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能、新蛋白質(zhì)的發(fā)現(xiàn)和疾病分子診斷的基礎(chǔ)；分子克隆中，下游的處理和分析鑒定，基因工程產(chǎn)品的制備，也需要蛋白質(zhì)的分離和純化。蛋白質(zhì)分離純化的總目標(biāo)是增加制品的純度，以增加單位蛋白質(zhì)重量中靶蛋白的含量或生物學(xué)活性以達(dá)到目的，即從蛋白混合物中設(shè)法去除不要的雜蛋白和變性的靶蛋白，使靶蛋白的產(chǎn)量達(dá)到最高值。蛋白質(zhì)的分離純化是研究蛋白質(zhì)化學(xué)組成、結(jié)10

分離純化的總體原則一是保證靶蛋白結(jié)構(gòu)的完整，防止降解和活性蛋白質(zhì)的變性；二是盡量滿足研究與診斷對(duì)靶蛋白純度的要求,純化蛋白質(zhì)總是希望純度和產(chǎn)率均高。分離純化的總體原則11蛋白質(zhì)分離純化的條件蛋白質(zhì)是一類(lèi)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、有生物活性的生物大分子，離開(kāi)天然的存在體系，其結(jié)構(gòu)與活性變得極不穩(wěn)定，因此從生物材料中提純各種靶蛋白均需要特定的條件，應(yīng)注意各種因素對(duì)靶蛋白的影響。蛋白質(zhì)分離純化的條件蛋白質(zhì)是一類(lèi)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、有生物活性12緩沖液

鹽、金屬離子和螯合劑.3.還原劑4.去垢劑5.增溶劑

6.蛋白酶抑制劑（pronaseinhibitor）7.蛋白質(zhì)的環(huán)境因素

①表面效應(yīng)的影響②溫度的影響③儲(chǔ)存緩沖液13

蛋白質(zhì)常存在于復(fù)雜的混合體系中，且穩(wěn)定性較差，對(duì)溫度、pH、機(jī)械剪切力等非常敏感、易于變性。傳統(tǒng)蛋白質(zhì)的分離方法有吸附沉淀、溶媒、萃取、離子交換法等，這些工藝往往繁雜，提取時(shí)間長(zhǎng)，消耗大量原料，能耗高。隨著生物技術(shù)的發(fā)展和對(duì)各種蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能研究的深入，對(duì)蛋白質(zhì)分離檢測(cè)研究也有了迅速發(fā)展，出現(xiàn)了許多高效的分離純化技術(shù)和手段，主要包括膜分離、高效液相色譜，毛細(xì)管電泳、分子印跡技術(shù)及聯(lián)用技術(shù)。蛋白質(zhì)常存在于復(fù)雜的混合體系中，且穩(wěn)定性較差，對(duì)14生物樣本蛋白質(zhì)的釋放（粉碎組織、裂解細(xì)胞）離心蛋白質(zhì)粗提取液鹽析有機(jī)溶劑沉淀等電點(diǎn)沉淀超速離心蛋白質(zhì)粗品離子交換凝膠過(guò)濾親和層析制備HPLC電泳蛋白質(zhì)純品預(yù)處理分離純化蛋白質(zhì)分離純化的一般技術(shù)路線生物樣本蛋白質(zhì)的釋放離心蛋白質(zhì)粗提取液鹽析有機(jī)溶劑沉淀等電點(diǎn)151.

離心技術(shù)簡(jiǎn)介

應(yīng)用強(qiáng)大的離心力，使物質(zhì)因沉降速度不同而進(jìn)行分離的方法叫離心技術(shù)。常用方法：差速離心，密度梯度離心和等密度離心。

1.1差速離心在離心管中進(jìn)行，樣品在離心時(shí)受離心作用移向離心管底部。不同物質(zhì)其大小、比重和形狀不同而沉降速度不同。在相同離心力的作用下，沉降速率大的先沉到底部。

注：沉降速度相差越大越能得到良好分離。只能是一種粗分技術(shù)，多次重復(fù)操作是可以改善回收純度的。

1.離心技術(shù)簡(jiǎn)介應(yīng)用強(qiáng)大的離心力，使物質(zhì)因161.2密度梯度離心用來(lái)分離沉降速度差不太大的顆粒。方法：將小量樣品置于一個(gè)從上而下密度變大的密度梯度液上進(jìn)行離心。若物質(zhì)比溶劑重，物質(zhì)才下沉；若物質(zhì)比溶劑輕，則物質(zhì)浮在其上面。所以在密度梯度液上面的樣品物質(zhì)，在離心時(shí)各物質(zhì)按其沉降速率的不同而沉降，到最后按各自的比重平衡停留在相應(yīng)密度的溶劑中。又叫速率區(qū)帶離心法1.2密度梯度離心用來(lái)分離沉降速度差不太大的顆粒。又叫速171.3離心技術(shù)的應(yīng)用①可以用于制備，也可以用于分析。②樣品量可大可小，小到0.2ml以下，大到幾千升。③分離的對(duì)象廣，包括各種亞細(xì)胞物質(zhì)，各種蛋白質(zhì)和酶，核糖核酸及其他一些生物大分子。1.3離心技術(shù)的應(yīng)用182.膜分法

又稱(chēng)超濾，以分子大小及形狀差異為依據(jù)的方法。利用離心力或壓力強(qiáng)行使水和其它小分子通過(guò)半透膜，而蛋白質(zhì)被截留在半透膜上的過(guò)程。由于超濾過(guò)程中，濾膜表面容易被吸附的蛋白質(zhì)堵塞，以致超濾速度減慢，截流物質(zhì)的分子量也越來(lái)越小。所以在使用超濾方法時(shí)要選擇合適的濾膜，也可以選擇切向流過(guò)濾得到更理想的效果。2.膜分法又稱(chēng)超濾，以分子大小及形狀差異為依據(jù)19膜分離技術(shù)在蛋白質(zhì)的分離純化方面具有非常廣闊的應(yīng)用前景，并向工業(yè)化發(fā)展。

e.g：學(xué)者用分離技術(shù)處理大豆乳清廢水，以超濾膜截流分子，幾乎可以回收所有多肽和蛋白質(zhì)，再用納濾膜進(jìn)行濃縮，回收了蛋白質(zhì)、低聚糖，又大大降低了廢水排放量，取到了滿意效果。膜分離技術(shù)在蛋白質(zhì)的分離純化方面具有非常20

它也存在一定的問(wèn)題，如在操作中膜面會(huì)發(fā)生污染，使膜性能降低，故又必須采用與工藝相適應(yīng)的膜面清洗方法；而且單采用膜分離技術(shù)效果有限，因此有時(shí)需將膜分離工藝與其他分離工藝組合起來(lái)應(yīng)用。但是可以預(yù)見(jiàn)，隨著膜分離技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，其勢(shì)必將取代那些耗能大、費(fèi)用高、處理不徹底、周期長(zhǎng)、易造成環(huán)境污染的傳統(tǒng)單元操作，如沉淀、離心、過(guò)濾等，并使產(chǎn)品成本降低，質(zhì)量提高。它也存在一定的問(wèn)題，如在操作中膜面會(huì)21生物大分子的分離純化及其應(yīng)用課件223.鹽析法：將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。

4.等電點(diǎn)沉淀法：凈電荷為零，分子之間的靜電排斥力最小，因而容易聚集形成沉淀。該法適用于在等電點(diǎn)pH穩(wěn)定的蛋白質(zhì)。5.有機(jī)溶劑沉淀法：甲醇、乙醇、丙酮等（保持低溫），破壞蛋白質(zhì)的水化層，使蛋白質(zhì)的溶解度降低而沉淀。3.鹽析法：將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白23生物大分子的分離純化及其應(yīng)用課件246.高效液相色譜法

已成為蛋白質(zhì)物質(zhì)快速分離純化和分析的強(qiáng)有力手段，利用HPLC不僅可以在短時(shí)間內(nèi)完成分離的目的，而且還可制備生物活性多肽，因此分離純化和制備條件的選擇目前已成為學(xué)者研究的熱點(diǎn)。

蛋白質(zhì)在物理、化學(xué)及功能上的差異為蛋白質(zhì)的分離檢測(cè)提供了基礎(chǔ)，根據(jù)蛋白質(zhì)的大小、形狀、電荷、疏水性、功能等特性，以及蛋白質(zhì)的來(lái)源、實(shí)驗(yàn)要求等，可以選擇不同的模式來(lái)分離目標(biāo)蛋白。（HPLC）6.高效液相色譜法已成為蛋白質(zhì)物質(zhì)快速分離純化和256.1反相高效液相色譜分離機(jī)理蛋白質(zhì)的反相色譜中：①用非極性的反相介質(zhì)為固定相，以水溶性有機(jī)溶劑（如甲醇、乙腈、異丙醇）加強(qiáng)酸作流動(dòng)相（流動(dòng)相極性大于固定相）。②蛋白質(zhì)分子中既有親水性基團(tuán)（-OH，-NH、-COOH、SH等），也有疏水性基團(tuán)（如苯環(huán)、-CH3、-CH2和-CH等）。③在水溶液中，疏水性基團(tuán)有避開(kāi)水而親合其他疏水性基團(tuán)的傾向，即溶質(zhì)分子的非極性部分在水中傾向于與水的接觸面減小，促進(jìn)了其與填料（疏水性配基）的親合。④不同的蛋白質(zhì)在相同流動(dòng)相中由于疏水基團(tuán)多少、種類(lèi)以及表面分布情況不同，與填料的親合力也不同，從而得到分離。結(jié)果：疏水性強(qiáng)的蛋白質(zhì)親合力大,出峰遲;疏水性小的蛋白質(zhì)就容易被洗脫。

（RP-HPLC）6.1反相高效液相色譜分離機(jī)理蛋白質(zhì)的反相色譜中：（R26圖1人的膠原蛋白I型α1和α2鍵的色譜分離

e.g:圖1e.g:27

其分離蛋白質(zhì)和酶等生物大分子具有速度快、分離性能好，重復(fù)性好，溶劑和流動(dòng)相易除去等優(yōu)點(diǎn)。

在所有的液相色譜法中反相色譜的分離性能最好。但最大的缺點(diǎn)是很多蛋白質(zhì)或酶在分離過(guò)程中失活，而且回收的樣品中總含有有機(jī)溶劑。生物大分子的分離純化及其應(yīng)用課件286.2離子交換色譜

是最早被用于蛋白質(zhì)分離的一種方法,其是根據(jù)蛋白質(zhì)分子在一定pH和離子強(qiáng)度條件下所帶電荷的差異進(jìn)行分離的方法。其原理為以離子交換樹(shù)脂作為固定相，樹(shù)脂上具有固定離子基團(tuán)及可交換的離子基團(tuán)。當(dāng)流動(dòng)相帶著組分電離生成的離子通過(guò)固定相時(shí)，組分離子與樹(shù)脂上可交換的離子基團(tuán)進(jìn)行可逆變換。根據(jù)組分離子對(duì)樹(shù)脂親合力不同而得到分離。

(IEC)6.2離子交換色譜是最早被用于蛋白質(zhì)分離的一29

這種技術(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于分離大多數(shù)的水溶性蛋白質(zhì)，還廣泛用于大豆多肽的分離純化。由于大豆多肽在一定pH和離子強(qiáng)度條件下帶電有微弱的差異，和離子交換劑靠靜電力結(jié)合在一起時(shí)，進(jìn)入介質(zhì)表面的可交換離子與帶相同電荷的蛋白質(zhì)分子就會(huì)發(fā)生交換的差異而分離。

這種技術(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于分離大多數(shù)的水溶性30

離子交換劑分為陰離子交換劑和陽(yáng)離子交換劑兩大類(lèi)：采用陰離子交換色譜分離乳蛋白時(shí)，一般是有針對(duì)性的分離某一種蛋白質(zhì)時(shí)的效果較好，如分離骨橋蛋白時(shí)，純度可以達(dá)到85%以上。對(duì)于乳品中一些等電點(diǎn)較高的蛋白質(zhì)，如乳鐵蛋白，采用強(qiáng)陽(yáng)離子色譜的分離手段則更為有效。離子交換劑分為陰離子交換劑和陽(yáng)離子交換劑316.3凝膠過(guò)濾層析

凝膠過(guò)濾層析亦稱(chēng)凝膠色譜、排阻色譜或分子篩，是利用凝膠把分子大小不同的物質(zhì)分離開(kāi)的一種方法。凝膠色譜的機(jī)理是分子篩效應(yīng)，在洗脫過(guò)程中，大分子不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部，而沿凝膠顆粒間的空隙最先流出柱外；而小分子可以進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，路徑長(zhǎng)、流速慢，以至最后流出柱外。因此，混合樣品如同“過(guò)篩”一樣，因分子大小的不同得以彼此分開(kāi)。

6.3凝膠過(guò)濾層析凝膠過(guò)濾層析亦稱(chēng)凝膠色譜、排阻32

它具有分離條件溫和，產(chǎn)品收率高，生物活性好，分離面寬等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于蛋白質(zhì)或多肽物質(zhì)的分離純化中。它具有分離條件溫和，產(chǎn)品收率高，生物活性337.電泳電泳：帶電粒子在電場(chǎng)作用下向著與其自身所帶的電荷相反的電極的移動(dòng)。電泳技術(shù)：樣品以一支持物為載體，在一定的電解質(zhì)溶液中，各組分在電場(chǎng)的作用下，以不同的速度進(jìn)行遷移，從而得到分離。電泳技術(shù)分類(lèi)：按支持物的不同，分為：凝膠電泳、紙上電泳和薄膜電泳等。按操作原理分為：一般電泳、等速電泳、等電聚焦電泳和免疫電泳等。對(duì)分離物的要求：在介質(zhì)中必須帶電。7.電泳電泳：帶電粒子在電場(chǎng)作用下向著與其自身所帶的電荷相反34

7.1凝膠電泳

7.1.1原理：不同帶電粒子在同一外加電場(chǎng)作用下泳動(dòng)的速度是不同的，泳動(dòng)度取決于帶電顆粒的性質(zhì)，顆粒所帶凈電荷越多、直徑越小，越接近球形、泳動(dòng)速度越大。此外，還與介質(zhì)PH值（蛋白質(zhì)為兩性電解質(zhì)，有一等電點(diǎn)，在不同pH值下所帶凈電荷的符號(hào)及數(shù)量均不同，在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速率也就不同了）、電場(chǎng)強(qiáng)度（電場(chǎng)強(qiáng)度越高，粒子泳動(dòng)速度越快）、離子強(qiáng)度（介質(zhì)離子強(qiáng)度越大，粒子的泳動(dòng)越慢。一般在0.02～0.2之間）、電滲等實(shí)驗(yàn)條件有關(guān)。主要介紹聚丙烯酰胺凝膠電泳

7.1凝膠電泳

7.1.1原理：不同帶電粒子在同一外加電場(chǎng)357.1.2丙烯酰胺凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)

①具有很高的分辨率。大小不同的分子在通過(guò)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的空隙泳動(dòng)時(shí)受到的阻力不同，大分子物質(zhì)受到的阻力比小分子的大。這樣就使聚丙烯酰胺凝膠電泳兼有分子篩和電泳的雙重功能，提高了分辨力。②凝膠空隙的大小可以人為地調(diào)節(jié)，以適應(yīng)不同分子量的樣品。③聚丙烯酰胺凝膠電泳中電滲現(xiàn)象很小。④凝膠機(jī)械強(qiáng)度較好，彈性大，易保存。⑤丙烯酰胺可以提得很純，不會(huì)污染樣品。

聚丙烯酰胺凝膠電泳常用的是平板電泳儀。裝置見(jiàn)下圖

7.1.2丙烯酰胺凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)①具有很高的分辨率。大小不367.1.3凝膠電泳的應(yīng)用

廣泛用于分離蛋白質(zhì)、酶和核酸等生物大分子及其他帶電的有機(jī)物。①生物大分子的分離及分子量測(cè)定:樣品組分在電泳中按照其帶電情況和分子大小不同而有不同的遷移率，在膠板上得到分離。在SDS不連續(xù)凝膠電泳中，樣品組分按分子量大小排列，分子量的對(duì)數(shù)與遷移率之間有一個(gè)線性關(guān)系。因此在電泳時(shí)加入標(biāo)準(zhǔn)分子量的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣，可以測(cè)定未知樣的分子量。②樣品組分的回收:凝膠電泳可以作μg級(jí)樣品的分離制備?；厥諛悠方M分的方法有：擴(kuò)散洗脫和電泳洗脫。

7.1.3凝膠電泳的應(yīng)用廣泛用于分離蛋377.2毛細(xì)管電泳

毛細(xì)管電泳是繼高效液相色譜之后，將電泳技術(shù)和色譜技術(shù)相結(jié)合的一種新的分離技術(shù)。它是以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，以毛細(xì)管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一類(lèi)液相分離技術(shù)。在高壓作用下，帶電粒子在毛細(xì)管內(nèi)的溶液中遷移，遷移速度等于電泳和電滲流的矢量和。各種粒子因遷移速度不同而實(shí)現(xiàn)分離，具有分離率高、快速、用量少等優(yōu)點(diǎn)，是分離蛋白質(zhì)及相關(guān)氨基酸和肽的有效工具。(CE)7.2毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳38七種分離模式：毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)、膠束電場(chǎng)毛細(xì)管電泳(MECC)、毛細(xì)管等速電泳(CITP)、毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)、毛細(xì)管等點(diǎn)聚焦(CIEF)、毛細(xì)管電色譜(CEC)、親和毛細(xì)管電泳(A毛細(xì)管電泳)。七種分離模式：39

毛細(xì)管電泳在蛋白質(zhì)分離分析中的應(yīng)用主要包括：肽和蛋白的鑒別分析、結(jié)構(gòu)分析、微量制備，以及蛋白的定量測(cè)定、純度檢測(cè)、非均一性檢測(cè)、穩(wěn)定性和動(dòng)力學(xué)研究。有學(xué)者對(duì)240例異常蛋白質(zhì)血癥患者標(biāo)本使用多通道毛細(xì)管電泳與瓊脂凝膠電泳對(duì)照，結(jié)果顯示毛細(xì)管電泳檢出異常蛋白質(zhì)敏感性高，且診斷結(jié)果一致。毛細(xì)管電泳在蛋白質(zhì)分離分析中的應(yīng)用主407.3等電聚焦電泳通過(guò)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異而分離蛋白質(zhì)的電泳方法。（IEF）7.3等電聚焦電泳通過(guò)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異而分離蛋41生物大分子的分離純化及其應(yīng)用課件42方法原理優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)凝膠層析分子篩的排阻效應(yīng)分辨力高、不會(huì)引起變性凝膠介質(zhì)昂貴、處理量有限離子交換層析各組份與離子交換劑親和力不同分辨力高、處理量較大需酸堿處理樹(shù)脂、操作耗時(shí)

電泳法等電點(diǎn)、分子量、電荷的差異分辨力很高、可連續(xù)制備儀器試劑昂貴鹽析法破壞水化膜和中和表面電荷操作簡(jiǎn)便、成本低、重復(fù)性好、對(duì)蛋白有保護(hù)作用分辨率差、純化倍數(shù)低、沉淀中混雜鹽分選擇性沉淀等電點(diǎn)、熱變性、酸堿變性等沉淀作用選擇性較強(qiáng)、方法簡(jiǎn)便、種類(lèi)較多應(yīng)用范圍較窄有機(jī)溶劑沉淀脫水作用和降低介電常數(shù)操作簡(jiǎn)便、分辨較強(qiáng)對(duì)蛋白質(zhì)或酶有變性作用親和層析蛋白質(zhì)與配體之間特殊的親和力分辨力很高局限性大高速與超速離心沉降系數(shù)或密度差異操作方便、容量大設(shè)備昂貴制備HPLC凝膠過(guò)濾、離子交換、反向色譜等分辯力很高、步驟少，儀器昂貴常用的蛋白質(zhì)分離純化方法

方法原理優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)凝膠層析分子篩的排阻效應(yīng)分辨力高、不會(huì)引起變438.聯(lián)用技術(shù)

蛋白質(zhì)的種類(lèi)很多，大多具有相似性，使用單一的分離純化手段已經(jīng)不能達(dá)到理想的效果。毛細(xì)管電泳分離純化效果好，但也存在處理樣品少、不能進(jìn)行制備等缺點(diǎn)，而HPLC可以進(jìn)行大規(guī)模制備，特別是反相高效色譜RPLC具有分離效果好，分辨率高，回收率高，但費(fèi)時(shí)、價(jià)高等特點(diǎn)，因此聯(lián)用技術(shù)在多肽分離純化中已顯示出巨大的優(yōu)越性。

8.聯(lián)用技術(shù)蛋白質(zhì)的種類(lèi)很多，大44參考文獻(xiàn)[1]高素蓮,周寧國(guó).現(xiàn)代分離純化與分析技術(shù)[M].北京.中國(guó)科學(xué)記住大學(xué)出版社,2004.[2]王海濤,林進(jìn).化學(xué)分離提純技術(shù)[M].北京.化學(xué)工業(yè)出版社,2012.[3]徐躍飛,孔英.生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京.科學(xué)出版社.2011.[4]傅小偉,金益英,周石磊,等.蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)研究進(jìn)展[J].廣東化工,2011,38(216):35-36.[5]張秀敏,張曼.毛細(xì)管電泳分離技術(shù)的進(jìn)展及其在蛋白質(zhì)分離中的應(yīng)用[J].標(biāo)記免疫分析與臨床,2009,16(5):3216-328.[6]戴勇.分子印跡技術(shù)在多肽、蛋白質(zhì)分離中的應(yīng)用[J].鹽城工學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2003,16(4):46-49．參考文獻(xiàn)[1]高素蓮,周寧國(guó).現(xiàn)代分離純化與分析技術(shù)[M].45Thanksforyourattention!!TheendThanksforyourattention!!The46Biomolecule生物分子

泛指生物體特有的各類(lèi)分子，是自然存在于生物體中的分子的總稱(chēng)，是組成生命的基本單位。包括生物大分子（蛋白質(zhì)、核酸、糖復(fù)合物等）小分子（如脂類(lèi)、激素、維生素等）Biomolecule生物分子泛指生物體特有的47生物大分子

生物大分子指的是作為生物體內(nèi)主要活性成分的各種分子量達(dá)到上萬(wàn)或更多的有機(jī)分子。常見(jiàn)的生物大分子包括蛋白質(zhì)、核酸、脂類(lèi)、糖類(lèi)。

一般分子量從幾千到幾百萬(wàn)。生物大分子生物大分子指的是作為生物體內(nèi)主要活性成48它們廣泛存在于各種生物體內(nèi)，與各種生命活動(dòng)息息相關(guān)。除了天然存在的外，還有生物工程培養(yǎng)和發(fā)酵的。生物大分子具有十分重要的生理功能和應(yīng)用價(jià)值。研究生物大分子的結(jié)構(gòu)、功能及應(yīng)用已成為生命科學(xué)的一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題。不論從動(dòng)植物和微生物體內(nèi)提取或用生物工程制備的生物大分子產(chǎn)品，都是組成十分復(fù)雜的混合物，在使用前都要分離和純化。生物大分子的分離純化及其應(yīng)用課件49

制備生物大分子的分離純化方法多種多樣，主要是利用它們之間理化性質(zhì)的差異。根據(jù)作用原理生物分子的分離、純化可分為以下幾種類(lèi)型：（1）根據(jù)分子極性大小和溶解度的不同，如溶劑提取技術(shù)、鹽析法、分配層析法、分級(jí)沉淀法等；（2）根據(jù)分子形狀和大小不同，如凝膠過(guò)濾層析等；（3）根據(jù)物質(zhì)吸附性質(zhì)不同，如選擇性吸附與吸附層析法等；（4）根據(jù)分子帶電性（電離性質(zhì)）的差異，如離子交換層析、電泳、等電聚焦法等。（5）根據(jù)配體特異性，如親和層析。制備生物大分子的分離純化方法多種多樣，主要是利用它們之間50影響提取效果的因素（1）pH值（2）鹽濃度（即離子強(qiáng)度）（3）溫度（4）水解酶（5）攪拌與氧化（6）有機(jī)溶劑影響提取效果的因素（1）pH值（2）鹽濃度（即離子強(qiáng)度）51（1）分離純化方法千差萬(wàn)別，沒(méi)有一種標(biāo)準(zhǔn)方法可通用于各種生物大分子的分離制備；（2）制備幾乎都是在溶液中進(jìn)行的，難以準(zhǔn)確估計(jì)和判斷pH值、溫度度等各種參數(shù)對(duì)溶液中各種組份的綜合影響；

生物大分子的分離純化有以下主要特點(diǎn)：（1）分離純化方法千差萬(wàn)別，沒(méi)有一種標(biāo)準(zhǔn)方法可通用于各種生物52（3）大多數(shù)生物大分子的含量極微，分離純化的步驟多，流程長(zhǎng)，有的目的產(chǎn)物甚至要經(jīng)過(guò)幾十步的操作才能達(dá)到所需純度；（4）分離純化過(guò)程中要保證目標(biāo)產(chǎn)物的活性。（3）大多數(shù)生物大分子的含量極微，分離純化的步驟多，流程長(zhǎng)，53蛋白質(zhì)的分離純化《生理學(xué)》提及蛋白質(zhì)的功能：(1)構(gòu)成組織與修補(bǔ)組織；(2)構(gòu)成酶和某些激素的成分；(3)增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，構(gòu)成抗體；(4)調(diào)節(jié)滲透壓；(5)供給熱能。蛋白質(zhì)的分離純化《生理學(xué)》提及蛋白質(zhì)的功能：54

蛋白質(zhì)具有廣泛的功能性質(zhì)，每一種性質(zhì)都會(huì)給食品及其加工過(guò)程帶來(lái)特定的效果。具有生理活性的蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)在維持現(xiàn)代人類(lèi)健康方面已必不可少，在醫(yī)療和食品領(lǐng)域已逐漸得到應(yīng)用。

如可將功能蛋白質(zhì)如乳清蛋白、蛋清蛋白、大豆蛋白等添加到食品中制得各種功能性食品。

正是由于蛋白質(zhì)與人類(lèi)生活密切相關(guān)，所以對(duì)其質(zhì)量和純度要求也越來(lái)越高。

55蛋白質(zhì)的分離純化是研究蛋白質(zhì)化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能、新蛋白質(zhì)的發(fā)現(xiàn)和疾病分子診斷的基礎(chǔ)；分子克隆中，下游的處理和分析鑒定，基因工程產(chǎn)品的制備，也需要蛋白質(zhì)的分離和純化。蛋白質(zhì)分離純化的總目標(biāo)是增加制品的純度，以增加單位蛋白質(zhì)重量中靶蛋白的含量或生物學(xué)活性以達(dá)到目的，即從蛋白混合物中設(shè)法去除不要的雜蛋白和變性的靶蛋白，使靶蛋白的產(chǎn)量達(dá)到最高值。蛋白質(zhì)的分離純化是研究蛋白質(zhì)化學(xué)組成、結(jié)56

分離純化的總體原則一是保證靶蛋白結(jié)構(gòu)的完整，防止降解和活性蛋白質(zhì)的變性；二是盡量滿足研究與診斷對(duì)靶蛋白純度的要求,純化蛋白質(zhì)總是希望純度和產(chǎn)率均高。分離純化的總體原則57蛋白質(zhì)分離純化的條件蛋白質(zhì)是一類(lèi)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、有生物活性的生物大分子，離開(kāi)天然的存在體系，其結(jié)構(gòu)與活性變得極不穩(wěn)定，因此從生物材料中提純各種靶蛋白均需要特定的條件，應(yīng)注意各種因素對(duì)靶蛋白的影響。蛋白質(zhì)分離純化的條件蛋白質(zhì)是一類(lèi)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、有生物活性58緩沖液

鹽、金屬離子和螯合劑.3.還原劑4.去垢劑5.增溶劑

6.蛋白酶抑制劑（pronaseinhibitor）7.蛋白質(zhì)的環(huán)境因素

①表面效應(yīng)的影響②溫度的影響③儲(chǔ)存緩沖液59

蛋白質(zhì)常存在于復(fù)雜的混合體系中，且穩(wěn)定性較差，對(duì)溫度、pH、機(jī)械剪切力等非常敏感、易于變性。傳統(tǒng)蛋白質(zhì)的分離方法有吸附沉淀、溶媒、萃取、離子交換法等，這些工藝往往繁雜，提取時(shí)間長(zhǎng)，消耗大量原料，能耗高。隨著生物技術(shù)的發(fā)展和對(duì)各種蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能研究的深入，對(duì)蛋白質(zhì)分離檢測(cè)研究也有了迅速發(fā)展，出現(xiàn)了許多高效的分離純化技術(shù)和手段，主要包括膜分離、高效液相色譜，毛細(xì)管電泳、分子印跡技術(shù)及聯(lián)用技術(shù)。蛋白質(zhì)常存在于復(fù)雜的混合體系中，且穩(wěn)定性較差，對(duì)60生物樣本蛋白質(zhì)的釋放（粉碎組織、裂解細(xì)胞）離心蛋白質(zhì)粗提取液鹽析有機(jī)溶劑沉淀等電點(diǎn)沉淀超速離心蛋白質(zhì)粗品離子交換凝膠過(guò)濾親和層析制備HPLC電泳蛋白質(zhì)純品預(yù)處理分離純化蛋白質(zhì)分離純化的一般技術(shù)路線生物樣本蛋白質(zhì)的釋放離心蛋白質(zhì)粗提取液鹽析有機(jī)溶劑沉淀等電點(diǎn)611.

離心技術(shù)簡(jiǎn)介

應(yīng)用強(qiáng)大的離心力，使物質(zhì)因沉降速度不同而進(jìn)行分離的方法叫離心技術(shù)。常用方法：差速離心，密度梯度離心和等密度離心。

1.1差速離心在離心管中進(jìn)行，樣品在離心時(shí)受離心作用移向離心管底部。不同物質(zhì)其大小、比重和形狀不同而沉降速度不同。在相同離心力的作用下，沉降速率大的先沉到底部。

注：沉降速度相差越大越能得到良好分離。只能是一種粗分技術(shù)，多次重復(fù)操作是可以改善回收純度的。

1.離心技術(shù)簡(jiǎn)介應(yīng)用強(qiáng)大的離心力，使物質(zhì)因621.2密度梯度離心用來(lái)分離沉降速度差不太大的顆粒。方法：將小量樣品置于一個(gè)從上而下密度變大的密度梯度液上進(jìn)行離心。若物質(zhì)比溶劑重，物質(zhì)才下沉；若物質(zhì)比溶劑輕，則物質(zhì)浮在其上面。所以在密度梯度液上面的樣品物質(zhì)，在離心時(shí)各物質(zhì)按其沉降速率的不同而沉降，到最后按各自的比重平衡停留在相應(yīng)密度的溶劑中。又叫速率區(qū)帶離心法1.2密度梯度離心用來(lái)分離沉降速度差不太大的顆粒。又叫速631.3離心技術(shù)的應(yīng)用①可以用于制備，也可以用于分析。②樣品量可大可小，小到0.2ml以下，大到幾千升。③分離的對(duì)象廣，包括各種亞細(xì)胞物質(zhì)，各種蛋白質(zhì)和酶，核糖核酸及其他一些生物大分子。1.3離心技術(shù)的應(yīng)用642.膜分法

又稱(chēng)超濾，以分子大小及形狀差異為依據(jù)的方法。利用離心力或壓力強(qiáng)行使水和其它小分子通過(guò)半透膜，而蛋白質(zhì)被截留在半透膜上的過(guò)程。由于超濾過(guò)程中，濾膜表面容易被吸附的蛋白質(zhì)堵塞，以致超濾速度減慢，截流物質(zhì)的分子量也越來(lái)越小。所以在使用超濾方法時(shí)要選擇合適的濾膜，也可以選擇切向流過(guò)濾得到更理想的效果。2.膜分法又稱(chēng)超濾，以分子大小及形狀差異為依據(jù)65膜分離技術(shù)在蛋白質(zhì)的分離純化方面具有非常廣闊的應(yīng)用前景，并向工業(yè)化發(fā)展。

e.g：學(xué)者用分離技術(shù)處理大豆乳清廢水，以超濾膜截流分子，幾乎可以回收所有多肽和蛋白質(zhì)，再用納濾膜進(jìn)行濃縮，回收了蛋白質(zhì)、低聚糖，又大大降低了廢水排放量，取到了滿意效果。膜分離技術(shù)在蛋白質(zhì)的分離純化方面具有非常66

它也存在一定的問(wèn)題，如在操作中膜面會(huì)發(fā)生污染，使膜性能降低，故又必須采用與工藝相適應(yīng)的膜面清洗方法；而且單采用膜分離技術(shù)效果有限，因此有時(shí)需將膜分離工藝與其他分離工藝組合起來(lái)應(yīng)用。但是可以預(yù)見(jiàn)，隨著膜分離技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，其勢(shì)必將取代那些耗能大、費(fèi)用高、處理不徹底、周期長(zhǎng)、易造成環(huán)境污染的傳統(tǒng)單元操作，如沉淀、離心、過(guò)濾等，并使產(chǎn)品成本降低，質(zhì)量提高。它也存在一定的問(wèn)題，如在操作中膜面會(huì)67生物大分子的分離純化及其應(yīng)用課件683.鹽析法：將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。

4.等電點(diǎn)沉淀法：凈電荷為零，分子之間的靜電排斥力最小，因而容易聚集形成沉淀。該法適用于在等電點(diǎn)pH穩(wěn)定的蛋白質(zhì)。5.有機(jī)溶劑沉淀法：甲醇、乙醇、丙酮等（保持低溫），破壞蛋白質(zhì)的水化層，使蛋白質(zhì)的溶解度降低而沉淀。3.鹽析法：將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白69生物大分子的分離純化及其應(yīng)用課件706.高效液相色譜法

已成為蛋白質(zhì)物質(zhì)快速分離純化和分析的強(qiáng)有力手段，利用HPLC不僅可以在短時(shí)間內(nèi)完成分離的目的，而且還可制備生物活性多肽，因此分離純化和制備條件的選擇目前已成為學(xué)者研究的熱點(diǎn)。

蛋白質(zhì)在物理、化學(xué)及功能上的差異為蛋白質(zhì)的分離檢測(cè)提供了基礎(chǔ)，根據(jù)蛋白質(zhì)的大小、形狀、電荷、疏水性、功能等特性，以及蛋白質(zhì)的來(lái)源、實(shí)驗(yàn)要求等，可以選擇不同的模式來(lái)分離目標(biāo)蛋白。（HPLC）6.高效液相色譜法已成為蛋白質(zhì)物質(zhì)快速分離純化和716.1反相高效液相色譜分離機(jī)理蛋白質(zhì)的反相色譜中：①用非極性的反相介質(zhì)為固定相，以水溶性有機(jī)溶劑（如甲醇、乙腈、異丙醇）加強(qiáng)酸作流動(dòng)相（流動(dòng)相極性大于固定相）。②蛋白質(zhì)分子中既有親水性基團(tuán)（-OH，-NH、-COOH、SH等），也有疏水性基團(tuán)（如苯環(huán)、-CH3、-CH2和-CH等）。③在水溶液中，疏水性基團(tuán)有避開(kāi)水而親合其他疏水性基團(tuán)的傾向，即溶質(zhì)分子的非極性部分在水中傾向于與水的接觸面減小，促進(jìn)了其與填料（疏水性配基）的親合。④不同的蛋白質(zhì)在相同流動(dòng)相中由于疏水基團(tuán)多少、種類(lèi)以及表面分布情況不同，與填料的親合力也不同，從而得到分離。結(jié)果：疏水性強(qiáng)的蛋白質(zhì)親合力大,出峰遲;疏水性小的蛋白質(zhì)就容易被洗脫。

（RP-HPLC）6.1反相高效液相色譜分離機(jī)理蛋白質(zhì)的反相色譜中：（R72圖1人的膠原蛋白I型α1和α2鍵的色譜分離

e.g:圖1e.g:73

其分離蛋白質(zhì)和酶等生物大分子具有速度快、分離性能好，重復(fù)性好，溶劑和流動(dòng)相易除去等優(yōu)點(diǎn)。

在所有的液相色譜法中反相色譜的分離性能最好。但最大的缺點(diǎn)是很多蛋白質(zhì)或酶在分離過(guò)程中失活，而且回收的樣品中總含有有機(jī)溶劑。生物大分子的分離純化及其應(yīng)用課件746.2離子交換色譜

是最早被用于蛋白質(zhì)分離的一種方法,其是根據(jù)蛋白質(zhì)分子在一定pH和離子強(qiáng)度條件下所帶電荷的差異進(jìn)行分離的方法。其原理為以離子交換樹(shù)脂作為固定相，樹(shù)脂上具有固定離子基團(tuán)及可交換的離子基團(tuán)。當(dāng)流動(dòng)相帶著組分電離生成的離子通過(guò)固定相時(shí)，組分離子與樹(shù)脂上可交換的離子基團(tuán)進(jìn)行可逆變換。根據(jù)組分離子對(duì)樹(shù)脂親合力不同而得到分離。

(IEC)6.2離子交換色譜是最早被用于蛋白質(zhì)分離的一75

這種技術(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于分離大多數(shù)的水溶性蛋白質(zhì)，還廣泛用于大豆多肽的分離純化。由于大豆多肽在一定pH和離子強(qiáng)度條件下帶電有微弱的差異，和離子交換劑靠靜電力結(jié)合在一起時(shí)，進(jìn)入介質(zhì)表面的可交換離子與帶相同電荷的蛋白質(zhì)分子就會(huì)發(fā)生交換的差異而分離。

這種技術(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于分離大多數(shù)的水溶性76

離子交換劑分為陰離子交換劑和陽(yáng)離子交換劑兩大類(lèi)：采用陰離子交換色譜分離乳蛋白時(shí)，一般是有針對(duì)性的分離某一種蛋白質(zhì)時(shí)的效果較好，如分離骨橋蛋白時(shí)，純度可以達(dá)到85%以上。對(duì)于乳品中一些等電點(diǎn)較高的蛋白質(zhì)，如乳鐵蛋白，采用強(qiáng)陽(yáng)離子色譜的分離手段則更為有效。離子交換劑分為陰離子交換劑和陽(yáng)離子交換劑776.3凝膠過(guò)濾層析

凝膠過(guò)濾層析亦稱(chēng)凝膠色譜、排阻色譜或分子篩，是利用凝膠把分子大小不同的物質(zhì)分離開(kāi)的一種方法。凝膠色譜的機(jī)理是分子篩效應(yīng)，在洗脫過(guò)程中，大分子不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部，而沿凝膠顆粒間的空隙最先流出柱外；而小分子可以進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，路徑長(zhǎng)、流速慢，以至最后流出柱外。因此，混合樣品如同“過(guò)篩”一樣，因分子大小的不同得以彼此分開(kāi)。

6.3凝膠過(guò)濾層析凝膠過(guò)濾層析亦稱(chēng)凝膠色譜、排阻78

它具有分離條件溫和，產(chǎn)品收率高，生物活性好，分離面寬等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于蛋白質(zhì)或多肽物質(zhì)的分離純化中。它具有分離條件溫和，產(chǎn)品收率高，生物活性797.電泳電泳：帶電粒子在電場(chǎng)作用下向著與其自身所帶的電荷相反的電極的移動(dòng)。電泳技術(shù)：樣品以一支持物為載體，在一定的電解質(zhì)溶液中，各組分在電場(chǎng)的作用下，以不同的速度進(jìn)行遷移，從而得到分離。電泳技術(shù)分類(lèi)：按支持物的不同，分為：凝膠電泳、紙上電泳和薄膜電泳等。按操作原理分為：一般電泳、等速電泳、等電聚焦電泳和免疫電泳等。對(duì)分離物的要求：在介質(zhì)中必須帶電。7.電泳電泳：帶電粒子在電場(chǎng)作用下向著與其自身所帶的電荷相反80

7.1凝膠電泳

7.1.1原理：不同帶電粒子在同一外加電場(chǎng)作用下泳動(dòng)的速度是不同的，泳動(dòng)度取決于帶電顆粒的性質(zhì)，顆粒所帶凈電荷越多、直徑越小，越接近球形、泳動(dòng)速度越大。此外，還與介質(zhì)PH值（蛋白質(zhì)為兩性電解質(zhì)，有一等電點(diǎn)，在不同pH值下所帶凈電荷的符號(hào)及數(shù)量均不同，在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速率也就不同了）、電場(chǎng)強(qiáng)度（電場(chǎng)強(qiáng)度越高，粒子泳動(dòng)速度越快）、離子強(qiáng)度（介質(zhì)離子強(qiáng)度越大，粒子的泳動(dòng)越慢。一般在0.02～0.2之間）、電滲等實(shí)驗(yàn)條件有關(guān)。主要介紹聚丙烯酰胺凝膠電泳

7.1凝膠電泳

7.1.1原理：不同帶電粒子在同一外加電場(chǎng)817.1.2丙烯酰胺凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)

①具有很高的分辨率。大小不同的分子在通過(guò)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的空隙泳動(dòng)時(shí)受到的阻力不同，大分子物質(zhì)受到的阻力比小分子的大。這樣就使聚丙烯酰胺凝膠電泳兼有分子篩和電泳的雙重功能，提高了分辨力。②凝膠空隙的大小可以人為地調(diào)節(jié)，以適應(yīng)不同分子量的樣品。③聚丙烯酰胺凝膠電泳中電滲現(xiàn)象很小。④凝膠機(jī)械強(qiáng)度較好，彈性大，易保存。⑤丙烯酰胺可以提得很純，不會(huì)污染樣品。

聚丙烯酰胺凝膠電泳常用的是平板電泳儀。裝置見(jiàn)下圖

7.1.2丙烯酰胺凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)①具有很高的分辨率。大小不827.1.3凝膠電泳的應(yīng)用

廣泛用于分離蛋白質(zhì)、酶和核酸等生物大分子及其他帶電的有機(jī)物。①生物大分子的分離及分子量測(cè)定:樣品組分在電泳中按照其帶電情況和分子大小不同而有不同的遷移率，在膠板上得到分離。在SDS不連續(xù)凝膠電泳中，樣品組分按分子量大小排列，分子量的對(duì)數(shù)與遷移率之間有一個(gè)線性關(guān)系。因此在電泳時(shí)加入標(biāo)準(zhǔn)分子量的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣，可以測(cè)定未知樣的分子量。②樣品組分的回收:凝膠電泳可以作μg級(jí)樣品的分離制備?；厥諛悠方M分的方法有：擴(kuò)散洗脫和電泳洗脫。

7.1.3凝膠電泳的應(yīng)用廣泛用于分離蛋837.2毛細(xì)管電泳

毛細(xì)管電泳是繼高效液相色譜之后，將電泳技術(shù)和色譜技術(shù)相結(jié)合的一種新的分離技術(shù)。它是以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，以毛細(xì)管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分之