尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)UrineProteinAnalysis黃輝教學(xué)目標(biāo)了解蛋白尿的定義一理解蛋白尿形成的原因和機(jī)制二掌握尿液蛋白質(zhì)檢查的檢測(cè)原理、方法學(xué)評(píng)價(jià)、質(zhì)量保證及臨床意義三教學(xué)內(nèi)容蛋白尿的定義一蛋白尿形成的原因和機(jī)制二尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)三尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)的臨床意義四一、蛋白尿的定義腎小球的濾過腎小管與集合管的重吸收腎小管的分泌正常人尿液中蛋白質(zhì)的含量很少！一、蛋白尿的定義健康人尿液蛋白質(zhì)含量很少，當(dāng)尿液蛋白質(zhì)超過150mg?24h-1或超過100mg?L-1時(shí),蛋白質(zhì)定性試驗(yàn)為陽性稱為蛋白尿(proteinuria)。

二、蛋白尿形成的原因和機(jī)制腎性蛋白尿renalproteinuria腎小球性蛋白尿glomerularproteinuria混

合

性

蛋

白尿mixedproteinuria腎小管性蛋白尿tubularproteinuria二、蛋白尿形成的原因和機(jī)制腎前性蛋白尿prerenalproteinuria溢出性蛋白尿overflowproteinuria二、蛋白尿形成的原因和機(jī)制腎后性蛋白尿postrenalproteinuria組織性蛋白尿histicproteinuria二、蛋白尿形成的原因和機(jī)制腎小球性蛋白尿：蛋白尿的選擇性選擇性蛋白尿：腎小球損傷程度較輕，以分子量4～9萬中相對(duì)分子量的白蛋白為主。非選擇性蛋白尿：腎小球損傷程度較重，尿液中大分子量蛋白質(zhì)和中分子量蛋白質(zhì)同時(shí)存在。二、蛋白尿形成的原因和機(jī)制蛋白尿種類病變部位尿液蛋白質(zhì)特點(diǎn)腎小球性蛋白尿腎小管性蛋白尿混合性蛋白尿溢出性蛋白尿組織性蛋白尿二、蛋白尿形成的原因和機(jī)制蛋白尿種類病變部位尿液蛋白質(zhì)特點(diǎn)腎小球性蛋白尿腎小球中分子量蛋白、大分子量蛋白質(zhì)增加腎小管性蛋白尿腎小管小分子量蛋白質(zhì)增加為主混合性蛋白尿腎小球、腎小管腎小球、腎小管受損程度不同而有一定的差異溢出性蛋白尿腎前性小分子量蛋白質(zhì)組織性蛋白尿腎小管、泌尿組織T-H蛋白質(zhì)增加為主三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)

尿液中有無蛋白質(zhì)？

尿液中蛋白質(zhì)的量？

尿液中有哪一類蛋白質(zhì)？三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)蛋白質(zhì)理化性質(zhì)蛋白質(zhì)的兩性電離和等電點(diǎn)蛋白質(zhì)的變性蛋白質(zhì)的沉淀蛋白質(zhì)的呈色反響尿液蛋白質(zhì)定性加熱乙酸法磺基水楊酸法干化學(xué)試帶法三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)定性：加熱乙酸法蛋白質(zhì)加熱蛋白質(zhì)變性蛋白質(zhì)沉淀稀乙酸三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)定性：加熱乙酸法方法經(jīng)典而準(zhǔn)確，為蛋白定性確證實(shí)驗(yàn)；特異性強(qiáng)，干擾因素少；靈敏度較低，為150mg/L；pH值、鹽離子濃度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)定性：磺基水楊酸法蛋白質(zhì)酸性條件氨基酸陽離子蛋白鹽沉淀磺酸根離子三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)定性：磺基水楊酸法操作簡便、反響靈敏、結(jié)果顯示快；檢測(cè)靈敏度高，為50mg/L；造影劑、青霉素鉀鹽等可以造成假陽性。三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)定性：干化學(xué)試帶法蛋白質(zhì)酸堿指示劑復(fù)合物+酸堿指示劑電離發(fā)生顏色改變尼龍膜層：防止大分子物質(zhì)對(duì)反響污染。碘酸鹽層：破壞維生素C等干擾物質(zhì)。試劑層：與尿中所檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)發(fā)生反響。支持層：塑料片，起支持作用。試帶組成尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蚋苫瘜W(xué)分析儀工作原理示意圖機(jī)械系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)電路系統(tǒng)三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)定性：干化學(xué)試帶法操作簡便、快速、易于標(biāo)準(zhǔn)化；對(duì)球蛋白、本周蛋白的敏感度低；不同類型試帶靈敏度有一定的區(qū)別，在70～100mg/L。三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?如何選擇這些定性方法？尿液蛋白質(zhì)定性三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)定性實(shí)驗(yàn)方法操作性靈敏度實(shí)驗(yàn)干擾因素加熱乙酸法較復(fù)雜150mg?L-1尿液中鹽濃度磺基水楊酸法簡便50mg?L-1藥物及造影劑干化學(xué)試帶法簡便100mg?L-1對(duì)球蛋白不敏感三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)定性采用干化學(xué)法或磺基水楊酸法進(jìn)行尿蛋白初查。加熱乙酸法作為尿蛋白定性確證實(shí)驗(yàn)。當(dāng)不同定性實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果不一致時(shí)如何處理？三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)1.尿液中存在的蛋白質(zhì)為球蛋白。加強(qiáng)與臨床醫(yī)師的溝通非常必要！磺基水楊酸法陽性，干化學(xué)試帶法為陰性2.蛋白質(zhì)含量介于兩種方法靈敏度之間。3.尿液中含有青霉素或者造影劑等物質(zhì)。三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)定量雙縮脲法比濁法染料結(jié)合法需要對(duì)尿液標(biāo)本進(jìn)行濃縮處理！方法原理雙縮脲法蛋白質(zhì)與堿性銅溶液作用，形成紫色縮合物。比濁法酸性條件下，生物堿類試劑與蛋白質(zhì)結(jié)合沉淀。染料結(jié)合法染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后最大吸收峰發(fā)生漂移。三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)定量三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?如何選擇這些定量方法？方法方法優(yōu)缺點(diǎn)雙縮脲法蛋白質(zhì)測(cè)定經(jīng)典方法，但靈敏度較低比濁法操作簡便，線性范圍窄，影響因素多染料結(jié)合法顯色穩(wěn)定，容易對(duì)比色器皿造成污染尿液蛋白質(zhì)定量三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)定量1.根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件選擇適宜的定量方法。2.衛(wèi)生部臨檢中心推薦雙縮脲法和麗春紅S法。3.加強(qiáng)尿液蛋白質(zhì)定量的質(zhì)量控制非常必要！尿液蛋白質(zhì)分類SDS凝膠電泳雙向凝膠電泳??????三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)分類：SDS凝膠電泳SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合，消除了蛋白質(zhì)分子中的電荷差異，再通過聚丙烯酰胺的分子篩作用，將蛋白質(zhì)按分子量大小相互別離。三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞簶?biāo)本葡聚糖、PEG等SDS凝膠電泳染色、光密度掃描1234Alb小分子量蛋白大分子量蛋白1腎小球性蛋白尿2腎小管性蛋白尿3生理性蛋白尿4混合性蛋白尿三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)分類：雙向凝膠電泳蛋白組學(xué)的重要技術(shù)，第一向基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同進(jìn)行別離，第二向那么按蛋白質(zhì)分子量的不同進(jìn)行別離。三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍踪|(zhì)分類1.SDS凝膠電泳用于對(duì)尿液蛋白質(zhì)進(jìn)行分類。2.雙向凝膠電泳主要用于科學(xué)研究。三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)質(zhì)量保證分析前質(zhì)量控制；分析中質(zhì)量控制：堅(jiān)持室內(nèi)質(zhì)控、遵守SOP操作規(guī)程、注意實(shí)驗(yàn)過程中的影響因素；分析后質(zhì)量控制：完善的報(bào)告審核制度，結(jié)果不符合時(shí)及時(shí)分析原因。生理性蛋白尿病理性蛋白尿四、尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)的臨床意義腎前性蛋白尿腎性蛋白尿腎后性蛋白尿患者，男，68歲，因浮腫、無尿入院。雙向凝膠電泳主要用于科學(xué)研究。蛋白質(zhì)含量介于兩種方法靈敏度之間。要明確診斷需要哪些進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)室檢查？檢測(cè)靈敏度高，為50mg/L；SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合，消除了蛋白質(zhì)分子中的蛋白尿形成的原因和機(jī)制postrenalproteinuria不同類型試帶靈敏度有一定的區(qū)別，在70～100mg/L。蛋白質(zhì)的兩性電離和等電點(diǎn)二、蛋白尿形成的原因和機(jī)制pH值、鹽離子濃度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。度較重，尿液中大分子量蛋白質(zhì)蛋白尿形成的原因和機(jī)制SDS凝膠電泳加強(qiáng)尿液蛋白質(zhì)定量的質(zhì)量控制非常必要！功能性蛋白尿〔functionalproteinuria〕體位性蛋白尿(posturalproteinuria)偶然性蛋白尿(accidentalproteinuria)四、尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)的臨床意義生理性蛋白尿病理性蛋白尿腎小球性蛋白尿腎小管性蛋白尿混合性蛋白尿溢出性蛋白尿組織性蛋白尿四、尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)的臨床意義患者，男，68歲，因浮腫、無尿入院。入院前因上呼吸道感染屢次使用慶大霉素和復(fù)方新諾明而出現(xiàn)浮腫，尿量進(jìn)行性減少。體格檢查：眼瞼浮腫，雙下肢可凹性水腫