第八章糖和苷第一頁，共70頁。8.4.2利用酸堿性或解離度差異分離利用酸堿性差異8.4.2.1鉛鹽沉淀法（同前述）8.4.2.2季銨鹽/氫氧化物沉淀法利用解離度差異8.4.2.3離子交換法(1)離子交換法(2)離子交換纖維素層析法(3)使用硼酸(pénɡsuān)處理的強堿性陰離子交換樹脂法第二頁，共70頁。8.4.2.2季銨鹽/氫氧化物(qīnɡyǎnɡhuàwù)沉淀法是一類乳化劑結(jié)構(gòu)式見教材應(yīng)用：可將酸性多糖從中性多糖中分離，并可再進一步細分為不同(bùtónɡ)類別的多糖。第三頁，共70頁。原理：1.季銨鹽/氫氧化物通常只與酸性多糖生成沉淀,使之分離。方法：控制(kòngzhì)季銨氫氧化物濃度可得到不同酸性多糖，控制(kòngzhì)pH<9。2.升高PH，某些中性糖也能被沉淀（—OH的解離度增大），方法：在不同pH下分步沉淀（酸性、中性、堿性等）得到不同多糖。季銨鹽/氫氧化物pH梯度沉淀加入硼砂緩沖液，某些中性糖也能被沉淀原理：糖與硼酸絡(luò)和，增強酸度，第四頁，共70頁。利用(lìyòng)解離度差異：8.4.2.3離子交換(lízǐjiāohuàn)法應(yīng)用(yìngyòng)：1.去雜質(zhì)(可解離雜質(zhì))：2.分離糖類(1)離子交換法(2)離子交換纖維素層析法(3)使用硼酸處理的強堿性陰離子交換樹脂層析法

第五頁，共70頁。去除：選用(xuǎnyòng)：得到：注意事項：１.去雜質(zhì)(zázhì)(可解離雜質(zhì)(zázhì))：酸、堿、鹽

（1）離子交換(lízǐjiāohuàn)法多糖、苷（供進一步分離）樹脂選型第六頁，共70頁。增大(zēnɡdà)其解離度２．分離(fēnlí)糖類酸性糖堿性(jiǎnxìnɡ)糖中性糖是否解離選用方法解離解離（2）離子交換

纖維素層析法不解離改進（3）硼酸處理的強堿性陰離子交換樹脂第七頁，共70頁。(2)．離子交換(jiāohuàn)纖維素層析法（離子交換(jiāohuàn)＋纖維素層析）陽離子交換(jiāohuàn)纖維素陰離子交換(jiāohuàn)纖維素常用型號：Ｐ１03，一般了解應(yīng)用：分離酸性/堿性多糖洗脫方法：不同濃度的緩沖溶液第八頁，共70頁。(3)硼酸處理的強堿性陰離子交換樹脂原理：中性糖與硼酸絡(luò)合（）可增加酸性增大(zēnɡdà)解離度，能選擇性交換。洗脫方法：不同濃度的硼酸鹽溶液應(yīng)用：單糖、低聚糖、中性多糖效果好缺點：洗脫體積大后處理煩第九頁，共70頁。8.4.2利用酸堿性或解離度差異分離小結(jié)兩沉淀(chéndiàn)（1）鉛鹽沉淀(chéndiàn)法（如前述）鹽試劑沉淀(chéndiàn)法（2）季銨氫氧化物沉淀(chéndiàn)法堿試劑沉淀(chéndiàn)法三交換(1)離子交換法(2)離子交換纖維素層析法(3)使用硼酸處理的強堿性陰離子交換樹脂層析法

第十頁，共70頁。糖和苷的分離(fēnlí)方法(I)--按分離(fēnlí)原理(或分離(fēnlí)方法)分類

8.4.1利用(lìyòng)溶解度差異分離8.4.2利用(lìyòng)酸堿性差異分離或解離度8.4.3利用(lìyòng)吸附性差異分離8.4.4利用(lìyòng)分子量差異分離11第十一頁，共70頁。8.4.3利用(lìyòng)吸附性差異8.4.3.1活性炭吸附(xīfù)法8.4.3.2纖維素柱層析靜態(tài)(jìngtài)吸附動態(tài)吸附第十二頁，共70頁。應(yīng)用(yìngyòng)：注意事項：8.4.3.1靜態(tài)(jìngtài)吸附去非糖()雜質(zhì)(zázhì)對水溶性低聚糖幾乎無不良影響須用動物性骨碳否則對蔗糖吸附較多（回收率低，僅43~87%）====親脂性第十三頁，共70頁。分離單糖(dāntánɡ)和低聚糖（含單糖(dāntánɡ)數(shù)目多者，下）先后8.4.3.2動態(tài)(dòngtài)吸附（活性碳柱層析）應(yīng)用(yìngyòng)：@１去雜質(zhì)：２分離糖：去無機鹽，水洗最洗下——利用活性炭選擇性吸附第十四頁，共70頁。１先水洗２漸增洗脫(xǐtuō)液中的乙醇濃度無機鹽先下，然后(ránhòu)是單糖逐步(zhúbù)洗出二糖、三糖、及更大低聚糖洗脫方法：@第十五頁，共70頁。１．活性炭預(yù)處理方法：鹽酸液煮沸，蒸餾水洗凈（2–3mol/L）２．需要增加洗脫速度，方法：（1）加壓（2）裝柱時，拌入等量硅藻土，弊：會使吸附容量(róngliàng)降低（3）或用４０-６０目稍粗的炭注意事項：第十六頁，共70頁。8.4.3利用(lìyòng)吸附性差異8.4.3.1活性炭吸附(xīfù)法8.4.3.2纖維素柱層析靜態(tài)(jìngtài)吸附動態(tài)吸附洗脫液：水/乙醇第十七頁，共70頁。糖和苷的分離方法(I)--按分離原理(yuánlǐ)(或分離方法)分類

8.4.1利用溶解度差異(chāyì)分離8.4.2利用酸堿性差異(chāyì)分離或解離度8.4.3利用吸附性差異(chāyì)分離8.4.4利用分子量差異(chāyì)分離18第十八頁，共70頁。8.4.4利用(lìyòng)差異分子量凝膠層析(cénɡxī)法應(yīng)用(yìngyòng)：1.去雜質(zhì)，無機鹽及小分子化合物下（進入凝膠內(nèi)部）方法：后2.分離糖、苷注意：比較活性炭吸附法第十九頁，共70頁。(1)分離分子量不同(bùtónɡ)的糖、苷@例如，低聚糖、苷、或多糖。大分子的糖（）洗下，比較活性炭法：大分子（）下先后2.分離(fēnlí)糖和苷第二十頁，共70頁。（2）分離形狀不同的分子(fēnzǐ)：如直鏈和支鏈多糖支鏈糖/苷（）下@先第二十一頁，共70頁。分離(fēnlí)低聚糖和苷：用孔隙（）的分離(fēnlí)多糖用孔隙（）的多糖純化去小分子雜質(zhì)用孔隙（）的小大小注意事項：凝膠選型第二十二頁，共70頁。糖和苷的分離方法(I)--按分離原理(yuánlǐ)(或分離方法)分類

8.4.1利用(lìyòng)溶解度差異分離8.4.2利用(lìyòng)酸堿性差異分離或解離度8.4.3利用(lìyòng)吸附性差異分離8.4.4利用(lìyòng)分子量差異分離§8.5糖和苷的分離(fēnlí)方法(II)--按分離(fēnlí)目的分類@@23第二十三頁，共70頁。8.5糖和苷的分離方法(II)--按分離目的(mùdì)分類@8.5.18.5.2分離(fēnlí)混合糖類或苷類細分總糖、總苷去非糖/苷雜質(zhì)(zázhì)精制總糖、總苷第二十四頁，共70頁。8.5.1除去非糖雜質(zhì)的方法----制備（精制(jīngzhì)）總糖、總苷思路?尋找差異首先要考慮性質(zhì)差異第二十五頁，共70頁。

糖親水

苷親水

雜質(zhì)

成分(chéngfèn)親水/親脂酸堿性解離度分子量分離(fēnlí)方法第二十六頁，共70頁。

糖親水中性

不解(bùjiě)離

可解離多為中、高分子量

苷親水

中性

雜質(zhì)親脂類親水類可解離

電解質(zhì)酸堿鹽不解離成分(chéngfèn)溶解性/極性酸堿性解離度分子量親水中性(zhōngxìng)酸性酸性堿性中性極性

大極性較大小分子或大分子中性酸性第二十七頁，共70頁。

糖親水中性

不解離

可解離

多為中、高分子量

苷親水

中性

雜質(zhì)

親脂親水

可解離

電解質(zhì)酸堿鹽成分(chéngfèn)親水/親脂酸堿性解離度分子量親水中性(zhōngxìng)酸性酸性堿性(jiǎnxìnɡ)中性極性

大極性較大不解離小分子或大分子分離方法第二十八頁，共70頁。(利用(lìyòng)差異）注意正確(zhèngquè)判斷差異類型分離(fēnlí)目的 方法 舉例除親脂性雜質(zhì)溶劑法吸附法親脂性溶劑抽提、萃取

(例如石油醚脫脂)活性炭吸附靜態(tài)極性糖和苷的精制除親水性雜質(zhì)(利用差異）極性溶劑法吸附法正丁醇萃?。ň栖眨┧艽汲粒ň贫嗵牵┗钚蕴恐鶎游龅诙彭?，共70頁。

糖親水中性

不解離

可解離

多為中、高分子量

苷親水

中性

雜質(zhì)

親脂親水

可解離

電解質(zhì)酸堿鹽成分(chéngfèn)親水/親脂酸堿性解離度分子量親水中性(zhōngxìng)酸性酸性(suānxìnɡ)堿性中性極性

大極性較大不解離小分子或大分子分離方法第三十頁，共70頁。不沉淀(chéndiàn)酸堿性成分被交換吸附,中性糖、苷成分流出除酸性成分()離子樹脂(shùzhī)除堿性成分()離子樹脂(shùzhī)除去酸堿性雜質(zhì)及部分(bùfen)中性雜質(zhì)鉛鹽沉淀酸性、酚性成分含酸性多糖酸根-

—陰陽離子+

—陽法離子交換法堿式醋酸鉛中性醋酸鉛另沉淀中性

、

成分含中性多糖目的方法 分離效果等 沉淀單糖、低聚糖、極性大的苷第三十一頁，共70頁。

糖親水中性

不解離

可解離

多為中、高分子量

苷親水

中性

雜質(zhì)

親脂親水

可解離

電解質(zhì)酸堿鹽成分(chéngfèn)親水/親脂酸堿性解離度分子量親水中性(zhōngxìng)酸性酸性堿性(jiǎnxìnɡ)中性極性

大極性較大不解離小分子或大分子分離方法第三十二頁，共70頁。分離目的 分離方法(fāngfǎ) 洗脫順序及原理除無機鹽離子交換(lízǐjiāohuàn)法活性碳層析凝膠層析后下先下后下被交換(jiāohuàn)吸附分子量小吸附弱進入凝膠內(nèi)部(可解離小分子）第三十三頁，共70頁。

糖親水中性

不解離

可解離

多為中、高分子量

苷親水

中性

雜質(zhì)

親脂親水

可解離

電解質(zhì)酸堿鹽成分(chéngfèn)親水/親脂酸堿性解離度分子量親水中性(zhōngxìng)酸性酸性(suānxìnɡ)堿性中性極性

大極性較大不解離小分子或大分子分離方法第三十四頁，共70頁。分子量大的雜質(zhì)(zázhì)下分子量小的雜質(zhì)(zázhì)下醇沉

蛋白(dànbái)沉淀劑透析法凝膠法活性炭沉淀(chéndiàn)多糖、蛋白質(zhì)精制單糖低聚糖和苷用于精制多糖（只沉蛋白，不沉多糖）@第三十五頁，共70頁。思考題？分離多糖等大分子水溶液時脫鹽可以選用的方法有哪些？簡述(jiǎnshù)其原理、要點透析、超濾、凝膠層析(cénɡxī)、離子交換、活性炭層析(cénɡxī)第三十六頁，共70頁。

糖親水中性

不解(bùjiě)離

可解離

多為中、高分子量

苷親水

中性

雜質(zhì)

親脂親水

可解離

電解質(zhì)酸堿鹽成分(chéngfèn)溶解性酸堿性解離度分子量親水多中性(zhōngxìng)酸性堿性中性極性

大極性較大不解離小分子或大分子方法中性酸性第三十七頁，共70頁。

糖親水中性

不解(bùjiě)離

可解離

多為中、高分子量

苷親水

中性

雜質(zhì)

親脂親水

可解離

電解質(zhì)酸堿鹽成分(chéngfèn)溶解性酸堿性解離度分子量親水多中性(zhōngxìng)酸性堿性中性極性

大極性較大不解離小分子或大分子方法中性酸性

溶劑法吸附法

分級醇沉蛋白沉淀劑凝膠活性炭離子交換法凝膠層析法活性炭層析鉛鹽沉淀離子交換第三十八頁，共70頁。8.5.2分離混合(hùnhé)糖類或苷類----細分總糖、總苷8.5.2.1先粗分為單糖/低聚糖、多糖(duōtánɡ)1醇沉法（）糖可溶（）糖沉淀多單糖(dāntánɡ)、低聚小多@

2活性炭層析3凝膠層析法選用（）孔隙（）糖先下第三十九頁，共70頁。8.5.2.2再細分單糖、低聚糖@活性炭層析――吸附性差異凝膠層析――分子量差異選用孔隙小的凝膠離子交換(lízǐjiāohuàn)層析――解離度差異離子交換(lízǐjiāohuàn)纖維素硼酸處理樹脂第四十頁，共70頁。8.5.2.3多糖再分離@粗分：１醇沉：乙醇分級沉淀法（或乙醚分段沉淀法）不同分子量２<堿沉>：季銨氫氧化物分段沉淀法不同酸堿性細分：３離子交換纖維素層析法４凝膠層析法5纖維素柱層析法6硼酸(pénɡsuān)處理的樹脂第四十一頁，共70頁。8.5.2分離混合(hùnhé)糖類或苷類----細分總糖、總苷8.5.2.4總苷的細分1分配(fēnpèi)柱層析法正相分配(fēnpèi)反相分配(fēnpèi)@

2聚酰胺柱層析法3活性炭柱層析法4凝膠柱層析法第四十二頁，共70頁。在提取分離之中，怎樣確認中間產(chǎn)物中是否含有糖或苷？在提取分離之后，如何(rúhé)確認終產(chǎn)品中是否含有糖或苷？第四十三頁，共70頁。第八章糖和苷§8.1結(jié)構(gòu)與分類掌握§8.2理化性質(zhì)熟悉、了解§8.3提取(tíqǔ)方法掌握§8.4分離方法(I)掌握§8.5分離方法(II)掌握各論檢識方法(fāngfǎ)熟悉、了解44第四十四頁，共70頁。8.5.1一般檢識方法（通用方法）8.5.1.1顯色反應(yīng)8.5.1.2純度鑒定8.5.1.3分子量測定8.5.２特征檢識方法8.5.２.1還原糖檢識8.5.２.2非還原糖檢識（包括苷）8.5.２.3單糖與結(jié)合糖區(qū)別(qūbié)檢識8.5.２.4其它專屬性檢查§8.5糖和苷的檢識方法(fāngfǎ)@第四十五頁，共70頁?；仡?huígù)“有機”:糖和苷檢識方法Molish反應(yīng)脫水反應(yīng)（糠醛形成反應(yīng)）第四十六頁，共70頁。呋喃(fūnán)甲醛糠醛

5-羥甲糠醛5-HMFA第四十七頁，共70頁。（通用(tōngyòng)方法）8.5.1.1顯色反應(yīng)：糠醛形成反應(yīng)（脫水反應(yīng)）

１．方法與現(xiàn)象（以Molish反應(yīng)為例）中藥(zhōngyào)水提液加α－萘酚１滴

搖勻

（裝試管(shìguǎn)）沿管壁加入濃H2SO4

兩溶液交界面產(chǎn)生有色環(huán)（紫紅色或其它色）第四十八頁，共70頁。2．原理(yuánlǐ)主要過程：（水解）脫水，縮合結(jié)合(jiéhé)糖（低聚糖、多糖、）苷濃無機酸單糖(dāntánɡ)＋濃無機酸脫水

糠醛或其衍生物＋酚類試劑縮合

有色物(水解)第四十九頁，共70頁。3.分類(fēnlèi)與特點(了解(liǎojiě))(2)Seliwanoff反應(yīng)（西里瓦諾夫反應(yīng)）：用６Ｎ鹽酸，間苯二酚，條件溫和，各種單糖顯色(xiǎnsè)時間及顏色不同4.試劑：無機酸酚類、芳胺等(1)Molish反應(yīng)：用濃H2SO4、α－萘酚迅速脫水，各種單糖無明顯差異（通用型）第五十頁，共70頁。Molish反應(yīng)陽性:表明有糖或苷存在（糖包括各種游離糖、結(jié)合(jiéhé)糖）Seliwanoff反應(yīng)陽性:區(qū)別某些不同的單糖（反應(yīng)時間、顏色不同）5．結(jié)果(jiēguǒ)判斷（適用范圍，應(yīng)用）了解(liǎojiě)第五十一頁，共70頁。8.5.1一般檢識方法（通用(tōngyòng)方法）8.5.1.1顯色反應(yīng)Molish反應(yīng)8.5.1.2純度鑒定(jiàndìng)8.5.1.3分子量測定第五十二頁，共70頁。8.5.1.2純度鑒定（區(qū)別(qūbié)單一成分或混合物）1.層析法（多用于單糖的鑒定(jiàndìng)，可用標準品對照）(1)平面層析（ＰＣ、ＴＬＣ）應(yīng)有圓整斑點，且無雜質(zhì)斑點出現(xiàn)展開劑：ＰＣ(常用)：n－BuOH：HOAc：H2O（４：１：５，上層）等硅膠ＴＬＣ：n－BuOH：Me2CO：H2O（４：５：１）等顯色劑：苯胺、鄰苯二甲酸等，不同的單糖常顯不同顏色其它：纖維素ＴＬＣ(2)

柱層析

ＧＣＨＰＬＣ單峰，較銳第五十三頁，共70頁。2．其它方法(fāngfǎ)（，多糖鑒定常用）比旋度：應(yīng)恒定示差折射法：折光率不變水解(shuǐjiě)法：糖組成恒定第五十四頁，共70頁。8.5.1一般檢識方法（通用(tōngyòng)方法）8.5.1.1顯色反應(yīng)Molish反應(yīng)8.5.1.2純度(chúndù)鑒定8.5.1.3分子量測定第五十五頁，共70頁。8.5.1.3分子量測定(cèdìng)了解由分子量可明顯區(qū)分單糖、低聚糖、多糖1.物理方法粘度法等2.質(zhì)譜法(實用)可聯(lián)用ＧＣ－ＭＳ（氣質(zhì)聯(lián)用）ＬＣ－ＭＳ（液質(zhì)聯(lián)用）3.凝膠層析(cénɡxī)法測多糖分子量，需標準品做標準曲線對照第五十六頁，共70頁。8.5.1一般(yībān)檢識方法（通用方法）8.5.1.1顯色反應(yīng)8.5.1.2純度鑒定8.5.1.3分子量測定§8.5糖和苷的檢識方法(fāngfǎ)@8.5.２特征檢識方法8.5.２.1還原糖檢識8.5.２.2非還原糖檢識（包括苷）8.5.２.3單糖(dāntánɡ)與結(jié)合糖區(qū)別檢識8.5.２.4其它專屬性檢查第五十七頁，共70頁。中藥(zhōngyào)水提液Fehling試劑(shìjì)Cu2O(磚紅色)Fehling試劑(shìjì)（弱氧化劑）：CuSO4與酒石酸鉀鈉的堿溶液混合而成。8.5.２.1還原糖檢識----Fehling（斐林）反應(yīng)１．方法與現(xiàn)象區(qū)分不同種類的糖以及糖和苷第五十八頁，共70頁。醛氧化成－COOH，Ｃu2＋被還原成Cu+析出沉淀（磚紅色(hóngsè)）醛的>CHO上連有Ｈ原子，易被氧化，>CHO

>C=O2．原理(yuánlǐ)：（了解）故醛糖呈陽性反應(yīng)。然而(ránér)果糖等酮糖也能呈陽性反應(yīng)?較弱的氧化劑如Tollen（土倫試劑）,Fehling溶液即可將醛氧化成相應(yīng)的羧酸，第五十九頁，共70頁。果糖等酮糖也能呈陽性反應(yīng)：在堿溶液(róngyè)中醛糖和酮糖能發(fā)生互變重排可異構(gòu)化成含醛糖的混合物，

第六十頁，共70頁。Fehling反應(yīng)(fǎnyìng)小結(jié)：醛陽性，酮陰性(yīnxìng)醛糖、酮糖都陽性（酮糖在堿性溶液中異構(gòu)化）@第六十一頁，共70頁。3．結(jié)果(jiēguǒ)判斷：（在糠醛形成反應(yīng)之后(zhīhòu)）進一步區(qū)分還原糖與非還原糖（大多為結(jié)合糖）或苷陽性:（有磚紅色Cu2O沉淀）則表明有還原糖存在；即單糖（含α－ＯＨ醛的醛糖、含α－ＯＨ酮的酮糖）或還原性雙糖（天然三糖及其以上，皆為非還原性糖，大多是在蔗糖的基礎(chǔ)上延長糖鏈）第六十二頁，共70頁。陰性：可能(kěnéng)是非還原性糖或苷類（非還原性低聚糖，多糖）還需結(jié)合下述8.5.２.2中的酸水解方法進一步確認。第六十三頁，共70頁。第六十五頁，共70頁。成分(chéngfèn)親水/親脂酸堿性解離度分子量2非還原(huányuán)糖檢識（包括苷）5糖和苷的檢識方法(fāngfǎ)@Molish反應(yīng)離子交換(lízǐjiāohuàn)法層析法（多用于單糖的鑒定(jiàndìng)，可用標準品對照）第二十七頁，共70頁。及更大低聚糖小分子2利用酸堿性或解離度差異分離小結(jié)方法：控制(kòngzhì)季銨氫氧化物濃度可得到不同（）糖先下（