血涂片的制備與

瑞氏染色基本原理血涂片制備與染色外周血涂片檢查是最有益的血液系統(tǒng)疾病檢查手段，能為臨床提供大量的信息。因此，血涂片制備和染色的質(zhì)量直接影響血細胞形態(tài)的檢驗結(jié)果。一張合格的血涂片應(yīng)該是厚薄適宜，血膜頭、體、尾分明，分布均勻，兩側(cè)留有一定的空隙，邊緣整齊。

一、血涂片制備（一）載玻片要求制備血涂片使用的載玻片要有很好的清潔度。新載玻片常有游離堿質(zhì)，應(yīng)用鉻酸清洗液或10%鹽酸浸泡24h，然后再徹底清洗。已用過的載玻片可在含有適量肥皂水或合成洗滌劑的水中煮沸20min，用熱水將肥皂和血膜洗去，再用自來水反復(fù)沖洗，擦干或烤干后備用。

（二）血涂片制備方法

1．手工推片法（1）薄血膜推片法（表1-4-2）：臨床常用的方法，主要用于觀察血細胞形態(tài)及儀器法檢測結(jié)果異常的復(fù)查。

（2）厚血膜涂片法：取新鮮血液1滴于載玻片的中央，用推片的一角將血滴由內(nèi)向外旋轉(zhuǎn)涂布，制成厚薄均勻、直徑約1.5cm的圓形血膜，待自然干燥后，滴加數(shù)滴蒸餾水，使紅細胞溶解，脫去血紅蛋白，傾去水，血涂片干燥后即可染色并用顯微鏡檢查。本方法特別適合檢查瘧原蟲、微絲蚴等。2．自動涂片法目前有許多型號的自動血液分析儀，配備有血涂片儀和染色儀，可以按照檢驗人員的指令執(zhí)行自動送片、取血、推片、標記和染色等任務(wù)。

【方法學(xué)評價】良好的血涂片是血細胞形態(tài)學(xué)檢查的前提。血涂片制備的方法學(xué)評價見表1-7?！举|(zhì)量保證】薄血膜推片法的質(zhì)量保證項目與評價見表1-8，血涂片質(zhì)量問題及可能的原因見表1-9。

（一）染料

1．堿性染料、酸性染料和復(fù)合染料，其組成與特點見表1-10-0。

（二）染色方法

1．Wright染色法（1）染色原理

1）物理吸附與化學(xué)親和作用：血涂片染色過程既有物理吸附作用，又有化學(xué)親和作用。由于血細胞內(nèi)不同結(jié)構(gòu)所含有的化學(xué)成分不同，對各種染料的親和力也不同（表1-10）。2）pH值的影響：血細胞多種成分屬于蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨著溶液的pH而定。因此，血細胞染色對氫離子濃度十分敏感。

染色時常用緩沖液（pH6.4～6.8）來調(diào)節(jié)染色時的pH值，以達到滿意的染色效果（表1-11）。

（2）試劑

1）Wright染液：Wright染液是由伊紅和亞甲藍溶解于甲醇而成。甲醇的作用：①溶解伊紅和亞甲藍。②具有很強的脫水作用，可以固定紅細胞形態(tài)，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。

2）磷酸鹽緩沖液（pH6.8）

（3）染色方法與結(jié)果判斷：染色方法見表1-11-1。2．Giemsa染色法（1）染色原理：與Wright染色法基本相同。Giemsa染色法加強了天青的作用，提高了噻嗪類染料的效果。（2）試劑：染液放置越久，其染色效果越好。

（3）染色：Giemsa染色法的步驟與方法見表1-11-2。3．Wright-Giemsa染色法Wright-Giemsa染色法結(jié)合了Wright染色法和Giemsa染色法的優(yōu)點。在Wright染液配方的基礎(chǔ)上，每1.0gWright染料添加0.3gGiemsa染料。染色步驟與Wright染色法相同。

【方法學(xué)評價】血涂片染色的方法學(xué)評價見表1-12?！举|(zhì)量保證】染色